国家自然科学基金(8107034)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
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- 相关机构：同济大学附属同济医院同济大学更多>>
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- 转化生长因子-β1对小鼠肝纤维化的促进作用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对实验性小鼠肝脏细胞发生上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的促进作用,进而加速肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的形成。方法建立小鼠CCl4诱导HF模型,随机分为正常对照组、HF组与TGF-β1处理组。取对数生长期肝细胞,0.25%胰蛋白酶液消化细胞,0.4%FBS/DMEM同步化处理24 h后,按TGF-β1 2.5、5、7.5 ng/ml作用24、96、144 h分组给予相应处理,相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞组织化学及免疫荧光方法对细胞表型进行鉴定。RT-PCR及Western blot检测EMT[成纤维细胞特异性蛋白-1(fibroblast specific protein-1,FSP-1),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),E-钙黏附素(E-cadherin,E-cad)]mRNA及蛋白表达情况。结果将含有TGF-β1无血清培养基刺激原代小鼠肝细胞48 h后可见较多肝细胞死亡,细胞数量减少,形态由多边形向梭形转变,96 h后小鼠肝细胞内出现凋亡小体,活细胞数量较少且大多数呈现间质细胞梭形形态。5 ng/ml的TGF-β1作用肝细胞96 h后,小鼠肝上皮细胞标志(E-cad)mRNA及蛋白表达逐渐减低,肝间质细胞标志(FSP-1和α-SMA)mRNA及蛋白表达逐渐升高(P<0.05)。结论 5 ng/ml的TGF-β1作用于HF的小鼠肝细胞96 h后,肝细胞发生EMT现象,TGF-β1有促进实验小鼠肝细胞的迁移、侵袭能力及细胞凋亡的作用,进而发生EMT导致HF。
- 毕婉蓉邢海林金彩霞
- 关键词：肝纤维化转化生长因子-Β1小鼠
- 上皮细胞-间质细胞转变在肝纤维化中的作用被引量：6
- 2012年
- 上皮细胞-间质细胞转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指在一定条件下上皮细胞失去上皮细胞的特征而获得成纤维细胞典型特点的变化过程。EMT在肾纤维化、肺纤维化研究较多,也有可能在肝纤维化时发生重要作用。肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)被认为是肝脏中成纤维细胞的主要来源,而肝实质上皮细胞的肝细胞在肝纤维化过程中的病理生理作用一直被忽略。在肝纤维化过程中,很可能也伴随有肝细胞的间质变,即有EMT的发生。因此,如果从肝纤维化时可能发生EMT的多个环节探索其阻断措施及其对肝纤维化的影响,将有助于了解肝纤维化的发病机制以及EMT在肝纤维化诊断中的价值,为肝纤维化的病因研究和建立有效的预防控制措施提供依据。
- 毕婉蓉杨长青金彩霞
- 关键词：肝纤维化转化生长因子Β1
- 小鼠肝纤维化肝脏细胞上皮-间质转换的研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨小鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)时,肝细胞发生的上皮-间质转换(epithelialmesenchymal transitions,EM T)的变化。方法建立小鼠CCl4诱导HF模型,随机分为模型组与正常对照组,每周2次,分别于第2、4、6、8、10、12周分批处死大鼠。用密度梯度离心和贴壁培养相结合的方法分离培养小鼠肝细胞,免疫荧光方法对细胞表型进行鉴定,采用H-E及Massion染色等观察E-钙粘附素(E-cadherin,E-cad)、成纤维细胞特异性蛋白-1(fibroblast specific protein-1,FSP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SM A)的表达。用免疫荧光显微镜及激光共聚焦定位分析观察EM T蛋白[FSP-1、白蛋白(albumin)、α-SMA、波形蛋白(vimentin,VM)、胶原Ⅰ(collagen Ⅰ)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、N-钙粘附素(N-cadherin,N-cad)、E-cad]表达情况。结果小鼠HF时,肝细胞存在EMT现象。H-E、Massion染色及免疫荧光均显示,随着HF的程度加重,小鼠肝上皮细胞标志(E-cad、Albumin)逐渐减低,肝间质细胞标志(N-cad、FSP-1、VM、Collagen Ⅰ、FN及α-SMA)逐渐升高(P<0.05)。结论实验性小鼠HF的进程中,肝细胞发生EMT现象。
- 毕婉蓉杨长青吴艳红郑圆媛王兴媛
- 关键词：肝纤维化肝细胞
- Wnt信号通路参与实验性小鼠肝纤维化的研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨Wnt信号通路对实验性小鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的促进作用。方法建立小鼠CCl4诱导HF模型,随机分为正常对照组、HF模型组与Wnt处理组。体内实验对小鼠腹腔注射Wnt3A与Wnt11各5 ng/ml,每周2次,4周后获得肝组织;体外实验Wnt处理组为正常小鼠肝细胞在含有Wnt 5 ng/ml无血清培养基培养2周后,RT-PCR法检测肝细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏附素(E-cadherin,E-cad)、Wnt3A,Wnt5A与Wnt11。免疫荧光显微镜及激光共聚焦定位法分析肝细胞形态学变化。对培养细胞进行诱导分化,Massion染色法观察。结果体内试验HF小鼠肝细胞Wnt3A与Wnt11的免疫荧光分析及Massion染色显示,经Wnt3A与Wnt11处理后的小鼠肝上皮细胞标志(E-cad)减低,肝间质细胞标志(α-SMA)升高(P<0.05),发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)。体外试验HF小鼠肝细胞RT-PCR分析表明:HF组与Wnt处理组与正常对照组比较α-SMA、Wnt3A、Wnt5A、Wnt11表达明显增加,E-cad表达明显减少(P<0.05)。病理学支持Wnt处理组显示了类似HF的小鼠肝细胞发生EMT的形态学改变。结论研究表明Wnt信号通路参与了小鼠HF的过程,其机制可能是在实验性小鼠肝上皮细胞中通过下调内源的某些自分泌信号抑制因子,而诱导细胞启动EMT程序,从而导致HF。
- 毕婉蓉邢海林金彩霞
- 关键词：肝纤维化肝细胞
