北京市自然科学基金(5042022)
- 作品数：7 被引量：22H指数：4
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- 转铁蛋白受体及其在药物运输中的作用被引量：7
- 2004年
- 血脑屏障的存在阻止了中枢神经系统疾病许多潜在治疗药物的通过。近年来主要利用脑毛细血管内皮细胞膜中的转运蛋白 ,如转铁蛋白受体、胰岛素受体等 ,将外源药物与这些受体的特异性抗体相连 ,通过受体介导的内吞作用将药物转运到脑组织中。转铁蛋白受体在抗癌药物定向运输及恶性肿瘤细胞基因治疗中的研究已经处于临床阶段。
- 赵莉霞颜冰黄培堂
- 关键词：转铁蛋白受体
- 转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素融合基因的克隆及其在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：4
- 2006年
- 目的:转铁蛋白受体特异性富含于血脑屏障和肿瘤细胞的表面,是当前中枢神经系统疾病和肿瘤治疗中定向转运的重要靶标。拟获得在大肠杆菌中能高效可溶表达的转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素(SA)的重组融合蛋白。方法:根据GenBank数据库报道的SA的核苷酸序列分段合成基因,连接后经PCR获得完整的基因片段,插入pGEM-T载体中测序。将序列正确的SA基因与大鼠转铁蛋白受体单链抗体基因ox26-scFv分别插入原核表达载体pTIG-Trx中,构建重组表达克隆pTIG-Trx/scFv-SA,并在大肠杆菌中诱导表达。ELISA检测融合蛋白的生物学活性。结果:对pGEM-T/SA克隆的测序结果显示,合成的SA基因与文献报道相符。重组融合蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,约占菌体上清总蛋白量的30%;ELISA结果表明该融合蛋白具备与转铁蛋白受体和生物素的结合的双重活性。结论:有活性的重组融合蛋白的获得为构建一个通用性的以转铁蛋白受体介导的血脑屏障和肿瘤转运靶向载体打下了基础。
- 颜冰赵莉霞黄培堂
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体链亲和素转运
- 抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定被引量：4
- 2006年
- 根据转铁蛋白受体和转铁蛋白特异性结合的性质,利用亲和纯化的方法从胎盘中提取转铁蛋白受体。以转铁蛋白受体为抗原包被免疫管,从全合成人源噬菌体单链抗体库中筛选其抗体。对筛选到的抗体进行特异性鉴定后,将抗体基因插入表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后获得可溶性表达。HeLa细胞的免疫组化结果显示,表达的抗体可以与转铁蛋白受体结合。表达产物经Ni-NTA金属螯和层析柱纯化、脱咪唑后,从尾静脉注射小鼠。1h后,去除血液及毛细血管的干扰,在脑实质中检测到了抗体的存在,说明该抗体可以通过血脑屏障。
- 赵莉霞颜冰许龙蒋世卫张莹莹杨志新周晓巍黄培堂
- 抗转铁蛋白受体单链抗体的可溶性表达及其对脑的靶向性研究被引量：6
- 2004年
- 分段合成大鼠抗转铁蛋白受体单链抗体基因 (ox2 6_scFv) ,经三轮PCR拼接成 794bp的完整片段。测序后构建pTIG_Trx ox2 6_scFv表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得了可溶性表达 ,经Ni_NTA金属鏊合层析柱纯化 ,在2 9kD处可见单一条带。大鼠GH3细胞免疫组化显示 ,该单链抗体能识别并与转铁蛋白受体结合。将单链抗体尾静脉注射大鼠 ,于鼠脑组织切片上可见阳性染色 ,尤其是脑血管处着色明显 ,说明该单链抗体对脑血管具有较好的靶向作用 ,并在受体的介导下通过了血脑屏障。
- 颜冰朱恒奇黄培堂
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体血脑屏障可溶性表达药物转运
- 抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定
- 2006年
- 目的:从全人源噬菌体抗体库中筛选抗转铁蛋白受体(TfR)的抗体。方法:从HeLa细胞中提取总RNA,分两段反转录TfR胞外区cDNA,经两轮PCR后,获得胞外区基因。测序正确后,将其插入表达载体pPROEXTMHTa中,并在E.coliBL21(DE3)中表达。目的蛋白通过NiNTA金属螯合层析柱进行纯化、复性。用复性的TfR包被免疫管,从库容为1013cfu/L的全合成人源噬菌体单链抗体库中,筛选抗TfR的抗体。结果:得到约1.9kb的TfR胞外区基因,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达;利用纯化、复性的TfR从抗体库中筛选到了8个可与人TfR特异性结合的单链抗体。结论:利用TfR在大肠杆菌表达的复性产物,可以筛选到与天然TfR特异性结合的单链抗体。
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- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体
- 人转铁蛋白受体及其特异性抗体的制备
- 2006年
- 目的:从胎盘中提取转铁蛋白受体并获得抗转铁蛋白受体的抗体。方法:人新鲜胎盘组织被破碎后,用去污剂TritonX-100裂解细胞膜,释放膜蛋白。利用膜蛋白中的转铁蛋白受体能与铁-转铁蛋白复合物特异性结合的特性对其进行亲和纯化。对纯化得到的目的蛋白,经脱盐后进行ELISA及肽质量图谱分析,证明为所需的转铁蛋白受体后,以其包被免疫管,从全合成人源噬菌体抗体库中筛选抗体。结果:从人源噬菌体抗体库中筛选到5个能够与转铁蛋白受体特异性结合的噬菌体单链抗体。结论:以人源转铁蛋白受体为抗体,可从全人源噬菌体抗体库中筛选到其特异性的抗体。
- 赵莉霞颜冰朱恒奇许龙黄培堂
- 关键词：胎盘转铁蛋白受体噬菌体抗体库单链抗体
- 转铁蛋白受体单链抗体与BDNF融合蛋白的表达及活性鉴定被引量：2
- 2006年
- 脑源性神经营养因子(BDNF)对中枢神经系统的多种神经元具有营养、修复和保护功能,但因无法通过血脑屏障限制了其应用。利用抗转铁蛋白受体(TfR)的单链抗体(ox26scFv)作为脑转运载体,分别扩增单链抗体和BDNF基因,插入pTIGTrx载体,构建融合基因表达载体pTIGTrx/scFvBDNF,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效表达。经NiNTA金属螯合层析柱纯化后,在41kDa处可见目的纯化条带。大鼠GH3细胞免疫酶染色显示,ScFvBDNF融合蛋白能与转铁蛋白受体特异性结合,同时能够促进鸡胚背根节神经突起的生长,具备了BDNF的生物学活性。为使BDNF能够跨越血脑屏障成为中枢神经系统的治疗药物打下了实验基础。
- 颜冰范明黄培堂
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体脑源性神经营养因子血脑屏障
