中国博士后科学基金(56890)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
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- 连接蛋白基因一个新致聋突变体p.Y155X及功能分析被引量：7
- 2010年
- 目的 观察连接蛋白（connexin 26,CX26）基因的一个新致聋突变c.465T→A,P.Y155X,在体外表达细胞功能的改变,以探讨其致聋的可能机理.方法 常染色体隐性遗传耳聋家系的先证者外周血抽提DNA,DNA直接测序法分析CX26基因突变.将在该家系发现的突变c.465T→A,P.Y155X和野生型CX26（wtCX26）定向克隆到pEGFP-N1质粒,构建CX26 p.Y155X-EGFP及wtCX26-EGFP融合蛋白表达载体,转染HeLa细胞,Western印迹分析蛋白的表达,共聚焦显微镜观察突变蛋白和野生型CX26在HeLa细胞的定位及有无间隙连接斑形成,染料转移实验分析间隙连接的功能.结果 在该耳聋家系发现CX26基因一个新的致聋突变：c.465T→A,P.Y155X.CX26 P.Y155X突变体在HeLa细胞表达的突变蛋白的分子量小于野生型蛋白分子量;突变蛋白在细胞质表达,不能分布到细胞膜和形成间隙连接,无染料转移.野生型表达于细胞膜并形成间隙连接斑,能转移染料.结论 CX26 P.Y155X突变体在翻译后不能从细胞内转运到细胞膜,不能形成间隙连接通道.CX26基因c.465T→A,P.Y155X导致常染色体隐性遗传性聋.
- 杨中纯肖自安谢鼎华夏昆
- 关键词：连接蛋白基因突变耳聋
- 镍钛合金在豚鼠听泡的生物相容性观察被引量：3
- 2010年
- 目的探讨镍钛形状记忆合金(nitinol,NiTi)植入体在豚鼠听泡的生物相容性。方法健康、听觉灵敏的纯白红目豚鼠50只,一耳为实验组(NiTi植入组,50耳),其中25只对侧耳为对照组I[纯钛(Ti)植入组],另25只对侧耳为对照组II(空白组)。分别于术后7、14、28、56、112d随机处死含对照组I和对照组II的豚鼠各5只,观察听泡内有无肉芽生长等炎性反应、材料外观有无蚀斑和颜色改变,以Sirion200场发射扫描电镜(FEI公司,美国)观察材料表面新生组织,GENESIS60SEDAX能谱仪(EDAX公司,美国)能谱分析新生组织的元素构成。结果 NiTi及Ti植入体表面均有新生骨骼样组织生长,有纤维状物与听泡壁及听小骨相连,周围无明显肉芽组织,植入材料表面无蚀斑和颜色改变,有新生骨骼样组织形成,从术后7d的零星点状或条索状逐渐增多交织成网状到112天时形成板状,能谱分析证实为骨组织,但NiTi植入组新生组织中含有极微量的镍(Ni)。结论 NiTi在豚鼠听泡有很好的生物相容性,但有微量的Ni释放,其生物毒性需进一步观察。
- 张媛媛肖自安李周徐国富黄伯云
- 关键词：镍钛形状记忆合金生物相容性
- 抑癌基因CX26在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义被引量：4
- 2008年
- 目的:观察抑癌基因CX26的mRNA和蛋白质在喉鳞状细胞癌中的表达情况,探讨CX26基因与喉鳞状细胞癌生物学行为的关系,及其与喉鳞状细胞癌发生和发展的分子机制。方法:38例喉鳞状细胞癌患者,每例患者均同时在喉癌切除手术时从喉癌肿瘤组织中心部位取癌组织(喉癌组),在肿瘤边缘外1.0cm部位取喉癌旁组织(对照组),分别采用半定量RT-PCR检测CX26mRNA的表达水平,冷冻切片免疫组织化学方法检测CX26蛋白的表达情况。结果:RT-PCR结果显示,CX26mRNA在喉癌组和对照组中均呈阳性表达;经半定量分析,CX26mRNA在喉癌组中的表达较对照组明显降低(P<0.05);免疫组织化学发现,CX26蛋白在18例(47.4%)患者的喉癌组织呈阳性表达,在34例(89.5%)患者的喉癌旁组织呈强阳性表达,CX26蛋白在两者中的阳性表达差异有统计学意义(P<0.05),并且伴有细胞内定位的改变;同时发现,CX26蛋白阳性表达率和CX26基因mRNA的表达水平在Ⅲ期和Ⅳ期喉癌组明显低于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.05),有颈淋巴结转移者明显低于无转移者(P<0.05),并且其表达水平随病理分化程度的降低而降低(P<0.05)。结论:CX26与喉癌的发生和发展关系密切,并可能与喉癌的预后有关。
- 肖自安张才云谢鼎华曾益慈杨新明夏昆刘伏友黄伯云
- 关键词：喉肿瘤CX26MRNA
- CX26不同结构域错义突变体的表达和定位被引量：1
- 2010年
- 目的探讨CX26蛋白质的9个结构域上的不同错义突变体在细胞内的表达及功能改变的异同,初步研究CX26不同错义突变体的致聋机理。方法在CX26的9个结构域中各选择1个致聋的错义突变(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R165W、p.S199F、p.L214P),应用重叠区扩增基因拼接法和长引物快速法,构建成与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的载体,野生型CX26-EGFP作对照,脂质体转染HeLa细胞,Westernblot分析蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察各突变体在细胞膜上有无间隙连接斑形成。结果 CX26的9个结构域上的各1个错义突变体在HeLa细胞中均有表达,其中p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.vR165W突变体能在细胞膜上表达并形成间隙连接斑,p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体在细胞浆中表达,在细胞膜无表达,无间隙连接斑形成。结论 CX26的p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.R165W突变体在细胞内能被转运到细胞膜并形成间隙连接,而p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体失去被转运到细胞膜的功能,不能形成间隙连接。CX26的不同错义突变的致聋机制可能不同,与突变点所在的结构域可能没有相关性。
- 杨中纯肖自安谢鼎华
- 关键词：突变体
- Stathmin与间隙连接蛋白26相互作用并在小鼠耳蜗表达
- 2010年
- 目的筛选和鉴定连接蛋白26(connexin26,CX26)的相互作用蛋白质,分析其在小鼠内耳的表达,探讨与听觉的关系。方法酵母双杂交技术筛选CX26的相互作用蛋白质。在体外真核细胞表达系统HEK293细胞内过表达人CX26和相互作用蛋白质,观察它们的定位,并用免疫共沉淀实验观察在体外真核细胞中是否存在相互作用。进一步在小鼠脑组织中用免疫共沉淀方法验证CX26和相互作用蛋白质在真核生物体内的相互作用。逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析相互作用蛋白质在小鼠耳蜗的表达。结果酵母双杂交实验筛选和鉴定到stathmin与CX26相互作用,两者在体外过表达系统HEK293真核细胞中有共定位,免疫共沉淀实验证实在体外真核细胞和真核生物体内存在相互作用,而且stathmin在小鼠耳蜗表达。结论stathmin与CX26相互作用,并且在小鼠耳蜗表达。
- 杨中纯肖自安谢鼎华
- 关键词：STATHMINCX26相互作用蛋白质酵母双杂交免疫共沉淀
