军队“十二五”重点项目(BWS11C040)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：军队“十二五”重点项目国家自然科学基金更多>>
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- 慢病毒转导增强型绿色荧光蛋白对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响被引量：5
- 2013年
- [目的]研究慢病毒载体(lentiviral vectors,LVs)介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)标记大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的可行性及对细胞生物学特性的影响。[方法]采用密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs,经Lenti-emGFP/hygro慢病毒载体转染和潮霉素药筛,镜下观察细胞形态和eGFP表达情况,MTT法检查转染前后细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞表面标记物(CD34、CD44、CD45、CD90)和eGFP,检测转染后细胞的成骨、成脂分化潜能并分别行茜素红染、油红O染色鉴定。[结果]大鼠BMSCs呈成纤维细胞样形态,漩涡样状排列,转染后细胞形态不变,并高效表达eGFP,两组细胞增殖活力一致,流式细胞仪检测显示,转染后的P3代大鼠BMSCs-eGFP的eGFP阳性率为99.97%,转染前后,两组细胞CD34和CD45阳性率低于2%,而CD44和CD90阳性率高于99%。转染后的P3代大鼠BMSCs-eGFP成骨诱导后,茜素红染色,可见呈桔红色的块状钙结节,成脂诱导后,油红O染色显示有大量红色脂质沉淀,成骨成脂诱导过程中,eGFP持续表达。[结论]Lenti-emGFP/hygro转染大鼠BMSCs并经潮霉素药筛后,eGFP可稳定高效表达,对细胞的生物学特性无明显影响,是一种较为理想的标记方法。
- 蒋涛任先军阴洪田永阳周长立王开见
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因转染慢病毒载体增强型绿色荧光蛋白
- 大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及多向分化研究的体外实验被引量：2
- 2013年
- 目的分离培养较高纯度大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),检测其多向分化潜能。方法采用密度梯度离心结合差速贴壁法分离培养大鼠BMSCs,观察细胞形态,检测表面标志物CD34、CD44、CD45、CD90表达情况,及其成骨、成脂、成神经诱导后茜素红染色、油红O染色和NSE、GFAP免疫荧光染色情况。结果细胞呈典型的成纤维细胞样形态,CD44和CD90呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达,细胞纯度>98%。成骨、成脂、成神经诱导后,茜素红染色、油红O染色、NSE和GFAP免疫荧光均为阳性。结论密度梯度离心结合差速贴壁法可分离、培养出高纯度的大鼠BMSCs,该细胞具有成脂、成骨、成神经多向分化潜能,是脊髓损伤修复的一种较理想的种子细胞。
- 蒋涛任先军阴洪周长立王开见
- 关键词：间质干细胞细胞培养技术细胞分化
- 超声辅助脱细胞脊髓支架的生物学特性研究被引量：2
- 2013年
- 目的采用超声振荡结合化学萃取法制备大鼠脱细胞脊髓支架，观察其三维结构及生物学特性，为脊髓组织工程研究提供理想的支架材料。方法采用超声振荡结合化学萃取（体积分数2％TritonX-100＋体积分数2％脱氧胆酸钠）方法对大鼠脊髓进行脱细胞处理（脱细胞脊髓组），对照正常大鼠脊髓组织（对照组），观察该脱细胞脊髓支架的大体形态、组织学及超微三维结构特点，并检测该支架材料的孔径大小、孔隙率、含水率、酶解率、在水溶液中稳定性等。结果脱细胞脊髓组原有的细胞成分被有效去除，具有（94．57±3．45）％的孔隙率和（88．62±1．0）％的含水率以及良好的三维空间结构（平均孔径为46μm），该支架在胰酶溶液中逐步降解，在第20小时达到（69．03±2．19）％，在双蒸水中逐步崩解，在第8天可达（62．55±1．70）％。正常脊髓组织结构紧密，含大量神经细胞及髓鞘，孔隙率和含水量分别为（0．04±0．02）％、（62．4±1．5）％，扫描电镜下未见明显孔隙结构，该支架在胰酶溶液中逐步降解，在第20小时达到（37．62±0．99）％，在双蒸水中逐步崩解，在第8天可达（40．97±0．81）％。结论超声振荡＋化学萃取所制备的脱细胞脊髓支架细胞成分去除彻底，细胞外基质成分保存完整，具有良好三维空间网状结构、良好的孔隙率和含水量，符合组织工程脊髓支架的理论要求，为组织工程脊髓支架提供理想的选择。
- 阴洪任先军蒋涛周长立王开见
- 关键词：脊髓损伤超声处理
