河北省自然科学基金(C2011401024)
- 作品数：12 被引量：77H指数：5
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- Ac-SDKP对ROCK通路介导矽肺大鼠肌成纤维细胞分化抑制作用被引量：6
- 2013年
- 目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路介导的肌成纤维细胞分化的抑制作用。方法无特定病原体级建康成年雄性Wistar大鼠120只随机分为对照组(支气管灌注1 ml灭菌生理氯化钠溶液)、矽肺模型组[支气管灌注质量浓度为50 g/L二氧化硅(SiO2)1 ml]、Ac-SDKP前处理组(支气管灌注质量浓度为50 g/L SiO21 ml,灌注前给予Ac-SDKP),分别于染尘后1、2、4、8周处死(每亚组10只)。采用免疫组织化学法检测肺组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布与表达,免疫印迹法检测肺组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)、ROCK、血清反应因子(SRF)、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增加(P<0.05),并具有一定时间依赖性。与矽肺模型组比较,Ac-SDKP前处理4、8周组,大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑矽肺大鼠肌成纤维细胞的分化。
- 李淑钰徐洪孙月袁媛邓海静马文东魏中秋杨奕王瑞敏杨方
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺
- TGF-β_1介导的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纤维细胞分化中的调节作用被引量：21
- 2013年
- 目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(pMBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型和III型胶原蛋白表达变化;(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达。结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝。随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6 h、12 h和24 h达到高峰。I型胶原和III型胶原蛋白表达均在24 h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P<0.05)。(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。
- 马文东袁媛杨奕徐洪邓海静于婉莹孙月魏中秋杨方
- 关键词：转化生长因子Β肌成纤维细胞肺纤维化
- AcSDKP对矽肺大鼠TGF-β受体介导的P38MAPK信号转导途径调节与作用被引量：5
- 2014年
- 目的 观察转化生长因子-β （TGF-β）Ⅰ型、Ⅱ型受体、P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）和Ⅰ型、Ⅲ型胶原在矽肺大鼠和肺成纤维细胞的分布与表达,探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对TGF-β受体介导的P38MAPK信号转导通路调节与其抗矽肺纤维化作用的关系.方法 非暴露式支气管内灌注法制作大鼠矽肺模型,分为对照组,矽肺模型组和AcSDKP治疗组（每组10只）.培养新生大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、TGF-β1刺激组、受体阻断剂组、P38MAPK特异性抑制剂干预组和AcSDKP干预组.免疫组化法、免疫印迹法（Western-blot）检测TGF-βⅠ型和Ⅱ型受体、P38 MAPK蛋白以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.用实时定量荧光聚合酶链式反应（real-time PCR）法检测TGF-β Ⅰ型和Ⅱ型受体mRNA的表达.用激光扫描共聚焦显微镜法检测磷酸化P38在肺成纤维细胞内分布与核转位的情况.结果 在动物模型中,AcSDKP治疗组大鼠肺组织内TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体和磷酸化P38 MAPK蛋白的表达分别是矽肺模型组的86.12％、41.01％和42.63％;AcSDKP治疗组Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达,分别是矽肺模型组的89.05％和52.71％,差异均有统计学意义（P＜0.05）.在培养的肺成纤维细胞实验中,AcSDKP干预组TGF-β1诱导刺激的TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体mRNA的表达分别是TGF-β1刺激组的42.26％和54.33％;TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体和磷酸化P38 MAPK蛋白的表达分别是TGF-β1刺激组的58.14％、51.40％和45.6％;AcSDKP干预组磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位,核浆比值减少,为TGF-[β1刺激组的68.60％;Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达降低,分别是TGF-β刺激组的58.04％和44.74％,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 AcSDKP能够抑制TGF-β受体介导的P38 MAPK信号转导途径,从而抑制胶原蛋白的表达,进而发挥其抗矽肺纤维化的作用.
- 魏中秋孙月程华马文东徐洪李倩张丽娟王瑞敏杨方
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺受体
- Ac-SDKP对ROCK通路介导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的调节作用被引量：6
- 2013年
- 目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）是否能够通过对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的ROCK通路的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化.方法 胰酶消化法原代培养肺成纤维细胞,取4代肺成纤维细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组、Y-27632干预组和Ac-SDKP干预组.激光共聚焦扫描显微镜观察ROCK、SRF以及d-SMA在细胞内的定位与分布情况;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测ROCK、SFR、α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白在肺成纤维细胞的表达;实时定量荧光聚合酶链反应法（Real time PCR）检测ROCK、SFR、α-SMA mRNA的表达.结果 与对照组相比较,给予TGF-β1诱导刺激后,激光共聚焦扫描显微镜显示胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝,诱导刺激6、12、24 h后,ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增强,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与TGF-β1诱导分化组比较,给予Y-27632干预后,在相应时间点ROCK、SRF、d-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.给予Ac-SDKP干预后,在相应时间点ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达也较TGF-β1诱导分化组明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑大鼠成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化和抑制胶原蛋白的合成,可能是Ac-SDKP发挥其抗（矽）肺纤维化的作用机制之一.
- 袁媛杨方徐洪于婉莹孙月邓海静马文东魏中秋王瑞敏
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸
- N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对矽肺大鼠肌成纤维细胞分化的调节被引量：4
- 2012年
- 目的研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对矽肺模型大鼠肺内肌成纤维细胞分化的调节作用。方法采用非暴露式气管SiO2(50 g.L-1)灌注法复制大鼠矽肺模型,60只Wistar大鼠随机分为对照4 wk组、对照8 wk组、模型4 wk组、模型8 wk组、AcSDKP治疗组(塑模4 wk后给予AcSDKP 800μg.kg-1至8 wk)和AcSDKP预防治疗组(先给予AcSDKP 800μg.kg-1.d-1,48 h后制模,维持治疗至8 wk),每组10只。羟脯氨酸测量法定量分析肺组织中总胶原蛋白的含量,免疫组织化学法、Western blot检测肺组织内血清反应因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。结果与同时点对照组相比,模型组大鼠肺组织内胶原含量和SRF、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增加(P<0.05)。分别与模型4 wk和8 wk组相比,AcSDKP治疗组和预防治疗组大鼠肺组织内胶原含量和SRF、α-SMA以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论 AcSDKP可能通过抑制矽肺大鼠肺内肌成纤维细胞的分化,减少其胶原的合成与分泌,进而发挥抗矽肺纤维化的作用。
- 徐洪杨方程华李淑钰袁媛魏中秋
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸成纤维细胞矽肺肌动蛋白
- PDGF/ROCK通路介导的肌成纤维细胞分化在大鼠矽肺形成中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨PDGF/Rock通路介导的肌成纤维细胞分化在大鼠矽肺纤维化形成中的作用。方法:采用非暴露式气管二氧化硅混悬液灌注法制备大鼠矽肺模型,SPF级健康成年Wistar大鼠40只随机分为四组:模型对照4周组、模型对照8周组、矽肺模型4周组、矽肺模型8周组,每组10只。Western blot检测肺组织内α-SMA、phosphoPDGF-β、ROCK、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:大鼠矽肺模型制备成功。与相应对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内α-SMA、phospho-PDGFR-β、Rock以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均明显增加,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PDGF介导的ROCK信号转导通路可能通过促进大鼠肌成纤维细胞转化而促进矽肺大鼠肺组织内的胶原合成,进而促进矽肺纤维化的形成。
- 张丽娟李倩邓海静张文丽王小君裴鑫郝小惠李治国杨方
- 关键词：血小板源性生长因子Α-平滑肌肌动蛋白肌成纤维细胞矽肺
- 抗器官纤维化短肽——AcSDKP对心脏纤维化的作用及其研究进展被引量：1
- 2012年
- N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)是一种具有抗器官纤维化作用的由四个氨基酸构成的短肽。正常生理状态下,存在于人的血浆和淋巴系统内。近年研究发现AcSDKP能够抑制诸多器官如心、肺、肾、肝的纤维化。其中可以抑制器官内的靶细胞(如心脏成纤维细胞、肺成纤维细胞、肾小球系膜细胞和肝星状细胞)的增殖和胶原蛋白的合成或表达,通过信号转导系统的调节抑制靶器官内胶原的沉积,减轻致病因素导致的器官纤维化的程度。
- 李淑钰于婉莹杨方
- 关键词：心脏纤维化血小板源性生长因子
- AcSDKP对大鼠矽肺c-jun氨基末端激酶通路活化的调节作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对c-jun氨基末端激酶（JNK）信号转导通路活化的调节在矽肺纤维化中的作用。方法选用非暴露式气管灌注法制作大鼠矽肺模型。60只大鼠随机分为对照4周组、对照8周组、矽肺模型4周组、矽肺模型8周组、AcSDKP治疗组、AcSDKP预防组，每组10只。采用对二甲氨基苯甲醛显色法检测肺组织中羟脯氨酸含量，免疫印迹法检测肺组织内转化生长因子（TGF）-β、磷酸化-JNK、JNK、c-jun蛋白的表达。培养新生大鼠肺成纤维细胞，第4代细胞用于实验，分为对照组、TGF-β1刺激组、SP600125干预组、AcSDKP干预组。免疫细胞化学法检测磷酸化．JNK和c-jun蛋白的分布，免疫印迹法检测I型、Ⅲ型胶原表达。结果AcSDKP治疗组大鼠肺组织中TGF-β1、磷酸化-JNK、c-jun蛋白表达和羟脯氨酸含量分别是矽肺模型4周组的70．60％、78．03％、79．85％和71．28％，分别是矽肺模型8周组的77．99％、66．73％、69．94％和64．82％；AcSDKP预防组大鼠肺组织中TGF-β1、磷酸化-JNK、c-jun蛋白表达和羟脯氨酸含量分别为矽肺模型8周组的84．56％、61．18％、64．73％和74．96％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。AcSDKP干预组大鼠肺成纤维细胞磷酸化-JNK和c-jun蛋白的表达分别是TGF-β1刺激组的54．59％和55．56％，AcSDKP干预组大鼠肺成纤维细胞I型和Ⅲ型胶原蛋白的表达分别是TGF-β1刺激组的79．9％和84．4％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论AcSDKP可能通过阻制TGF-β1介导的JNK信号转导通路的活化，抑制间质胶原的沉积，进而发挥其抗矽肺纤维化的作用。
- 魏中秋于婉莹冯海利马文东李治国徐洪王瑞敏杨方
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺羟脯氨酸
- N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对肺成纤维细胞P38分裂原活化蛋白酶蛋白核转位及其通路活化的调节
- 2014年
- 目的：观察P38分裂原活化蛋白酶和Ⅰ型、Ⅲ型胶原在肺成纤维细胞的分布与表达，探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对P38MAPK信号转导通路活化的调节与其抗矽肺纤维化作用的关系。方法：培养新生大鼠肺成纤维细胞，分为对照组、转化生长因子-β1（TGF-131）刺激组、通路抑制剂组和AcSDKP干预组。采用激光扫描共聚焦显微镜检测磷酸化P38在肺成纤维细胞的分布与核转位的情况；免疫印迹检测P38MAPK蛋白以及I型、Ⅲ型胶原蛋白的表达；MTT法检测细胞增殖情况。结果：与对照组比较，TGF-131诱导刺激了肺成纤维细胞的磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位，使胞核中磷酸化P38MAPK蛋白荧光强度增加，核浆比值升高，同时肺成纤维细胞增殖以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达上调。而AcsDKP减少了由TGF-β1诱导刺激的磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位，使磷酸化P38MAPK蛋白在胞核的表达减少，核浆比值下降。同时也使细胞增殖下降以及I型、Ⅲ型胶原蛋白的表达下调。这些结果与P38MAPK通路抑制剂具有相同的作用。结论：AcSDKP通过抑制P38MAPK蛋白的核转位阻抑了P38信号转导通路的活化，进而抑制了肺成纤维细胞增殖与胶原蛋白的表达，这可能与AcSDKP抗矽肺纤维化的作用密切相关。
- 程华孙月马文东杨奕魏中秋徐洪李倩张丽娟王瑞敏杨方
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸肺成纤维细胞胶原
- Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用的比较蛋白组学研究被引量：9
- 2014年
- 目的 通过蛋白质组学的研究技术手段,筛选Ac-SDKP抗矽肺纤维化疗效和矽肺肺组织中与病变相关的特异蛋白质.方法 非暴露式支气管一次性灌注二氧化硅（SiO2）构建大鼠矽肺模型（4、8周）,并予以Ac-SDKP抗纤维化治疗和预防治疗,对照组（4、8周）支气管灌注等量氯化钠溶液.提取肺组织蛋白样品经双向电泳分离,胶体考马斯亮蓝染色显示蛋白点.扫描输入计算机,用ImageMaster 6.0图像分析软件对凝胶进行分析,差异蛋白判定标准为该蛋白点在两组间（对照组4、8周组分别与矽肺4、8周组比较,Ac-SDKP抗纤维化治疗组与矽肺8周组比较,Ac-SDKP预防治疗组与矽肺8周组比较）差异有统计学意义（P＜0.05）,且volume％值上下变化超过30％.将凝胶中的差异蛋白点切出,经胶内胰蛋白酶解,并行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）获得肽质量指纹谱并对蛋白质进行分析.结果 共筛选到33个差异蛋白,其中与对照4周组比较,矽肺4周组有17个差异蛋白表达上调,11个差异蛋白表达下调;与对照8周组比较,矽肺8周组有16个差异蛋白表达上调,12差异个蛋白表达下调;与矽肺8周组比较,Ac-SDKP抗纤维化治疗组有5个蛋白表达上调,6个差异蛋白表达下调;与矽肺8周组比较,Ac-SDKP预防治疗组有8个差异蛋白表达上调,10个差异蛋白表达下调.结论 筛选到与矽肺纤维化形成和Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用相关的差异蛋白,多涉及调控细胞增殖、凋亡、炎症反应和上皮-间质转化,以及信号转导通路等多方面的功能.
- 徐洪薛新新杜世璞李世峰孙月袁媛邓海静魏中秋王瑞敏杨方
- 关键词：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸矽肺蛋白组学
