北京市自然科学基金(6102012)
- 作品数：6 被引量：27H指数：4
- 相关作者：康俊根颉建明刘海霞简元才康宗利更多>>
- 相关机构：北京市农林科学院蔬菜研究中心甘肃农业大学沈阳农业大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 低表达甘蓝花药发育相关基因小体积荧光定量反应体系的建立和可靠性分析被引量：3
- 2011年
- 植物发育过程中很多重要基因拷贝数较低。为建立稳定可靠、适于低拷贝微量模板表达分析的实时qRT-PCR小体积反应体系,采用在甘蓝花药中表达量较少的AT-HOOK基因进行小反应体积荧光定量表达分析,研究小反应体积的扩增效率和可行性,并通过对其在甘蓝不同植物器官、不同花药组织和花药发育不同时期的表达特征的重复性和可靠性分析,最终建立了稳定可靠而且成本较低的10μL荧光定量分析体系,为进一步大规模深入研究甘蓝花药发育相关基因表达特征及发育调控基因功能分析奠定基础,同时也为其他低拷贝表达基因的研究提供参考。
- 王效维刘海霞杨颖丽康俊根
- 关键词：甘蓝实时荧光定量PCR
- 甘蓝抗枯萎病SCAR标记的开发被引量：7
- 2011年
- 【目的】开发与甘蓝枯萎病抗性基因紧密连锁的SCAR标记,利用该标记对甘蓝抗枯萎病基因跟踪、鉴定,为甘蓝抗枯萎病分子标记辅助选择奠定基础。【方法】以高抗枯萎病的甘蓝自交系8024与感病自交系6A为亲本构建F2代分离群体和相应F3代家系,通过F3代家系抗病性分离表现确认F2代单株的基因型,选择10株纯合基因型显性抗病单株和10株纯合基因型隐性感病单株,利用BSA法构建甘蓝抗感基因池,筛选出与甘蓝枯萎病抗性基因紧密连锁的AFLP标记,克隆测序后根据序列差异将其转化为SCAR标记,通过142株F2代分离群体连锁验证该标记与甘蓝枯萎病抗性基因的连锁关系,并利用两个不同的抗感分离F2群体共100株对SCAR标记的通用性进行验证。【结果】获得了1个以相斥相连锁的SCAR标记S46M48199,该标记在感病亲本中扩增出199 bp的单一条带,而在抗病亲本中无扩增条带,142株F2代分离群体连锁分析表明,其遗传距离为2.78 cM,在F66和C1两个F2群体中的通用性验证结果,与抗性鉴定结果的吻合率分别为81%和83%。【结论】开发的SCAR标记可用于甘蓝抗枯萎病的分子标记辅助育种。
- 姜明赵越颉建明田仁鹏陈延阳康俊根
- 关键词：甘蓝枯萎病AFLPSCAR
- 甘蓝Ogura细胞质雄性不育相关基因BoMF1启动子的克隆及功能分析被引量：4
- 2013年
- 通过TAIL-PCR染色体步移技术,从甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)基因组中克隆到胞质雄性不育(OguCMS)相关基因BoMF1翻译起始位点上游521bp的启动子序列。软件分析预测表明,该启动子序列中存在多个顺式作用元件,包括TATA-box、CAAT-box、MYB结合位点、植物激素响应单元等。为了研究该启动子的表达特性,亚克隆了BoMF1转录起始位点上游521bp序列,将其置换pBI121中的CaMV35S启动子,驱动其下游的GUS基因,构建植物表达载体pBI121-BoMF1P,以pBI121空载体作为阳性对照,通过农杆菌(LBA4404)介导法转入拟南芥。结果表明,甘蓝BoMF1启动子序列能驱动GUS基因在拟南芥花药发育晚期的花药和花粉中特异表达,表达具有组织特异性。
- 郭盈盈颉建明简元才郁继华康俊根
- 关键词：甘蓝OGUCMSGUS调控元件
- 甘蓝OguCMS相关的花药优势表达转录因子BoBHLH1的克隆与表达分析被引量：5
- 2010年
- 以甘蓝OguCMS花药中下调表达的EST序列为信息探针,克隆到一个与甘蓝OguCMS相关的bHLH家族转录因子,命名为BoBHLH1(GenBank登录号:GU390530),该基因编码102个氨基酸,具有典型的bHLH结构域,可识别顺式元件G-box序列,预测该蛋白定位在线粒体上。荧光定量RT-PCR表明,BoBHLH1是一个甘蓝花药中优势表达的基因,且在花药发育的早期和晚期均有一个表达高峰。研究结果为下一步分析其在甘蓝花药发育过程中的功能验证及OguCMS核质互作机理奠定了基础。
- 刘海霞康俊根颉建明简元才丁云花
- 关键词：甘蓝OGUCMS基因克隆
- 甘蓝细胞质雄性不育相关基因orf138的分子特性分析被引量：6
- 2012年
- 以甘蓝Ogura细胞质雄性不育系为材料,找出能够有效鉴定由orf138导致的甘蓝CMS的标记,并明确此基因在甘蓝OguCMS基因组中的位置。根据萝卜CMS相关基因orf138的序列信息,设计特异引物,并在甘蓝不同类型不育系和保持系中鉴定PCR产物的稳定性。随后利用Tail-PCR技术,扩增获得此基因的侧翼序列并进行了生物信息学分析。根据orf138的全长序列设计引物Bo138300BF/R,在甘蓝不育型材料中,能够稳定扩增出300bp左右的单一条带,而在其他细胞质不育类型和可育材料中均未扩出条带,经多次验证结果稳定可靠。甘蓝中orf138的上下游侧翼序列有效碱基1789bp,通过生物信息学分析,获得包括起始密码和终止密码的orf138的完整序列共417bp。同源性比对结果显示:与甘蓝型油菜、白菜和萝卜的orf138片段具有高度保守性。分析侧翼序列表明甘蓝orf138的3’端是由ORF83、trnfM、ORF125等基因片段构成的一个复杂序列。获得了甘蓝OguCMS特异的分子鉴定标记,明确了orf138在甘蓝线粒体中的位置,以上结果为甘蓝雄性不育的进一步研究奠定良好的基础。
- 朱琴康宗利简元才丁云花康俊根
- 关键词：甘蓝雄性不育ORF138
