中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(BRF070308)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：骆学农才学鹏郑亚东郭爱疆刘振勇更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所新疆农业大学甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2008年
- 采用RT-PCR方法从猪囊尾蚴总RNA中扩增出TsCL-1基因并构建了真核表达载体pPIC9K-TsCL-1,pPIC9K-TsCL-1电转化毕赤酵母GS115。采用G418抗性梯度筛选多拷贝重组菌株,经甲醇诱导表达,应用SDS-PAGE和Western-blot分析重组蛋白的表达情况。结果显示,TsCL-1与GenBank登录的TsCL的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.8%和100%,与肝片吸虫和大片吸虫组织蛋白酶氨基酸的同源性为76.3%。TsCL-1基因在毕赤酵母中成功表达,表达产物的分子质量为42 ku左右;Western-blot分析表明,表达产物具有反应原性。
- 刘琼骆学农郭爱疆郑亚东潘晓梅岳城才学鹏
- 关键词：猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶毕赤酵母
- 猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析被引量：4
- 2010年
- 【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾蚴dUTPase的活性。【结论】成功克隆表达了猪囊尾蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在猪囊尾蚴中的生物学功能奠定了基础,同时也为抗猪囊尾蚴病的药物设计和开发提供了研究基础。
- 刘振勇吕志慧郑亚东窦永喜乔军骆学农张艳景志忠才学鹏
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达酶学活性
- 猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究
- 2010年
- 本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通过ELISA叠加试验进行mAb的抗原表位分析;采用间接ELISA法测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价;采用抗TSOL18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩蚴杀伤试验,观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得12株稳定分泌抗TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,识别2个不同抗原表位,不同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为1×102、1×106。抗体体外六钩蚴杀伤试验结果证明,在有补体的情况下,多抗和单抗作用6 d后,六钩蚴结构模糊,边缘不清晰。表明单抗对六钩蚴有一定的杀伤作用。
- 郭爱疆吴润贾万忠刘斌闫鸿斌骆学农才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴TSOL18单抗
