国家高技术研究发展计划(2003AA215071)
- 作品数:6 被引量:9H指数:2
- 相关作者:洪涛王健伟屈建国韩金祥王敏更多>>
- 相关机构:中国疾病预防控制中心中国医学科学院北京协和医学院空军总医院更多>>
- 发文基金:国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 轮状病毒不同基因型NSP4的免疫原性研究
- 2006年
- NSP4作为轮状病毒的致泻相关蛋白,其在疫苗研究中的作用近年来深受瞩目。为比较不同基因型非结构蛋白NSP4的免疫原性,构建了四种基因型的重组表达质粒pCI-9786、pCI- 97S36、pCI-97S34和pCI-97SZ8,在细胞水平进行瞬时表达检测后,进一步免疫小鼠,检测血清IgG 抗体滴度和亚型。结果表明利用真核表达质粒表达的NSP4蛋白既可以诱导体液免疫反应,又可以诱导细胞免疫反应,但以体液免疫为主,不同基因型NSP4具有不同的免疫原性。
- 王大燕王健伟魏强王彦斌屈建国洪涛
- 关键词:轮状病毒NSP4免疫原性疫苗
- 非复制型重组腺病毒在293细胞上连续传代的遗传稳定性被引量:2
- 2008年
- 目的观察基于AdEasy系统的重组腺病毒在体外连续传代过程中的遗传稳定性。方法以基于AdEasy系统的4种表达轮状病毒基因的复制缺陷型重组腺病毒为模型,在293细胞上对其进行连续传代20代。每隔5代用PCR方法检测目的基因的存在和回复突变的复制型腺病毒(RCA)的产生,用Western Blot方法检测重组腺病毒携带的目的基因的表达。结果在20代的连续传代过程中,插入的轮状病毒基因一直稳定存在和表达。重组腺病毒rvAdG2VP7(o)在连续传代15代后,重组腺病毒rvAdG1VP7(o)和rvAdG2VP7(o)在连续传代20代后检测到复制型腺病毒的存在。结论重组腺病毒在293细胞中连续传代具有良好的遗传稳定性,传代10代以内一般检测不到RCA,可望满足基因治疗药物和腺病毒载体疫苗的研发需要。
- 王敏采弋田蓉屈建国王健伟洪涛
- 关键词:腺病毒科细胞系遗传学微生物
- 密码子优化提高重组腺病毒中人轮状病毒G1VP7和G3VP7基因的表达量被引量:1
- 2008年
- 目的通过密码子优化提高重组腺病毒中人轮状病毒G1VP7和G3VP7基因的表达量。方法人工合成按照人的优势密码子优化的人轮状病毒G1VP7和G3VP7基因,包装重组腺病毒后,与未优化的相同基因的重组腺病毒用Westem Blot方法比较其表达量。结果密码子优化的人轮状病毒G1VP7和G3VP7基因,与未优化的相同基因的重组腺病毒比较,其蛋白表达量大大提高。结论密码子优化确实提高了重组腺病毒中人轮状病毒G1VP7和G3VP7基因的表达量,可望满足腺病毒载体疫苗的研发需要。
- 王敏束弋屈建国王健伟洪涛
- 关键词:密码子优化重组腺病毒轮状病毒属
- 轮状病毒细胞免疫机制的研究进展被引量:6
- 2006年
- 轮状病毒(RV)是婴幼儿腹泻的主要病原,随着对RV感染免疫研究的不断深入,细胞免疫在其发病和疫苗研究中的作用越来越受到重视。T淋巴细胞参与了RV感染的免疫及保护,CD4+T细胞与CD8+T细胞对于RV感染清除均起到非常关键的作用,而且对于不同的RV表位随着时间的变化及组织的不同T细胞的应答也不同。细胞毒性T细胞则通过杀伤RV感染的细胞以清除病毒感染。此外IL-6I、L-2I、L-12、TNF-α和IFN-γ等细胞因子在轮状病毒感染时均有升高,在轮状病毒免疫调节中发挥作用。
- 韩炳娟王健伟屈建国韩金祥洪涛
- 关键词:轮状病毒细胞免疫
- 小鼠CD4、CD8膜外区编码cDNA的克隆与表达
- 2005年
- 目的 克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务。方法 从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX CS对其进行表达,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Westernblot对重组蛋白进行鉴定。结果 以小鼠脾细胞总RNA为模板,分别扩增出小鼠CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,将其插入表达载体pGEX CS,得到重组质粒pGEX CSCD4、pGEX CSCD8α和pGEX CSCD8β。将所获表达载体转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达,SDS PAGE检测表明小鼠CD4、CD8α、CD8β片段均得到成功表达,其表达量可占菌体蛋白总量的 30%左右,且均可与抗GST抗体反应。结论 成功克隆、表达了小鼠CD4、CD8α和CD8β,为进一步制备抗体从而用于免疫学研究打下了基础。
- 王海萍赵丽王健伟贾友苏韩金祥洪涛
- 关键词:逆转录聚合酶链反应
- 我国人轮状病毒不同基因型NSP4的致病性研究被引量:1
- 2005年
- 对我国轮状病毒流行株NSP4基因变异特点的分析表明,NSP4基因主要可分为Wa组和Kun组,在Wa组内可形成三个亚组,形成了4种NSP4基因型。为了进一步阐明人轮状病毒流行株NSP4基因变异与其致病性变化是否存在联系,我们首先利用杆状病毒载体对NSP4蛋白进行表达,获得了对应4种不同NSP4基因型的重组杆状病毒rvBac97B6,rvBac97S34,rvBac97S36和rvBac97SZ8。用这些病毒感染Sf9细胞后,检测细胞内Ca2+浓度的变化,发现与野生型杆状病毒感染细胞相比,重组病毒感染细胞内的Ca2+浓度显著升高,但各个重组病毒之间无显著性差异。在此基础上,我们进一步在E.coli中分别表达纯化了代表Wa和Kun基因分组的97S34和97SZ8流行株的NSP4。分别用纯化的重组NSP4蛋白攻击乳鼠后,发现不同基因型的NSP4蛋白的致腹泻活性没有明显差异,这种作用可被NSP4抗体拮抗,但这种拮抗作用存在基因型特异性。上述结果表明人轮状病毒流行株NSP4氨基酸序列间的变异并没有使其钙调节及致腹泻能力产生改变,在致腹泻作用中发挥关键作用(或决定性作用)的氨基酸位点在不同NSP4基因型间可能是相对保守的。针对NSP4抗体的有效性也为新型轮状病毒疫苗和药物研究提供了线索。
- 王大燕王健伟魏强屈建国洪涛
- 关键词:轮状病毒NSP4CA^2+腹泻