广西科技基础条件平台建设项目(09-090-09)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
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- 相关机构：广西大学更多>>
- 发文基金：广西科技基础条件平台建设项目国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 广西巴马小型猪ApoE基因真核表达载体的构建及鉴定被引量：4
- 2013年
- 【目的】构建广西巴马小型猪载脂蛋白E基因(ApoE)真核表达载体,为生产转ApoE基因的广西巴马小型猪奠定基础。【方法】采用RT-PCR从广西巴马小型猪肝组织中扩增出ApoE基因编码序列,将该基因连接至pEGFP-C1载体上,利用双酶切和测序对重组质粒pEGFP-C1-ApoE进行鉴定,并将重组质粒pEGFP-C1-ApoE转染PK15细胞。【结果】广西巴马小型猪ApoE基因编码区序列长954bp,编码317个氨基酸,与GenBank已公布的猪ApoE基因cDNA序列(NM_214308)对应区段同源性为100%。构建的重组质粒pEGFP-C1-ApoE转染PK15细胞48h后,在荧光显微镜下转染细胞发出荧光,细胞形态清晰,可见细胞核。【结论】广西巴马小型猪ApoE基因能与pEGFP-C1载体重组构建pEGFP-C1-ApoE真核表达载体,有效表达出ApoE蛋白。
- 苏秀珍蒋钦杨陈少梅郭亚芬兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪载脂蛋白E基因重组质粒真核表达载体
- 广西巴马小型猪血清淀粉样P物质基因真核载体构建及细胞转染被引量：1
- 2011年
- 血清淀粉样P物质(Serum Amyloid Pcomponent,SAP)是一种在进化上高度保守的血清糖蛋白,它可与各种类型的原纤维结合,在免疫应答和炎症反应等多种免疫疾病中发挥作用。以广西巴马小型猪肝组织总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出相应cDNA片段,连接到克隆载体pMD18-T上进行检测,测序结果为675 bp,与GenBank所提供相关序列同源性为100%,并成功构建pEGFP-N1-SAP重组真核表达载体,利用脂质体(Lipofectamine 2000)介导法将重组质粒导入到NIH-3T3细胞中培养,经转染24 h后,置于倒置荧光显微镜下观察,发现含有重组质粒的NIH-3T3细胞中表达出绿色荧光,为进一步研究SAP基因的功能特点及在试验动物相关疾病模型的应用提供条件。
- 杨柳潘斌蒋钦杨覃庆飞梁家充兰干球蒋和生郭亚芬
- 关键词：巴马小型猪PEGFP-N1细胞转染
- 广西巴马小型猪SAP真核表达载体的构建及胚胎水平表达被引量：1
- 2016年
- 本研究的目的是构建广西巴马小型猪SAP真核表达载体并在胚胎水平对其进行验证。利用RT-PCR技术扩增并克隆SAP基因,再用T4连接酶将其连入P-Dsred-N1载体,构建P-Dsred-N1-SAP载体,并通过胞质注射生产转SAP的猪胚胎。结果表明,本研究成功构建了P-Dsred-N1-SAP重组载体,经胞质注射后在胚胎发育早期和囊胚期均有红色荧光表达。本研究为下一步研究SAP基因的功能和生产转SAP基因猪奠定基础。
- 张笠黄玥萌吴延军司景磊兰干球郭亚芬蒋钦杨
- 关键词：广西巴马小型猪转基因猪
- 广西巴马小型猪血清淀粉样P物质基因cDNA的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- 为了研究SAP基因的结构特点,进一步构建广西巴马小型猪SAP基因相关疾病模型,试验根据GenBank上发表的猪SAP基因序列的保守性设计引物,以广西巴马小型猪血液为材料,进行RT-PCR扩增、连接、转化、测序和分析。结果表明:获得的SAP基因cDNA片段长度为928 bp;广西巴马小型猪SAP基因与普通猪和人类分别有99.1%、76.9%的同源性;与猪相比,在537 bp处碱基由G变成A,但氨基酸没有发生变化,为同义突变。说明SAP基因在哺乳动物内有较高的保守性。
- 阮志华兰干球范晶郭亚芬陈江伟
- 关键词：广西巴马小型猪SAP克隆
