广东省科技计划工业攻关项目(2007B030700002)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：白岚刘富强徐静陈建庭张振书更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白的原核表达及纯化
- 2011年
- 目的原核表达并纯化大鼠1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合(1,25D3-Membrane associated rapid re-sponse steroid binding,1,25D3-MARRS)蛋白。方法经RT-PCR扩增大鼠1,25D3-MARRS基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白,并进行Western blot鉴定。结果重组原核表达质粒pET-32a-1,25D3-MARRS经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为77 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,且具有良好的反应原性。结论已成功表达并纯化了重组1,25D3-MARRS蛋白,为进一步研究其性质、功能及分布特点奠定了基础。
- 徐静张振书王灿刘富强白岚
- 关键词：原核细胞
- 免疫沉淀1,25D_3-MARRS后胃黏膜提取物对成骨细胞生物学活性的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨1,25D3-MARRS(Membrane Associated,Rapid Response Steroid binding)Receptor蛋白是否参与胃黏膜提取物(EOM)对成骨细胞生物学活性的影响。方法酶消化法培养SD大鼠新生乳鼠的成骨细胞。提取SD大鼠胃黏膜提取物,每500μg胃黏膜提取物中分别加入10μg、1μg、0.1μg ERp57抗体(即1,25D3-MARRS抗体)、1μg正常IgG抗体进行孵育,然后分别加入50μl预洗的Protein A/G bead slurry进行免疫沉淀反应,离心去除1,25D3-MARRS-1,25D3-MARRS抗体-Protein A/G bead slurry复合物后取上清液作为高沉淀组EOM、中沉淀组EOM、低沉淀组EOM和正常IgG组EOM,并设生理盐水和未处理组EOM干预成骨。MTT法检测0～3天成骨细胞的增殖能力。逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测成骨细胞Ⅰ型胶原和骨钙素的表达变化。结果在成骨细胞增殖实验中,生理盐水组低于其他5组的增殖能力(P<0.05),免疫沉淀组EOM和未处理组EOM之间无显著差别(P>0.05)。Ⅰ型胶原和骨钙素的表达水平在免疫沉淀1,25D3-MARRS后发生不同程度的降低。结论 免疫沉淀1,25D3-MARRS后胃黏膜提取物对成骨细胞的增殖能力无明显影响,但降低分化能力,提示可能它通过参与EOM对成骨细胞的分化作用而影响骨钙代谢。
- 刘富强陈建庭徐静白岚
- 关键词：免疫沉淀成骨细胞
