国家自然科学基金(30770317)
- 作品数：6 被引量：22H指数：2
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- 蜂毒肽的溶血作用与红细胞膜上两种酶活性变化的关系(英文)被引量：5
- 2008年
- 从蜂毒肽作用于红细胞膜上的Na+-K+-ATPase和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性变化的角度,利用分光光度法测定酶活性,研究蜂毒肽与红细胞及膜作用过程中可能的靶点,讨论了蜂毒肽溶血过程与RBC膜上2种酶活性的变化.结果发现,蜂毒肽抑制RBC膜上酶活性的主要模式为附着/插入质膜与游离态并存模式,附着/插入质膜中的作用大于游离态的作用.Na+-K+-ATPase的K+结合位点是蜂毒肽的1个作用靶点.蜂毒肽插膜过程与其对此酶的作用随时间延长同步发生.蜂毒肽通过作用于葡萄糖-6-磷酸和NADP使G-6-PD的催化受到缓慢抑制,蜂毒肽形成四聚体的程度与酶活性密切相关.EDTA抑制蜂毒肽聚集,干扰蜂毒肽作用于G-6-P,蜂毒肽作用于底物G-6-P及辅酶NADP的生化机理相似,蜂毒肽抑制作用与G-6-PD的结构无关.
- 赵亚华李日清张微钟杨生梁祖承林健荣
- 关键词：蜂毒肽NA^+-K^+-ATPASE酶活性
- 蜂毒溶血肽对鸡红细胞及膜的生化作用被引量：13
- 2008年
- 本文采用荧光分光光度、薄层层析、原子吸收、荧光显微图像等多种生化技术,系统研究了蜂毒肽作用于鸡红细胞及膜的生化机理。结果表明:蜂毒肽影响红细胞膜上及胞内两种酶的功能。它抑制膜Na+-K+-ATPase活性,导致胞内外离子转运异常,K+浓度失衡;它也抑制细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性,其正电区域干扰胞内带负电小分子的作用,影响红细胞正常代谢。蜂毒肽干扰膜中阴离子通道的转运功能,使细胞渗透压改变,引起膨胀而溶血。蜂毒肽对有核红细胞核内DNA没有作用,与其他抗微生物多肽作用的靶向不同。据此认为,抗菌蛋白类抗生素对细菌作用的生化机理与传统抗生素不同,这是细菌对其不易产生耐药性的重要原因。
- 赵亚华张微李日清钟杨生郑慧平林健荣
- 关键词：蜂毒溶血肽生化机理NA^+-K^+-ATPASE葡萄糖-6-磷酸脱氢酶阴离子通道
- 人防御素hβD-3基因在大肠埃希菌中的融合表达被引量：1
- 2012年
- 研究了人类防御素hβD-3基因在大肠埃希菌细胞中的融合表达,采用pET-32a(+)载体在BL21(DE3)溶原菌中进行了F-βD-3蛋白的融合表达.结果表明,F-βD-3蛋白的表达量达到127.23μg/mL,融合蛋白经镍柱亲和层析与肠激酶酶切后,最终得到hβD-3蛋白的量为18.17μg/mL.经对大肠埃希菌K12D31的抑菌试验鉴定,肠激酶酶切后产物为有抑菌活性的重组hβD-3蛋白.
- 孔杰曾珍吴志伟褚梦赵亚华
- 关键词：人Β防御素3融合基因表达
- 含有一个非平面杂环胺配体的新型反铂抗癌药物的水解机理(英文)被引量：2
- 2009年
- 用B3LYP杂化泛函和等电子聚焦极化连续模型(IEF-PCM)研究了trans-[PtCl2(NH3)(Am)](Am:非平面哌啶或哌嗪)新型反铂抗癌药物的水解反应机理.对经由一般的SN2机理的第一步和第二步水解反应势能面上的稳定点进行了全优化和表征.在水解中,最显著的结构变化发生在反应过渡态和中间体的五配位三角双锥的赤道面上.与经典顺铂(cisplatin)比较,反式[PtCl2(NH3)(piperazine)]的第一步和第二步水解活化能均低于顺铂,而反式[PtCl2(NH3)(piperidine)]的第一步水解活化能稍高于顺铂,第二步水解活化能稍低于顺铂.计算表明,这些含有非平面杂环胺反铂的配合物减小了赤道面上的立体效应和水解势垒.
- 赵亚华
- 关键词：水解密度泛函理论过渡态
- 兔防御素基因在毕赤酵母中的串连表达及抑菌机理研究被引量：1
- 2011年
- 根据毕赤酵母Pichia pastoris密码子偏爱性重编兔防御素基因(Neutrophils peptide-1,pNP-1),设计4条引物搭桥合成.将pNP-1克隆到pPICZα-A载体,使用同尾酶XhoⅠ和SalⅠ在重组载体上构建多价串联体[pNP-1(2×)]和[pNP-1(3×)],分别对这3个基因进行毕赤酵母表达,表达量依次为3.39、6.39和13.05μg/mL.重组蛋白经溴化氢切割后,对得到的活性产物进行抑菌试验,结果表明,重组pNP-1蛋白对苏云金杆菌Bacillus thuringiensis等革兰阳性菌(G+)及大肠埃希菌Escherichia coli等革兰阴性菌(G-)均有抑菌活性,但对白色念珠菌Candida albicans等真菌没有明显的抑菌活性.对pNP-1抑菌机理研究发现,细胞壁和DNA合成抑制剂对pNP-1抑菌活性有协同作用,而多种蛋白质和RNA合成抑制剂对pNP-1抑菌活性有抑制作用.
- 李霞刘霭珊徐来祥赵亚华
- 关键词：毕赤酵母抑菌机理
- 蜂毒肽类似物的基因表达与构效关系
- 2008年
- 采用先前建立的蜂毒肽构效关系(QSAR)模型,预测设计了6条蜂毒肽类似物基因.采用Pichia pastoris表达系统,构建pPICZα-A-Mel重组质粒,电击转化酵母.以α-因子为分泌信号,在GS115中进行分泌表达.经筛选、诱导培养后,6×His亲和层析纯化表达产物,并经Tricine-SDS-PAGE电泳证实.新设计的6条类似物基因表达后的抑菌活性与重组天然蜂毒肽相比,4条增强,2条减弱.类似物【C】的抑菌效价是重组天然蜂毒肽的1.62倍左右,活性最强.类似物【B】的表达量最高,其抑菌活性仅次于【C】.6种类似物的溶血活性均降低至重组天然蜂毒肽的1/15以下.对蜂毒肽分子结构的优化设计合理,达到了保留或提高抑菌活性、降低溶血活性的目的.
- 赵亚华白堡屹刘蔼珊高向阳林健荣
- 关键词：分子设计基因表达生物活性构效关系
