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不结球白菜抗坏血酸过氧化物酶基因克隆及其原核表达载体构建: 2010年; 参照拟南芥APX基因保守域序列设计引物,扩增出不结球白菜抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因的核心片段,结合RACE技术获得该基因的5′端序列和3′端序列,利用DNAman软件经序列拼接获得1个全长为1 089bp的cDNA序列,该序列包括开放阅读框867 bp,编码288个氨基酸,蛋白质等电点5.52的相对分子量31 600。APX基因编码的氨基酸序列与拟南芥APX基因编码的氨基酸的同源性为81%。将APX基因片段连接到原核表达载体PGEX-4T-3,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白质的表达,SDS-PAGE电泳结果表明,产生了预期大小的重组蛋白。; 马成英侯喜林刘同坤李俊星张蜀宁李英; 关键词：不结球白菜克隆原核表达

不结球白菜S位点受体激酶基因片段的克隆与表达分析被引量：1: 2011年; 以不结球白菜自交不亲和系03的基因组DNA和柱头cDNA为模板,利用引物SRKF/SRKR扩增获得长度为964 bp和646 bp的SRK基因片段。序列比较分析表明,克隆的基因片段属于SRK基因的激酶域,该序列包含4个外显子和3个内含子,编码215个氨基酸,与芜菁、甘蓝、芥蓝等SRK基因有90%以上的相似性。荧光定量PCR分析结果表明:自交不亲和系03和自交亲和系105不同组织中SRK基因的表达水平存在显著的差异,SRK基因主要在自交不亲和系的柱头中高度表达,自交亲和系中该基因的表达主要分布于叶片、花蕾和柱头组织中。; 张爱芬王立侯喜林刘同坤李英; 关键词：不结球白菜荧光定量PCR 基因表达分析

不结球白菜醛酮还原酶BcAKR4C9基因的克隆及表达分析被引量：2: 2018年; [目的]本文旨在探究醛酮还原酶AKR4C亚家族BcAKR4C9基因在不同激素处理及逆境胁迫中的表达模式,从而分析BcAKR4C9基因在不结球白菜作物中的生长代谢和逆境胁迫中可能发挥的作用。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,克隆了BcAKR4C9基因的全长,应用生物信息学分析了其氨基酸序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析BcAKR4C9基因在不同组织,高温、低温、NaCl胁迫、伤害胁迫,以及水杨酸、茉莉酸甲酯和脱落酸等处理下的基因表达变化。[结果]序列分析表明,BcAKR4C9基因包含1个长度为948 bp的开放式阅读框(ORF),编码315个氨基酸。氨基酸序列多重比对和进化树分析表明,BcAKR4C9与其他植物AKR4C9基因同源性较高,具有高度保守性。荧光定量PCR分析表明,BcAKR4C9在叶片中的表达量高于根中,高温和低温处理下表达上调,且具有相似的表达模式。在0~20 g·L^(-1) NaCl质量浓度范围内基因相对表达量随NaCl质量浓度的升高而升高,伤害处理后能够迅速产生应激响应,并能够被水杨酸、茉莉酸甲酯和脱落酸诱导表达。[结论]不结球白菜BcAKR4C9基因能够被不同激素诱导表达,并且参与到多种逆境胁迫响应。; 张飞雪虞章红刘坤宇文锴王建军侯喜林李英; 关键词：不结球白菜非生物胁迫

不结球白菜雌蕊蛋白质双向电泳技术体系的建立被引量：8: 2012年; 以不结球白菜品种‘矮脚黄’的雌蕊为材料,从蛋白质提取、IEF程序、IPG胶条pH范围和染色方法等方面进行比较,利用Tris-HCl提取方法,使用pH 4～7 IPG胶条和改进的等电聚焦程序,改良银染方法,建立了适用于不结球白菜雌蕊蛋白质的双向电泳技术体系,并使用该体系对开花前2 d的花蕾雌蕊和开花2 d后的雌蕊蛋白质进行比较分析,获得187个差异蛋白点。; 王立张硕侯喜林李英; 关键词：不结球白菜雌蕊蛋白质双向电泳

二氧化碳处理对不结球白菜采后品质及过氧化氢清除系统的影响被引量：1: 2011年; 不结球白菜采后贮藏过程中品质易发生变化。贮藏过程中采用二氧化碳气体(CO2)处理可以延缓采后不结球白菜的衰老进程,减少重要营养物质维生素C(Vc)、可溶性蛋白和叶绿素的损失;CO2处理可抑制过氧化氢清除酶系统中的过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化氢酶(APX)和过氧化物酶(POD)活力的升高。50%和100%的CO2处理都可延缓采后不结球白菜贮藏过程中品质的下降,而前者的处理效果要优于后者。在室温下(25℃)CO2处理对品质的保持效果较明显,4℃下CO2处理的效果并不明显;在CO2处理的条件下,不同温度处理对品质的改变也不明显,因此不结球白菜采后短期保存可单独采取CO2处理或低温贮藏的方法。; 张硕王立侯喜林任君王雪花李英; 关键词：不结球白菜采后保鲜二氧化碳衰老过氧化氢

不结球白菜热激蛋白BcHSP81-4基因原核表达及生物信息学被引量：1: 2011年; 从不结球白菜Pol_CMS胞质不育系SSH差减文库中得到1条热激蛋白基因的EST序列,通过对该基因的NCBI网上BLAST比对发现,与热激蛋白的同源性最高,与拟南芥HSP81-4(AT5G56000)同源性高达96%,命名为BcHSP81-4。将BcHSP81-4基因片段连接到原核表达载体PGEX-4T-3,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白的表达。经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,产生了预期大小的重组蛋白,进一步证明了该基因属于热激蛋白90家族。并采用生物信息学方法,利用多种在线软件对不结球白菜热激蛋白BcHSP81-4的理化性质、亲水性、跨膜区、亚细胞定位及蛋白质结构进行预测和分析。理化性质分析结果显示,该蛋白质含699个氨基酸,分子量为80 050,理论等电点pI值为4.95。TMpred跨膜分析结果显示,它含有1个显著的跨膜螺旋区,这个区域与ProtScale预测的疏水区基本对应。用TargetP server和WOLFPSORTserver程序预测该蛋白质为细胞质蛋白质,二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主。; 刘同坤李英王枫孙菲菲张蜀宁侯喜林; 关键词：不结球白菜原核表达生物信息学

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国家重点基础研究发展计划(2009CB119001-04)