浙江省重大科技专项基金(2009C12055)
- 作品数：3 被引量：17H指数：2
- 相关作者：龚云飞应永飞张明洲方结红李沐洁更多>>
- 相关机构：中国计量学院杭州迪恩科技有限公司浙江省畜产品质量安全检测中心更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金浙江省重点科技创新团队项目浙江省重点科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定被引量：4
- 2012年
- [目的]制备抗三聚氰胺单克隆抗体,并对其效价、敏感性与特异性进行测定。[方法]通过三聚氰胺人工抗原MEL-BSA免疫BALB/c小鼠以及细胞融合等方法,获得分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并利用小鼠体内腹水诱生法制备抗三聚氰胺单克隆抗体;采用间接竞争ELISA法鉴定单克隆抗体的效价、敏感性与特异性。[结果]经小鼠免疫、细胞融合与亚克隆后获得了2株分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1B12和2H9;间接ELISA检测结果显示,杂交瘤细胞1B12和2H9腹水型单抗的效价分别为1∶25 600与1∶12 800,IC50分别为8.0 ng/ml与8.3 ng/ml,且该2种单抗只与三聚氰胺有反应,与三聚氰胺类似物无交叉反应。[结论]该研究获得了高效价、高灵敏度的三聚氰胺特异性单克隆抗体,为后续研究提供了良好基础。
- 王旻子应永飞龚云飞方结红陈宗伦张明洲
- 关键词：三聚氰胺单克隆抗体
- 三聚氰胺人工抗原合成与鉴定被引量：1
- 2011年
- 采用戊二醛法与甲醛树脂法分别将三聚氰胺(Melamine,Mel)偶联到牛血清白蛋白(BSA)与鸡卵清蛋白上,合成免疫原三聚氰胺-牛血清白蛋白(Mel-BSA)与包被原三聚氰胺-鸡卵清蛋白(Mel-OVA)。通过快速凝胶液相层析(FPLC)纯化后,合成抗原进行紫外扫描、红外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定。结果表明三聚氰胺已偶联到载体蛋白,为进一步制备三聚氰胺的特异性抗体与建立三聚氰胺免疫检测方法奠定了基础。
- 王旻子应永飞龚云飞方结红陈宗伦张明洲
- 关键词：三聚氰胺人工抗原
- 三聚氰胺胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：12
- 2012年
- 通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的三聚氰胺抗原检测方法,对奶制品及饲料中的三聚氰胺残留水平监测提供参考。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的三聚氰胺单克隆抗体,喷于试纸的金标垫。将MEL-OVA(三聚氰胺和卵清白蛋白的偶练物)和纯化的羊抗鼠IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(质控线)处,通过挑选试纸条材料和调试工艺参数,并最终组装成试纸条。结果显示,制备的试纸监测体系方法检出限为50 g/L。试纸条对牛奶、奶粉和饲料中的三聚氰胺残留的检出限分别为100 g/L、100 ng/g和200 ng/g。将该法与LC-MS/MS法对比检测牛奶、奶粉和饲料样品,在试纸条检测范围内,与LC-MS/MS法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性。制备的三聚氰胺胶体金检测试纸在常温干燥环境下至少可保质6个月,能够检测出三聚氰胺含量大于50 g/L的样品,适用于现场实际样品三聚氰胺残留水平监测,具有良好的应用前景。
- 龚云飞陈宗伦奚茜李沐洁王唯芬王旻子应永飞张明洲
- 关键词：三聚氰胺胶体金免疫层析试纸
