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国家自然科学基金(81171513)

作品数：22 被引量：54H指数：3
相关作者：陈旭顾恒陈崑鞠梅黄丹更多>>
相关机构：中国医学科学院北京协和医学院天津医科大学总医院天津市儿童医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 22篇中文期刊文章

领域

  • 22篇医药卫生

主题

  • 20篇细胞
  • 11篇自噬
  • 8篇蛋白
  • 8篇紫外线
  • 7篇增殖
  • 7篇细胞增殖
  • 7篇角质
  • 7篇角质形成
  • 7篇角质形成细胞
  • 6篇皮肤
  • 5篇紫外
  • 5篇小鼠
  • 5篇角蛋白
  • 5篇角蛋白细胞
  • 5篇白细胞
  • 5篇HACAT
  • 4篇照射
  • 3篇紫外线损伤
  • 3篇自噬体
  • 3篇西罗莫司

机构

  • 19篇中国医学科学...
  • 4篇天津医科大学...
  • 2篇天津市南开医...
  • 2篇苏州大学附属...
  • 2篇中国医学科学...
  • 2篇天津市儿童医...
  • 1篇南京师范大学
  • 1篇郑州大学第一...
  • 1篇重庆医科大学
  • 1篇北京协和医学...
  • 1篇山西医学科学...
  • 1篇江苏大学附属...

作者

  • 14篇陈旭
  • 14篇顾恒
  • 10篇陈崑
  • 9篇鞠梅
  • 9篇黄丹
  • 6篇徐松
  • 6篇李新宇
  • 5篇孙建方
  • 5篇郑云鹏
  • 5篇任发亮
  • 4篇胡彬
  • 4篇周之海
  • 4篇吕雅琳
  • 4篇刘毅
  • 3篇郭新云
  • 3篇王莹
  • 3篇倪娜娜
  • 2篇夏立君
  • 2篇常宝珠
  • 2篇姜鹏爽

传媒

  • 13篇中华皮肤科杂...
  • 4篇临床皮肤科杂...
  • 4篇中国麻风皮肤...
  • 1篇国际皮肤性病...

年份

  • 5篇2016
  • 7篇2015
  • 3篇2014
  • 7篇2013
共 22 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
不同剂量中波紫外线照射对角质形成细胞增殖活力和自噬体表达影响的研究被引量：8
2013年
目的观察HaCaT细胞和原代角质形成细胞接受不同剂量中波紫外线（UVB）照射后细胞增殖活力和自噬体表达水平的变化，并初步评估增殖活力损伤程度和自噬体表达水平之间的相关性。方法两种细胞各分为5组，对照组、5、10、20、40mJ／cm^2UVB照射组，照射结束后12h进行MTr实验或单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色，全波长酶标仪下读取各孔A值，倒置荧光显微镜下随机选取视野，计数每视野下自噬体表达阴性细胞和阳性细胞数目。结果经不同剂量UVB照射后，HaCaT细胞的增殖活力（A值）较原代角质形成细胞下降更明显，其中HaCaT细胞10、20、40mJ／cm^2照射组（A值分别为1．367±0．035、1．173±0．034、0．873±0．025）两两之间以及与对照组（1．519±0．022）之间差异均有统计学意义（P〈0．01）；原代角质形成细胞仅10、20、40mJ／cm^2 UVB照射组（A值分别为0．782±0．012、0．773±0．021、0．725±0．031）与对照组（0．887±0．035）之间差异有统计学意义（P〈0．05）。5、10、20mJ／cm^2 UVB照射后两种细胞MDC染色，自噬体表达阳性的细胞比率均出现增加，但照射量至40m．1／cm^2 时则出现下降，以原代角质形成细胞下降更明显，其中HaCaT细胞10mJ／cm^2 和20mJ／cm^2 UVB照射组自噬体表达阳性率（分别为22．69％±2．15％、28．10％±2．92％）较对照组（10．18％±1．50％）有显著上升，而40mJ／cm^2 组自噬体表达上升幅度出现下降（趋势卡方检验r=27．48，P〈0．01）；原代角质形成细胞对照组、5、10、20mJ／cm2组间自噬体阳性率变化不大，但40mJ／cm2组表达出现明显抑制（趋势卡方检验r=6．86，P〈0．01）。结论UVB对HaCaT细胞和原代角质形成细胞增殖活力的损伤均有剂量依赖性，原代角质形成细胞更耐受UVB损伤；5、10、20mJ／cm2UVB照射能促进14aCaT细胞自噬体表达增加，且有剂量依赖性，�
黄丹任发亮陈旭陈崑顾恒
关键词：角质形成细胞自噬体紫外线
Cbl-b基因shRNA干扰载体的构建及鉴定被引量：3
2015年
目的 构建小鼠Cbl-b基因RNA干扰（RNAi）的真核表达质粒,并初步鉴定其干扰效果,为后续研究Cbl-b在黑素瘤免疫治疗中的作用奠定基础.方法 根据基因库提供的Cbl-b cDNA序列,设计并合成4对短发夹结构的互补DNA序列,克隆至载体PGPU6/GFP/Neo构建重组质粒,并予以DNA测序鉴定.重组干扰质粒构建成功后,将干扰质粒与Cbl-b过表达载体共转染293T细胞,于转染后48 h,通过实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测各质粒对Cbl-b基因的表达抑制效应.结果 测序分析证实,4对shRNA寡核苷酸序列分别成功插入至shRNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo中,将构建成功的PGPU6/GFP/Neo-shRNA质粒与Cbl-b真核表达载体共转染细胞48 h后,通过荧光实时定量PCR法及Western印迹测定,发现4条shRNA序列对Cbl-b的表达均有一定的抑制效应,其中以1号shRNA序列重组质粒对Cbl-b表达的抑制程度最高（P＜0.05）.结论 成功构建并筛选出沉默效应最高的Cbl-b shRNA真核细胞表达载体.
胡彬倪娜娜吕雅琳陈浩刘毅孙建方
关键词：黑色素瘤
雷帕霉素对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬诱导效应及其分子机制的初步研究被引量：2
2014年
目的:初步探讨雷帕霉素在不同浓度和不同孵育时间下,对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的诱导效应及其分子机制。方法:不同浓度雷帕霉素处理HaCaT细胞4 h或12 h后,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测雷帕霉素对细胞活力的影响,并提取蛋白进行蛋白印迹实验,检测LC3-Ⅱ表达水平,作为自噬的检测方法;通过透射电镜分析自噬体形成,确认雷帕霉素对自噬的诱导效果。检测自噬调控上游关键元件哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达及其se^(2481)和ser^(2448)磷酸化产物水平,分析mTOR活性;并分析自噬调控下游的另一关键基因Atg7的表达,初步分析雷帕霉素诱导HaCaT细胞的分子机制。结果:不同浓度雷帕霉素处理4 h,对HaCaT细胞的活力没有显著的影响。高剂量雷帕霉素(80 nmol/L和100 nmol/L)在处理12 h后对HaCaT细胞的活力产生毒性效应。20 nmol/L和50 nmol/L雷帕霉素孵育4 h诱导HaCaT细胞LC3-Ⅱ表达上调,而20 nmol/L和50 nmol/L雷帕霉素孵育12 h仍具有诱导效应。相较于其他浓度,在50 nmol/L雷帕霉素孵育诱导的LC3-Ⅱ表达上调效应最为显著,并且在药物孵育4h时超微结构水平诱导产生胞质内大量自噬体形成。1~50nmol/L浓度的雷帕霉素孵育4 h或12 h均可诱导HaCaT细胞mTOR ser^(2481)和mTOR ser^(2448)磷酸化产物水平降低:然而Atg7表达不能观测到显著的差异。结论:50 nmol/L雷帕霉素孵育4 h具有显著的诱导HaCaT细胞自噬效应。HaCaT细胞mTOR分子对雷帕霉素处理敏感,可被其诱导产生蛋白活化抑制效应。这种mTOR信号抑制可能参与了雷帕霉素对HaCaT细胞的自噬诱导效应,但Atg7没有参与这种调控效应。
陈旭徐松黄丹鞠梅陈崑李新宇顾恒
关键词：雷帕霉素角质形成细胞自噬
不同剂量长波紫外线照射对HaCaT细胞增殖活力和自噬体表达瞬时影响的研究被引量：2
2016年
目的:观察人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞接受不同剂量长波紫外线(UVA)照射后细胞增殖活力和自噬体表达水平的变化,并初步评估增殖活力损伤程度和自噬体表达水平之间的相关性。方法:将HaCaT细胞分为6组,分别为10 J/cm^2UVA对照组、10 J/cm^2 UVA照射组、25 J/cm^2 UVA对照组、25 J/cm^2 UVA照射组、50 J/cm^2 UVA对照组及50 J/cm^2 UVA照射组。照射结束后即刻进行噻唑蓝(MTT)实验或单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色,全波长酶标仪下读取各孔A值,倒置荧光显微镜下随机选取视野,计数每视野下自噬体表达阴性细胞和阳性细胞数目。结果:经不同剂量UVA照射后,HaCaT细胞的增殖活力(A值)下降,呈剂量相关性。其中10、25及50 J/cm^2 UVA照射组(A值分别为1.179±0.007、0.791±0.015、0.522±0.046)两两之间以及与各自对照组(1.370±0.007、1.254±0.012、1.177±0.009)间差异均有统计学意义(P均<0.01);10、25及50 J/cm^2 UVA照射后,HaCa T细胞MDC染色结果示自噬体表达阳性的细胞比率增加,且呈剂量相关性。50 J/cm^2 UVA照射组自噬体表达阳性率较其对照组显著上升(χ~2=11,P<0.01)。结论:10~50 J/cm^2 UVA照射后,HaCaT细胞瞬时增殖活力降低及自噬体表达增加,且呈剂量依赖性。
苑春雨李莉陈崑陈旭鞠梅黄丹顾恒
关键词：角质形成细胞自噬体长波紫外线
西罗莫司对UVB照射HaCaT细胞自噬的影响
2013年
目的探讨西罗莫司能否增加中波紫外线（UVB）照射下HaCaT细胞的自噬水平。方法0、25、50mJ／cm^2 UVB照射HaCaT细胞，单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色法检测自噬。设置空白组、DMSO组、25mj／cm^2 UVB组、25mJ／cm^2 UVB＋西罗莫司组、50mJ／cm2UVB组、50mJ／cm^2 UVB＋西罗莫司组共6组，MDC染色法检测自噬，并比较各组自噬水平。结果结果UVB照射HacaT细胞后出现了自噬，0、25、50mJ／cm^2照射组自噬体阳性细胞分别为1．07％±1．85％、9．37％±1．14％、16．29％±3．03％，3个剂量间差异有统计学意义；6组自噬体阳性细胞百分率分别为：0．56％±0．79％、1．61％±2．27％、10．00％±0．47％、21．18％±3．03％、15．82％±4．13％、29．45％±1．24％，各组两两比较差异均有统计学意义，且25mJ／cm^2 UVB＋西罗莫司组、50mJ／cm^2 UVB＋西罗莫司组的自噬水平均高于相应UVB组。结论UVB辐照HaCaT细胞后出现MDC染色自噬体阳性细胞，西罗莫司可能增加UVB照射下HaCaT细胞后的自噬水平。
任发亮黄丹陈旭郑云鹏陈崑鞠梅常宝珠李新宇顾恒
关键词：角蛋白细胞自噬西罗莫司
无创性检查方法在皮肤光老化的研究进展
2015年
皮肤光老化的评测方法是皮肤科研究领域中的一个关键问题。光老化指皮肤受到长期的日光照射而出现的临床、病理及功能上的改变。通常光老化是慢性紫外线损伤与自然老化叠加的结果。在表皮内，紫外线（UV）照射可诱导表皮角质形成细胞和黑素细胞突变，促使皮肤恶性肿瘤的发生；
徐松陈旭顾恒
关键词：皮肤光老化无创性表皮角质形成细胞紫外线损伤皮肤恶性肿瘤日光照射
Cbl-b 基因沉默对小鼠原代淋巴细胞免疫活性影响的研究
2016年
目的：体外初步研究 Cbl-b 基因经特异性 siRNA 沉默后对小鼠淋巴细胞免疫活性的影响。方法摘取 C57BL/6小鼠的脾脏，体外无菌分离小鼠脾脏淋巴细胞后进行培养。通过 Entranster^TM-R4000试剂将 Cbl-b siRNA 转染入小鼠原代淋巴细胞以沉默细胞内 Cbl-b 的表达。转染72 h 后通过酶联免疫吸附实验（ELISA）检测淋巴细胞培养上清中干扰素γ（INF-γ）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达量。通过与 B16F10黑素瘤细胞共培养，研究 Cbl-b 基因沉默后的淋巴细胞对 B16F10黑素瘤细胞免疫杀伤活性的影响。结果 Cbl-b siRNA 成功转染进小鼠原代淋巴细胞并能有效沉默细胞内 Cbl-b 的表达。与阴性对照转染组及空白组相比，转染 Cbl-b siRNA 的淋巴细胞 IFN-γ、TNF-α分泌量增加（P 〈0.05）。共培养检测结果显示，Cbl-b siRNA 转染组比转染阴性对照组能更高效地杀伤小鼠 B16F10细胞。结论 Cbl-b 基因沉默能够促进小鼠淋巴细胞 INF-γ、TNF-α分泌能力，并能增强淋巴细胞对 B16F10黑素瘤细胞的体外免疫杀伤作用。
胡彬倪娜娜吕雅琳陈浩刘毅孙建方
关键词：黑色素瘤基因沉默小鼠淋巴细胞免疫活性CBL-B
皮肤光老化小鼠模型的构建被引量：19
2014年
目的:构建昆明鼠皮肤光老化小鼠模型。方法:采用模拟日光组分的紫外线照射昆明小鼠,初始照射剂量为最小红斑量,剂量周递增。然后进行照射组和对照组小鼠皮肤大体形态参数和组织学特征比较,进而从分子水平比较丙二醛产物水平和p53表达水平。结果:照射小鼠皮肤厚度为0.0507±0.0082 cm较对照小鼠皮肤0.0397±0.0063 cm厚(P<0.05);照射组皮肤皱纹评分较对照组增高(P<0.05);组织学特征分析发现照射组小鼠皮肤出现显著的胶原纤维和弹力纤维光老化组织学特征。照射组小鼠皮肤丙二醛水平和p53表达显著升高。结论:皮肤光老化小鼠模型的建立为皮肤光老化的研究提供了可用的模型。
陈旭王莹鞠梅陈崑顾恒
关键词：光老化紫外线小鼠
凋亡和自噬交互调控元件Bax、Bcl-2、Beclin-1在慢性紫外线损伤小鼠模型皮肤角质形成细胞中的表达被引量：2
2013年
目的观察慢性紫外线损伤对小鼠皮肤角质形成细胞凋亡和自噬交互调控元件Bax、Bcl-2、Beclin-1及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）的调控效应。方法健康昆明小鼠30只，雌雄各半，鼠龄6—8周，按性别随机分成慢性紫外线损伤组（20只）和对照组（10只），每组雌雄各半，根据性别将小鼠分笼饲养。采用模拟日光紫外线（UVA＋UVB）光源对实验小鼠进行照射，从最小红斑量（UVB0．07J／cm2，UVA0．7J／cmO开始，每周增加0．5个最小红斑量，每日1次，每周照射5d，共9周，UVB总剂量达9．45J／cm2，UVA总剂量达94．5J／cm2。通过组织学观察、特殊化学染色和表皮厚度测量确定皮肤损伤，应用免疫组化法分别对照射前（w0）和实验9周末（w9）Bax、Bcl-2、Beclin-1和caspase3的表达进行检测，表达强度以免疫反应强度分布指数（IRIDI）表示，并与对照组进行比对分析。分别采用配对t检验和Wilcoxon符号秩和检验对各参数进行比较。结果慢性紫外线照射后，小鼠表皮厚度明显增加。肉眼观察、组织学观察和胶原纤维、弹性纤维特殊染色均显示损伤组小鼠皮肤临床表现和组织学改变均与慢性紫外线光损伤的人类皮肤较为吻合。在损伤组，照光前Beclin-1、caspase3、Bax、Bcl-2的表达计分均值分别为0．30、0．25、0．35、0．25，照光后分别为2．70、3．30、3．35、0．25。Beclin-1、caspase3、Bax蛋白表达显著升高，且差异有统计学意义（z值分别为4．034、4．001、3．970，均P〈0．05），Bcl-2蛋白表达变化不明显（z=0，P〉0．05）。对照组小鼠Beclin-1、caspase3、Bax、Bcl-2的均值在wo时和W9时表达差异均无统计学意义（z值分别为0、0．577、0、0．577，均P〉0．05）。结论慢性紫外线损伤对小鼠皮肤角质形成细胞中凋亡和自噬的交互调控元件Beclin-1和Bax具有上调表达的作用，而对Bcl-2表达调控效应�
王莹陈旭鞠梅姜鹏爽郭新云夏立君蒋靖陈崑顾恒周之海
关键词：紫外线角蛋白细胞BCL-2相关X蛋白质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3BECLIN-1
α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬的影响被引量：1
2015年
目的：评价α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。方法人皮肤成纤维细胞与终浓度分别为0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L 的α硫辛酸孵育4、12和24 h 后，采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性，单丹酰戊二胺（MDC）染色法检测细胞自噬水平，Western 印迹法检测微管相关蛋白1轻链3-B（LC3-B）表达。结果孵育4 h 和12 h 时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间人皮肤成纤维细胞增殖活性（A490值）差异均无统计学意义（F 值分别为2.85、1.34，均 P 〉0.05）；孵育24 h 时，各组间差异有统计学意义（F =10.41，P 〈0.01）。MDC 法检测显示，孵育4 h 和12 h 时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间自噬体阳性细胞百分率差异均无统计学意义（F 值分别为0.11、0.10，均 P 〉0.05）；孵育24 h 时，各组间差异有统计学意义（F =8.03，P 〈0.05）。Western 印迹法检测显示，孵育4 h 和12 h 时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间细胞 LC3-Ⅰ向 LC3-Ⅱ转化（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ）水平差异均无统计学意义（F 值分别为3.38、2.13，均 P 〉0.05），但孵育24 h 时各组间差异有统计学意义（F =37.49，P 〈0.01）。结论α硫辛酸可能抑制人皮肤成纤维细胞基础自噬。
郑云鹏陈旭黄丹徐松顾恒
关键词：自噬成纤维细胞
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