国家自然科学基金(81070003)
- 作品数：19 被引量：109H指数：7
- 相关作者：黄文杰李理袁伟锋李伟峰张安兵更多>>
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- 慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺泡巨噬细胞炎症及调控机制探讨被引量：17
- 2012年
- 目的探讨肺泡巨噬细胞在烟雾暴露致慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型气道炎症中的作用及可能的调控机制。方法 12只Wistar大鼠随机分为对照组和COPD组。在COPD组以烟熏+气道内滴注内毒素的方法建立COPD大鼠模型。行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数,分离大鼠肺泡巨噬细胞并用免疫荧光法进行鉴定,运用Western blot技术检测肺泡巨噬细胞胞浆和胞核NF-κB p65亚基的表达,ELISA法检测细胞培养上清TNF-α、MIP-2及IL-10浓度。结果 COPD组支气管炎症评分、平均内衬间隔显著高于对照组[4.33±1.16比1.33±0.58,P=0.016;(168.77±11.35)μm比(93.61±4.16)μm,P=0.000]。COPD组BALF中细胞总数较对照组显著升高(P<0.05),分类以肺泡巨噬细胞及中性粒细胞为主[(72.0±2.2)%和(18.3±8.3)%];COPD组肺泡巨噬细胞胞浆NF-κB p65蛋白的表达水平显著低于对照组,而胞核的表达水平则显著高于对照组(P<0.05);COPD组肺泡巨噬细胞培养上清中TNF-α、MIP-2的浓度显著高于对照组(P<0.05),IL-10浓度在两组间无统计学差异(P>0.05)。结论以烟熏加气道内滴注内毒素的方法可成功建立COPD大鼠模型,表现为以巨噬细胞为主的慢性炎症,分泌TNF-α、MIP-2增加,其机制与NF-κB p65活化密切相关。
- 曾华东徐虹李理袁伟锋黄文杰
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病肺泡巨噬细胞核因子ΚB炎症
- 谷胱甘肽-S-转移酶系研究进展及其与肺部疾病的相关性被引量：2
- 2015年
- 谷胱甘肽-S-转移酶系是由多个基因编码,具有多种功能的一个Ⅱ相反应代谢的超家族酶系。它催化还原型谷胱甘肽与多种亲电子化合物结合,使其功能失活,通过尿液或胆汁排出体外,在解毒、防御氧化应激,防止细胞损害等过程中起重要作用。近年来研究发现,谷胱甘肽-S-转移酶系以多种毒性物质、活性氧及其产物作为底物,进行生物转化代谢,参与了肺部的多种抗氧化过程,且谷胱甘肽-S-转移酶系的基因多态性与COPD、哮喘、肺癌等疾病相关。现就谷胱甘肽-S-转移酶系的分子生物学研究进展及其与多种肺部疾病之间的关系进行综述。
- 先俊李理袁伟锋张安兵黄文杰
- 关键词：基因多态性肺部疾病
- 肿瘤坏死因子α中和抑制脂多糖诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征肺组织细胞凋亡的机制探讨被引量：3
- 2014年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)中和抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺组织细胞凋亡的机制。方法小鼠随机分为对照组、LPS组和TNF-α中和组。采用LPS(5 mg/kg)气道雾化造小鼠ARDS模型,TNF-α中和组在滴入LPS前24 h腹腔注射依那西普(0.4 mg/kg),滴入LPS 2 h后收集标本。PCR检测各组肺组织核转录因子κB(NF-κB)p65、Bax、Bcl-2的表达水平,Western blot检测NF-κB p65和Erk1/2及二者磷酸化、Bax、Bcl-2的蛋白水平;测量各组肺组织干湿重比;HE染色观察各组肺组织病理改变,采用肺损伤半定量评分评估肺组织损伤程度。结果 LPS组肺组织NF-κB及Erk1/2活化水平升高、Bcl-2与Bax比降低(P<0.05)。TNF-α中和能明显降低ARDS小鼠肺组织NF-κB活化水平,Bcl-2与Bax比值升高。TNF-α中和组小鼠肺组织湿干重比及肺损伤半定量评分较LPS组显著降低(P<0.05)。结论 TNF-α中和抑制脂多糖诱导小鼠ARDS肺组织损伤,其机制与抑制Erk1/2、NF-κB活化,上调Bcl-2/Bax比值,最终减少细胞凋亡密切相关。
- 张安兵李理袁伟锋先俊黄文杰
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征脂多糖肿瘤坏死因子Α细胞凋亡
- NF-κB p65基因在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤中的作用被引量：15
- 2012年
- 目的建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用。方法以肿瘤坏死因子α(TNF-α,10 ng/mL)刺激A549细胞,运用RNA干扰技术沉默核因子κB(NF-κB)p65基因,采用RT-PCR及Western blot法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-6等炎症因子浓度,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)浓度,MTT法检测细胞存活率。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因及蛋白水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位;同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6的浓度升高,细胞内MDA增多,SOD减少,细胞存活率降低。预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA浓度的增高,减少SOD的耗损,A549细胞存活率升高(P<0.05)。结论 NF-κB能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激,导致细胞存活率明显降低;沉默NF-κB p65基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激,减轻肺结构细胞的损伤。
- 吴炜景李理袁伟锋李伟峰黄文杰
- 关键词：核因子ΚBRNA干扰
- RNAi沉默NF-κB p65对小鼠巨噬细胞细胞因子表达的影响被引量：7
- 2011年
- 目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术在抑制NF-κB p65表达、调控LPS活化后巨噬细胞细胞因子表达中的应用。方法:利用阳离子脂质体将NF-κB p65小干扰RNA(siRNA)瞬时转染入Ana-1细胞,RT-PCR及Western blotting法检测其沉默效率,ELISA法检测LPS(1 mg/L)刺激下0 h、4 h、12 h和24 h Ana-1细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10浓度。结果:NF-κB p65 siRNA转染24 h后,NF-κB p65在基因水平及蛋白水平表达均被明显抑制(P<0.05)。RNA干扰组Ana-1细胞培养上清中细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达在相应时点内均较对照组明显降低(P<0.05),IL-10表达显著升高,在12 h和24 h差异显著(P<0.05)。结论:体外实验初步证实RNAi技术能有效沉默小鼠巨噬细胞NF-κBp65基因的表达,下调其下游调控的促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及上调抑炎症细胞因子IL-10的表达,从而抑制过度的炎症反应。
- 石榴李理袁伟锋黄文杰
- 关键词：NF-ΚBP65细胞因子类
- 肺表面活性物质对LPS诱导的急性肺损伤小鼠的肺保护作用及可能机制被引量：3
- 2013年
- 目的研究肺表面活性物质(pulmonary surfactant,PS)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的急性肺损伤(acutelung injury,ALI)小鼠的肺保护作用及相关机制。方法气管内雾化LPS建立ALI小鼠模型,PS于LPS建模前0.5 h经小鼠气管内雾化提前给药干预。气管内雾化LPS 2 h后处死小鼠,肺组织行HE染色及病理评分,qRT-PCR检测肺组织TNF-α和IL-1βmRNA转录水平,ELISA检测肺组织匀浆中TNF-α和IL-1β浓度,Western blot检测肺组织IκB-α、NF-κB、P38MAPK、ERK1/2和JNK蛋白表达及磷酸化水平。结果 PS干预可以明显减轻ALI小鼠肺组织病理损伤及评分(P<0.05),显著降低ALI小鼠肺组织TNF-α、IL-1βmRNA转录水平(P<0.05)和肺组织匀浆中TNF-α、IL-1β质量浓度(P<0.05),明显抑制ALI小鼠肺组织IκB-α、NF-κB和P38MAPK蛋白磷酸化水平(P<0.05)。结论外源性PS可通过抑制LPS诱导的炎症信号级联传导,进而抑制NF-κB信号环路的正反馈性放大,下调炎症介质表达,从而减轻肺组织病理损伤。
- 黄建华李理袁伟锋李伟峰黄文杰
- 关键词：肺表面活性物质脂多糖急性肺损伤P38MAPK
- Nox1基因启动子表达载体的构建被引量：2
- 2013年
- 目的克隆烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(Nox)上游启动子序列,为研究Nox1基因的转录调控奠定基础。方法以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得1415bp(-1415～0)、1276bp(-1415～-140)、997bp(-1415～-419)、839bp(-1415～-577)、470bp(-1415～-946)大小的Nox1启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic荧光素酶表达载体,构建荧光素酶报告基因载体,进行真核细胞转染后鉴定目的片段启动子活性。结果在A549细胞中,各Nox1启动子片段均有活性;-140～-419bp和-577～-946bp区域可能存在Nox1启动子核心区域。结论成功克隆了在肺泡上皮样细胞中具有活性的Nox1启动子序列,为进一步研究Nox1基因的转录调控机制奠定了基础。
- 徐采云李理袁伟锋黄文杰
- 关键词：启动子转录调控
- TNFR-Fc减轻LPS所致小鼠ALI炎症反应损伤被引量：4
- 2011年
- 目的:评价肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFR-Fc)能否有效下调炎症反应而减轻急性肺损伤(ALI)小鼠的肺组织破坏。方法:小鼠随机分为脂多糖(LPS)组、TNFR-Fc+LPS组和对照组。气管内滴入LPS复制ALI小鼠模型,TNFR-Fc组在滴入LPS前24 h腹膜腔注射TNFR-Fc(0.4 mg/kg),在滴入LPS后2 h收集标本,检测肺湿/干重、肺泡蛋白含量与肺组织病理评分;ELISA法检测血清TNF-α浓度及检测肺泡灌洗液与血清IL-1β、IL-6、IL-10与IFN-γ浓度。结果:TNFR-Fc显著降低血清TNF-α浓度(P<0.05),轻度降低肺湿/干重比例,显著降低BALF蛋白浓度(P<0.05),显著降低ALI评分数值(P<0.05)。TNFR-Fc显著降低致炎症细胞因子IL-6在BALF(P<0.05)与血清(P<0.05)中的浓度,轻度提高BALF中IL-10浓度(P>0.05),但其差异不显著,亦能显著提高血清IL-10浓度(P<0.05)。IL-1β与IFN-γ水平处理前后变化不显著。结论:TNFR-Fc中和ALI中过度表达的TNF-α,下调以IL-6为代表的炎症反应,减轻ALI的肺组织破坏。
- 袁伟锋李理徐虹黄文杰
- 关键词：急性肺损伤炎症
- 肿瘤坏死因子-α可诱导GSTM5核转位
- 2017年
- 目的构建稳定表达谷胱甘肽S转移酶mu5(GSTM5)的人支气管上皮16HBE细胞株,探讨诱导GSTM5核转位的关键因素。方法构建表达GSTM5基因的重组慢病毒载体(PLVX-puro-GSTM5-SBP-3*flag-N、PLVX-puro-3*flag-SBP-GSTM5-C)并制备出相应的慢病毒,感染人支气管上皮16HBE细胞后,经嘌呤霉素筛选获得细胞克隆;实时荧光定量PCR和蛋白印迹法(Western blot)分别检测细胞株中GSTM5的mRNA、蛋白表达水平;以肿瘤坏死因子-α(TNF-α;10ng/ml)刺激稳定转染细胞株(稳转株)0.5h,共聚焦荧光显微镜检测GSTM5核转位。结果成功构建稳定表达GSTM5人支气管上皮细胞株(16HBE-GSTM5-SBP-3*flag-N、16HBE-3*flagSBP-GSTM5-C);荧光共聚焦显微镜显示稳转株在TNF-α刺激诱导后,GSTM5由胞浆转入胞核,以16HBEGSTM5-SBP-3*flag-N稳转株更显著。结论 TNF-α刺激可诱导GSTM5人支气管上皮细胞株中GSTM5发生核转位,可能与其N端含有非经典核定位信号密切相关。
- 曾燕婷李理袁伟锋郭振辉黄文杰
- 关键词：核转位肿瘤坏死因子-Α
- 生物标志物在社区获得性肺炎中的应用进展被引量：6
- 2014年
- 社区获得性肺炎可发展成为严重脓毒症，病死率较高。尽早诊断，准确评估患者病情，把握抗生素启停用时机，准确评估患者结局，从而提高对患者诊治管理，避免抗生素的滥用，节省医疗资源。文章就生物标志物在社区获得性肺炎患者病情评估、抗生素使用指导、结局预测中的应用进行综述，以期能帮助临床医师进一步认识这些生物标志物。
- 张安兵黄文杰
- 关键词：社区获得性肺炎生物标志物
