国家自然科学基金(30371586)
- 作品数：29 被引量：155H指数：8
- 相关作者：陈正堂卓文磊章必成王俊郭燕更多>>
- 相关机构：第三军医大学新桥医院广州军区武汉总医院新疆军区更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 单克隆抗体在NSCLC治疗中的现状及展望被引量：2
- 2005年
- 赵伟鹏朱波陈正堂
- 关键词：NSCLC靶向治疗单克隆抗体CLINICAL临床肿瘤学实体肿瘤
- 以鼠尾胶为贴黏剂的小鼠淋巴管内皮细胞培养体系的建立被引量：8
- 2007年
- 目的:建立一个简便、廉价和稳定的小鼠淋巴管内皮细胞(LEC)培养体系.方法:应用不完全弗氏佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成,消化法分离获得LEC,置于自制的鼠尾胶包被的培养瓶(板)中培养.以免疫荧光化学法检测LEC特异性标记物VEGFR-3和LYVE-1的表达,以3H-TdR掺入率测定和细胞倍增时间检测LEC的增殖活力,以淋巴管形成试验判定LEC能否形成淋巴管样结构.结果:不完全弗氏佐剂能诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成,所获LEC活细胞数大于98%.免疫荧光化学检测表明,LEC表达VEGFR-3和LYVE-1.在鼠尾胶包被的培养瓶(板)中,LEC生长状况良好,3H-TdR掺入率明显增加,倍增时间为(42.7±3.2)h;在鼠尾胶凝胶中,LEC能形成淋巴管样结构.结论:鼠尾胶为贴黏剂的体系是一种简便、廉价和稳定的小鼠LEC培养体系.
- 章必成王俊赵勇高建飞郭燕陈正堂
- 关键词：细胞培养
- 针对CD_(44)V_3的短发夹RNA抑制肺癌A549细胞体外增殖被引量：3
- 2005年
- 目的:研究针对CD44V3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞CD44V3表达及增殖能力的影响。方法:设计和构建带有U6启动子的、能产生针对CD44V3的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至A549细胞,以RT-PCR和Western blot检测A549细胞转染前后CD44V3表达,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较A549细胞转染前后增殖能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞CD44V3mRNA和蛋白表达、以及增殖能力皆明显降低。结论:针对CD44V3的短发夹RNA能明显抑制人肺腺癌A549细胞体外增殖能力。
- 卓文磊王彦陈正堂
- 关键词：寡核苷酸类
- Layilin的RNAi对透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响被引量：2
- 2006年
- 目的：研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制透明质酸受体layilin表达,对透明质酸(hyaluronan,HA)诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响。方法：构建能表达针对layilin的短发夹RNA(shRNA)的阳性RNA干扰(posi- tive RNAi,Pi)质粒和表达不针对任何已知mRNA的shRNA的阴性RNAi(negative RNAi,Ni)质粒,分别转染至A549细胞,以RT-PCR和Western blot检测A549细胞转染前后layilin表达,并用新霉素抗性筛选得到layilin表达受抑制的阳性RNAi(Pi)细胞和layilin表达未受影响的阴性RNAi(Ni)细胞。分别在存在或不存在外源性透明质酸的培养条件下,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较正常(control,C)、Pi、Ni组细胞体外增殖能力。结果：在不存在外源性透明质酸的培养条件下,C、Pi、Ni组A549细胞体外增殖能力无显著差异(P＞0．05),在存在外源性透明质酸的培养条件下,Pi和C组相比,体外增殖能力显著降低(P＜0．01),Ni和C组相比,体外增殖能力无显著差异(P＞0．05)。结论：抑制layilin表达能抑制透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖。
- 卓文磊王彦陈正堂
- 关键词：腺癌透明质酸A549细胞
- VEGF-C基因3′端未翻译区对荧光素酶表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的构建小鼠血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因3′端未翻译区(3′UTR)的荧光素酶表达载体,利用双荧光报告系统观察VEGF-C基因3′UTR对荧光素酶基因表达的影响。方法通过PCR分别扩增小鼠Lewis肺癌细胞VEGF-CcDNA全长3′UTR(429bp)和一段312bp的编码区序列(CR),采用基因工程方法将PCR产物克隆至pTA2克隆载体,随后再亚克隆至荧光素酶报告基因载体(pGL3-Promoter)荧光素酶编码基因下游的XbaⅠ酶切位点,使用LipofectamineTM2000真核转染小鼠Lewis肺癌细胞,化学发光法检测荧光素酶的活性,定量RT-PCR检测荧光素酶mRNA水平。结果PCR成功扩增出与预期长度相符的小鼠VEGF-CCR(312bp)和VEGF-C3′UTR(429bp)。经酶切、测序鉴定,小鼠VEGF-C基因3′UTR和CR均插入到pGL3-Promoter的XbaⅠ位点,插入序列碱基组成和插入方向均正确,获得载体pGL3-VEGF-C3′UTR和pGL3-VEGF-CCR。荧光素酶报告系统和定量RT-PCR检测显示,与pGL3-Promoter组比较,pGL3-VEGF-C3′UTR转染组荧光素酶活性和mRNA水平均显著降低,而pGL3-VEGF-CCR组与pGL3-Promoter组之间无显著性差异。结论VEGF-C基因3′UTR可以抑制荧光素酶的表达。
- 王俊郭燕章必成关华军陈正堂
- 关键词：血管内皮生长因子C荧光素酶淋巴管生成
- RNAi抑制Layilin表达对肺腺癌A549细胞体外侵袭和荷瘤鼠体内淋巴转移的影响被引量：5
- 2007年
- 背景与目的:透明质酸参与了多种肿瘤细胞的侵袭行为,Layilin是一种新发现的特异性透明质酸受体。本研究在发现Layilin表达于人肺腺癌A549细胞株的前期工作基础上,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制Layilin表达后,对人肺腺癌A549细胞体外侵袭和体内淋巴道转移的影响。方法:构建能表达针对Layilin的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的RNAi质粒(Layilin siRNA plasmid)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒(control siRNA plasmid),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到Layilin表达受抑制的A549-siLayilin细胞和Layilin表达未受影响的A549-siControl细胞。针对非转染(A549-nontransfec-tion)、A549-siLayilin、A549-siControl 3组细胞,分别采用RT-Real time PCR和Western blot技术检测Layilin表达,用Boyden小室实验检测细胞体外侵袭能力,用爪垫皮下种植淋巴结转移模型检测淋巴转移能力。结果:与A549-non-transfection组和A549-siControl组相比,A549-siLayilin组细胞Layilin表达减少,体外侵袭能力降低,体内淋巴转移率下降。结论:通过RNAi抑制Layilin表达后,能有效抑制透明质酸所诱导的A549细胞体外侵袭和裸鼠移植瘤淋巴转移。本研究为通过RNAi手段抑制Layilin表达,进而抑制肺腺癌淋巴转移提供了有益的思路。
- 卓文磊王彦陈正堂敖绪军
- 关键词：A549细胞淋巴道转移
- 针对layilin的shRNA抑制透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外黏附和侵袭被引量：5
- 2006年
- 背景与目的透明质酸参与了多种肿瘤细胞黏附侵袭行为。layilin是一种新发现的与细胞骨架有密切联系的透明质酸受体。本研究的目的是观察针对layilin的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞layilin表达及受透明质酸诱导黏附侵袭行为的影响。方法设计和构建带有U6启动子的能产生针对layilin的shRNA的RNA干扰质粒,转染至A549细胞,以RT-PCR、Westernblot和免疫荧光检测A549细胞转染前后layilin表达,以平板黏附模型和Boyden小室模型检测A549细胞转染前后黏附和侵袭能力。结果和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞layilin表达明显减少(P<0.01),而且受透明质酸诱导而黏附于平板和穿过Boyden小室隔膜的A549细胞数皆明显减少(P<0.01)。结论针对layilin的shRNA能明显抑制透明质酸诱导的人肺腺癌A549细胞体外黏附和侵袭能力。
- 卓文磊王彦陈正堂
- 关键词：A549细胞
- 透明质酸黏素和肿瘤被引量：10
- 2005年
- 卓文磊陈正堂
- 关键词：肿瘤
- 血管生成拟态和肿瘤的关系被引量：4
- 2005年
- 血管生成拟态指由恶性肿瘤细胞而非血管内皮细胞连接形成的、能为肿瘤提供血供的管网状结构,存在于恶性黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌、炎性乳腺癌和某些软组织肉瘤。其发生和肿瘤细胞呈现出多潜能的胚胎样表型有关。进一步研究血管生成拟态的分子机制,探索有效的拮抗其过程的方案,有可能提供一种能有效治疗肿瘤、并且对正常生理过程的影响较小的策略。
- 卓文磊陈正堂
- 关键词：肿瘤血管生成血管生成拟态
- Podoplanin阳性淋巴管密度与非小细胞肺癌预后的关系被引量：9
- 2006年
- 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者淋巴管生成(lymphangiogenesis)与预后的关系。方法应用免疫组织化学的方法,检测68例NSCLC和8例肺炎症性肌纤维母细胞瘤(PIMT)组织标本中CD31、podoplanin和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)的表达,进行淋巴管密度及微血管密度计数;与血管内皮标志物CD31比较,评价VEGFR-3和podoplanin标志物的表达;分析淋巴管密度与患者临床病理改变及预后的关系。结果Podoplanin阳性淋巴管密度与CD31阳性血管密度、VEGFR-3阳性血管密度无相关性;VEGFR-3与CD31阳性血管密度有相关性。镜下见VEGFR-3阳性管多数有血管,而podoplanin阳性管未发现血管。淋巴管密度在NSCLC组为(22.4±8.6)支/mm2,明显高于PIMT组的(10.9±4.9)支/mm2;与淋巴结转移阴性组[(20.4±8.2)支/mm2]比较,淋巴结转移阳性组淋巴管密度[(24.8±9.0)支/mm2]明显增高;临床Ⅲ+Ⅳ期患者组织淋巴管密度[(27.2±9.2)条/mm2]明显高于Ⅰ+Ⅱ期的(19.5±6.9)支/mm2;淋巴管密度与NSCLC的组织类型、细胞分化、患者的年龄和性别无关。多因素分析结果显示,淋巴管密度是影响NSCLC患者预后的独立危险因素,高淋巴管密度较低淋巴管密度患者预后差。结论Podoplanin是较为特异的淋巴管内皮标志物,淋巴管密度可作为NSCLC患者预后有意义的预测指标之一。
- 王艳孙建国叶明福陈正堂
- 关键词：淋巴管生成预后
