澳大利亚国立卫生与医学研究委员会基金(455597)
- 作品数:2 被引量:7H指数:1
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- 枯草杆菌ylmK基因的荧光标记及Ylmk蛋白的亚细胞定位被引量:1
- 2010年
- 目的:对枯草杆菌ylmK基因进行3'端荧光标记以便对其产物YlmK蛋白在菌体中的位置进行初步观察。方法:以BS168菌株基因组DNA为模板,PCR扩增ylmK基因的3'端序列,并将其克隆到载体pSG1164中,形成ylmK'-gfpmutl融合,构建重组载体pNG424;将pNG424转化枯草杆菌168菌株,单交换形成完整的功能性3'端gfpmutl标记的ylmK基因,菌落PCR对阳性转化子BS362进行鉴定,用表面荧光显微镜技术对BS362进行观察。结果:荧光检测结果表明GFP标记的YlmK分布于菌体的外周,在位置上靠近细胞膜并与之平行排列。结论:YlmK是一种膜蛋白。
- 霍乃蕊Lewis P J
- 关键词:枯草杆菌荧光标记膜蛋白
- 枯草杆菌ylyA基因的绿色荧光蛋白标记被引量:7
- 2008年
- 【目的】本研究对枯草杆菌ylyA基因进行荧光标记以便对其产物YlyA在菌体中的位置进行初步观察。【方法】以不同菌株基因组DNA为模板,对ylyA基因进行PCR扩增和序列分析;重新设计引物扩增全长的ylyA并将其克隆到载体pSG1729中,形成gfpmut1-ylyA融合而构建重组载体pNG426;将pNG426转化枯草杆菌168菌株,双交换使gfpmut1-ylyA插入染色体的amyE位点,用碘染色法和菌落PCR对阳性转化子BS363进行鉴定。NA固体培养基上生长的BS363经0.5%木糖诱导表达后,利用表面荧光显微镜技术进行观察。【结果】通过对多个PCR产物的序列分析确定了ylyA基因的正确序列以及正确的翻译起始位点;成功将重组载体pNG426转化枯草杆菌得到了BS363菌株;荧光检测结果表明GFP标记的YlyA分布于菌体的外周,在位置上靠近细胞膜并与之平行排列。【结论】生长缓慢的BS363菌体,在0.5%木糖诱导下产生的荧光标记YlyA蛋白分布在细胞外周,可能在膜生物学中发挥作用。
- 霍乃蕊Lewis P J
- 关键词:枯草杆菌荧光标记