国家自然科学基金(30371563)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- CTLA4Ig可诱导T淋巴细胞对氧化修饰低密度脂蛋白的免疫无反应性被引量：3
- 2007年
- 目的研究融合蛋白CTLA4Ig对氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的T淋巴细胞特异性免疫反应的作用,探索预防和延缓动脉粥样硬化发生和发展的新途径。方法从健康成人外周血分离单核细胞,加入500IU/ml的重组人粒单细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和500IU/ml的重组人白细胞介素4(rhIL-4),培养6d。取1×106个细胞以流式细胞仪检测CD14的表达,其余细胞分为4组,分别加入细菌脂多糖(LPS)30ng/m(lLPS组)、LDL10μg/ml(LDL组)、ox-LDL10μg/ml(ox-LDL组)和相同体积的PBS(PBS组),作用48h,以流式细胞仪检测CD86和HLA-DR的阳性表达率和平均荧光强度(MFI)。将各组DC与同种异体T淋巴细胞以1:5和1:10的比例混合进行同种异体混合淋巴细胞增殖反应(MLR),其中ox-LDL组在1:5的试验中分为4个亚组,分别给予加入1.25、0.62、0.31μg/ml的CTLA4Ig和不加CTLA4Ig的处理,各组细胞继续培养4d,以噻唑蓝(MTT)比色法检测T淋巴细胞增殖活性,结果以刺激指数(SI)表示。结果细胞培养6d后CD14的阳性表达率为2.9%,证实已由单核细胞转化为DC。LPS组、ox-LDL组CD86阳性表达率(96.0%±8.8%,97.7%±11.4%)和HLA-DR阳性表达率(90.3%±8.8%,90.9%±7.0%)均明显高于LDL组(90.0%±10.2%,84.4%±9.6%)和PBS组(87.3%±8.4%,83.6%±7.0%)(均P<0.05),ox-LDL组CD86MF(I73.4±6.6)和HLA-DRMFI(87.0±7.1)均明显高于LDL组(40.0±7.4,55.0±7.7,均P<0.01)和PBS组(54.6±8.2,P<0.01;70.2±6.7,P<0.05)。在MLR中,DC:T细胞=1:5和1:10两种条件下,LPS组、ox-LDL组SI均明显高于LDL组和PBS组(均P<0.05)。在ox-LDL组的MLR中,以1.25、0.62、0.31和0μg/ml的CTLA4Ig处理的各亚组SI分别为0.96±0.30,1.12±0.33,1.29±0.28和1.64±0.37,CTLA4Ig浓度为1.25μg/ml时,ox-LDL激发的同种异体MLR已被完全抑制。结论ox-LDL可作为抗原被DC递呈,激发同种异体MLR;CTLA4Ig能明显抑制该作用,诱导T细胞对ox-LDL的免疫无反应。这一结果为动脉粥样硬化防治的研究提示了新的思路。
- 肖云玲高海青刘向群张建华张彩
- 关键词：T淋巴细胞树突状细胞动脉粥样硬化免疫耐受
- CTLA4Ig诱导对氧化修饰低密度脂蛋白免疫耐受的机制研究被引量：1
- 2008年
- 目的:动脉粥样硬化(AS)是一种炎症过程,获得性免疫应答参与AS发生和发展。氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)是目前认为最重要的AS相关自身抗原。本研究拟应用融合蛋白CTLA4Ig,在体外建立对ox-LDL的免疫耐受模型,从而有可能预防免疫应答导致的炎症损伤在AS发病中的作用,为防治AS提供新的策略。方法:分离人外周血单个核细胞诱导树突状细胞(DC)。分别加入LPS、LDL、ox-LDL刺激48 h,与同种异体淋巴细胞行混合淋巴细胞反应(MLR)。ox-LDL组的MLR中,分别加入不同浓度的CTLA4Ig。以MTT法检测T细胞的增殖。流式细胞仪检测MLR中T细胞活化和T细胞凋亡。ELISpot检测MLR中T细胞分泌IL-2、IFN-γ和IL-4的情况。结果:ox-LDL组MTT中的刺激指数(SI)明显高于LDL组(P<0.05);应用CTLA4Ig后,SI较未应用时明显降低(P<0.05,P<0.01);CTLA4Ig可明显减少T细胞CD25的表达(P<0.05,P<0.01),增加T细胞的凋亡(P<0.05,P<0.01)。CTLA4Ig可减少T细胞分泌IL-2和IFN-γ的ELISpot计数(P<0.01),增加IL-4的ELISpot计数(P<0.05)。结论:CTLA4Ig可在体外诱导对ox-LDL的免疫耐受;CTLA4Ig通过抑制T细胞活化、诱导T细胞凋亡和促进Th1/Th2免疫偏移等机制,诱导免疫耐受。
- 肖云玲高海青张建华张彩
- 关键词：动脉硬化免疫耐受树突细胞
- 树突状细胞在动脉粥样硬化免疫反应中的作用被引量：2
- 2007年
- 越来越多的证据表明，炎症和免疫反应是各种内在和外在危险因素导致动脉粥样硬化（AS）发生发展的中心环节。而树突状细胞（Dendritic Cell，DC）是一种广泛分布于机体各组织的抗原递呈细胞，它具有不成熟和成熟两种功能状态。一旦不成熟的DC捕获抗原以后，就会发展为成熟的DC，从而具有激活T细胞的功能。近来认为DC可能处于AS免疫反应的中心环节。
- 由倍安高海青
- 关键词：致动脉粥样硬化树突状细胞免疫反应抗原递呈细胞激活T细胞CELL
- CTLA4Ig诱导T细胞对氧化修饰低密度脂蛋白无能的体外研究
- 2008年
- 目的在体外诱导T细胞对氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）的免疫无能，以期预防免疫损伤在动脉粥样硬化（AS）发病中的作用，为防治AS提供新的思路。方法分离外周血单个核细胞诱导树突状细胞（DC）。分别加入LPS、LDL、ox-LDL等刺激48h，与同种异体淋巴细胞行混合淋巴细胞反应（met）。ox-LDL组的MLR中，分别加入不同浓度的CTLA4Ig，以MTT法检测T细胞的增殖。流式细胞仪检测MLR中T细胞活化和T细胞凋亡。ELISPOT检测MLRl中T细胞分泌IL-2、IFN-γ和IL4的情况。结果ox-LDL组MTT中的刺激指数（SI）明显高于LDL组（DC：T=1：5，1．6717±0．3152vs1．4250±0．2874，P〈0．05；DC：T=1：10，1．5458±0．2748vs1．3352±0．2991，P〈0．05）；应用CTIA4Ig后，sI较未应用时明显降低（CTIA4Ig1．25μg/ml，0．96±0．30vs1．64±0．33，P〈0．01；CTIA4Ig0．62μg/ml，1．12±0．33vs1．64±0．33，P〈0．05；CTIA4Ig0．31μg/ml，1．29±0．28vs1．64±0．33，P〈0．05）；CTIA4Ig可明显减少T细胞CD25的表达（CTIA4Ig1．25μg/ml，11．26±0．58vs14．25±1．02，P〈0．05；CTIA4Ig10μg/ml，8．42±0．45，P〈0．01），增加T细胞的凋亡（CT-IA4Ig1．25μg/ml，12．54±3．69vs6．09±2．24，P〈0．05；CTIA4Ig10μg/ml，26．87±5．06vs6．09±2．24，P〈0．01）。ELISPOT表明，CTIA4Ig可减少IL-2（CTIA4Ig1．25μg/ml，386±42vs534±54，P〈0．05；CTIA4Ig10μg/ml，230±27vs534±54，P〈0．01）和IFN-γ（CTIA4Ig1．25μg/ml，445±48vs672±46，P〈0．05；CTIA4Ig10μg/ml，193±39vs672±46，P〈0．01）的ELISPOT计数，增加IL4的ELISPOT计数（CTIA4Ig1．25μg/ml，401±32vs332±41，P〈0．05；CTIA4Ig10μg/ml，453±57vs332±41，P〈0．05）。结论CTIA4Ig可在体外诱导T细胞对ox-LDL的免疫无能；CTIA4Ig通过抑制T细胞活化、诱导T细胞凋亡和促进TH1／TH2免疫偏移等机制，诱导T细胞免疫无能。
- 肖云玲高海青张建华张彩
- 关键词：免疫耐受树突状细胞氧化修饰低密度脂蛋白
- 树突状细胞摄取和提呈颗粒化HPV-E7抗原能诱导高水平体液和细胞免疫应答被引量：4
- 2004年
- 目的 研究特定大小聚苯乙烯微粒作为抗原载体介导树突状细胞 (DC)摄取和提呈抗原 ,诱导体液和细胞免疫应答的能力 ,并与DC 微粒 卵清蛋白 (OVA)及DC E7抗原表位的诱导能力进行比较。方法 用粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)联合白细胞介素 (IL) 3从小鼠骨髓黏附细胞培养制备DC ,流式细胞术分析表型 ,细胞经荧光素异硫氰酸酯 (FITC)标记的微粒 OVA或微粒 E7饲育 ,或用OVA抗原表位 (SIIFEKL多肽 )或E7抗原表位 (RAHYNIVTF多肽 )负载 ,流式细胞术分析DC对微粒 OVA和微粒 E7的摄取能力 ,B3Z细胞活化试验检测DC提呈微粒 OVA和OVA抗原表位的能力。分别用DC 微粒 OVA、DC 微粒 E7、DC OVA抗原表位、DC E7抗原表位经双侧足掌免疫小鼠 ,36h后取髂部引流淋巴结 ,流式细胞仪分析微粒阳性细胞的表型 ,10d后用酶联免疫吸附实验 (ELISA)法测定小鼠血清的抗体水平 ,酶联免疫斑点法 (ELISPOT法 )检测小鼠脾细胞干扰素γ(IFNγ)形成单位。结果 小鼠骨髓黏附细胞在GM CSF和IL 3条件下培养 5d后大部分细胞呈树突状形态和表型 ,经微粒 OVA或微粒 E7饲育后 ,能高效地摄取和提呈抗原 ,用DC 微粒 OVA或DC 微粒 E7免疫小鼠后引流淋巴结微粒阳性细胞 ,主要组织相容 (抗原 )复合物 (MHC)
- 李杰高海青赵川莉李丽珍纪春岩侯明M Plebanski
- 关键词：树突状细胞细胞摄取体液细胞免疫免疫应答
- 氧化修饰低密度脂蛋白作为抗原被树突状细胞递呈的实验研究
- 2007年
- 目的探讨氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)是否能作为抗原被树突状细胞(DC)直接递呈给淋巴细胞。方法以贴壁法从人外周血分离单核细胞,加入500IU/ml的rhGM-CSF和500IU/ml的rhIL-4,培养6d后加入LPS(20ng/ml)、LDL(10μg/ml)、ox-LDL(10μg/ml),作用48h,以流式细胞仪检测DC表型(CD14、CD86和HLA-DR)的变化,与同种异体T淋巴细胞以1∶5和1∶10的比例行混合淋巴细胞增殖反应,培养4d,以MTT法检测增殖反应。结果ox-LDL10μg/ml可促进DCCD86和HLA-DR的表达,有效激发同种异体淋巴细胞反应。结论ox-LDL可在体外作为抗原被DC递呈,ox-LDL和DC均可能参与致动脉粥样硬化(AS)的特异性免疫反应。
- 肖云玲刘向群张建华张彩高海青
- 关键词：动脉粥样硬化氧化修饰低密度脂蛋白树突状细胞免疫
