国家自然科学基金(30371568)
- 作品数：10 被引量：82H指数：6
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- 阿托伐他汀下调内皮细胞Toll样受体4及其下游分子的表达被引量：3
- 2009年
- 背景他汀类药物有独立于调脂作用之外的抗炎作用。近年研究表明Toll-样受体4(TLR4)参与了动脉粥样硬化的形成和发展。目的观察阿托伐他汀对脂多糖(LPS)诱导的内皮细胞TLR4及其下游分子表达的影响,以探讨他汀类药物抗炎作用的分子机制。方法采用阿托伐他汀(1及10μmol/L)或核转录因子(NF)κB抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)预孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)30min后,应用LPS(1mg/L)作用24h。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TLR4、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和E选择素mRNA表达水平;采用流式细胞术检测TLR4蛋白表达水平;采用蛋白质印迹技术检测核蛋白NF-κBp65表达的变化。结果与LPS组比较,阿托伐他汀1μmol/L组减轻LPS介导的TLR4表达增加[TLR4mRNA:(1.24±0.21)比LPS组(1.82±0.27),P<0.05;TLR4阳性细胞数(50.1±4.7)%比LPS组(69.5±7.8)%,P<0.05],阿托伐他汀减轻LPS介导的ICAM-1和E选择素的表达增加。阿托伐他汀抑制LPS介导的NF-κBp65活化(50.4±10.1比LPS组72.3±12.5,P<0.05),10μmol/L阿托伐他汀较1μmol/L作用更明显;CAPE(20mg/L)也明显抑制了LPS介导的TLR4及ICAM-1和E选择素表达上调。结论阿托伐他汀抑制TLR4/NF-κB及其下游分子表达是他汀类药物抗炎作用机制之一。
- 王虹艳曲鹏姜华
- 关键词：人脐静脉内皮细胞阿托伐他汀TOLL样受体4核转录因子ΚB细胞间黏附分子1E选择素
- Toll样受体4信号激动对心肌细胞血管紧张素原及血管紧张素Ⅱ1型受体表达的影响被引量：6
- 2008年
- 目的应用 Toll 样受体4(TLR4)的特异性激动剂脂多糖(LPS)刺激培养的新生大鼠心肌细胞,激活 TLR4介导的信号通路,观察对心肌局部的血管紧张素原和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT_1R)表达的影响,探讨TLR4在心血管疾病中的参与机制。方法用 TLR4的激动剂 LPS 以10、100、1000 ng/mL 的浓度作用于体外培养新生大鼠心肌细胞(NRVMs)24 h 后应用 RT-PCR 法测定 NRVMs 的 TLR4、血管紧张素原(AGT)及 AT_1RmRNA 的表达情况。结果 LPS 刺激下明显升高 NRVMs TLR4 mRNA 表达水平,并呈剂量依赖性(P<0.05)。AGT 和 AT_1R 的表达也明显增高(P<0.05)。结论培养的 NRVMs 在 LPS 的作用下,在10 ng/mL 的浓度下,TLR4增加自身受体 TLR4表达的同时,也上调 NRVMs 的 AGT 与 AT_1R 的表达,提示 TLR4可能通过介导的心肌局部肾素血管紧张素系统(RAS)的活化加重细胞的损伤,参与心血管疾病的发生发展。
- 姜华曲鹏王虹艳王纪文
- 关键词：TOLL样受体4肾素血管紧张素系统脂多糖
- 银杏叶提取物对脐静脉内皮细胞Toll样受体4／核因子-кB途径及细胞间黏附分子1表达的影响被引量：11
- 2005年
- 目的：观察具有抗血小板活化因子、清除氧自由基、抗氧化作用的银杏叶提取物对脂多糖介导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4／核因子-κB信号途径及细胞间黏附分子、E-选择素表达的影响。 方法：①实验于2003-01／2004-12在大连医科大学附属第二医院实验中心完成。取健康产妇分娩后的新鲜婴儿脐带(由本院分娩的产妇自愿提供)，应用胶原酶消化人脐静脉内皮，收集内皮细胞进行培养。②将培养成融合状态的内皮细胞随机分为4组：对照组：M199培养基中不加其他干预物质；脂多糖组：M199培养基中加入脂多糖1mg／L；脂多糖+银杏叶提取物50组：预先加入银杏叶提取物50(80mg／L)，60min后加入脂多糖1mg／L；脂多糖+咖啡酸苯乙酯组：预先加入咖啡酸苯乙酯(20mg／L)30min。干预12h，收集细胞检测Toll样受体4和细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平；干预1h，收集细胞提取核蛋白检测转录核因子κBp65活化变化。③采用反转录聚合酶链反应检测Toll样受体4和细胞间黏附分子1、E-选择素mRNA表达水平；采用蛋白质印迹技术检测Toll样受体4蛋白表达水平及核因子-KB活化的变化；采用酶联免疫吸附方法检测人脐静脉内皮细胞表面细胞间黏附分子1，E-选择素蛋白表达。④多个样本均数的比较采用方差分析，多个样本均数的两两比较采用q检验 结果：①人脐静脉内皮细胞Toll样受体4mRNA和蛋白表达(A值)：脂多糖组明显高于对照组(P<0．01)，脂多糖+银杏叶提取物组和脂多糖+咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组(p<0．05～0．01)。②人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1、E-选择素mRNA和蛋白表达(A值)：脂多糖组明显高于对照组(P<0．01)，脂多糖+银杏叶提取物组和脂多糖+咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组(P<0．05～0．01)。③人脐静脉内皮细胞核蛋白核因子-κBp65活化(A值)：脂多糖组明�
- 王虹艳曲鹏富晶姜华
- 关键词：脐静脉E-选择素
- 阿托伐他汀对AngⅡ诱导大鼠心肌肥大的抑制作用及对TLR4基因表达的影响被引量：6
- 2007年
- 目的:探讨阿托伐他汀(atorvastatin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌细胞(CM)肥大的抑制作用及对TLR4基因表达的影响,旨在探索他汀类药物对心肌肥大抑制作用的可能机制。方法:采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CM,应用考马斯亮蓝法测定CM蛋白含量、RT-PCR分别检测心肌肌球蛋白重链β-MHC、AT1受体和TLR4 mRNA表达。结果:①AngⅡ可使CM蛋白含量及β-MHC mRNA表达明显增加,并能够上调AT1mRNA和TLR4 mRNA表达。②Ator呈浓度依赖性抑制由AngⅡ诱导的CM蛋白含量及β-MHC mRNA表达的增加。③Ator呈浓度依赖性下调由AngⅡ诱导的肥大CMAT1 mRNA和TLR4 mRNA表达。结论:阿托伐他汀可部分抑制CM肥大的发生,下调AT mRNA和TLR4 mRNA表达是其作用机制之一。
- 崔晓琼曲鹏姜华孔晓丹王虹艳
- 关键词：阿托伐他汀心肌肥大
- TLR4激动上调内皮细胞氧化低密度脂蛋白受体LOX-1表达被引量：13
- 2005年
- 目的近年研究表明介导先天免疫反应的受体Toll样受体4(TLR4)参与了动脉硬化的发生发展。业已证明氧化低密度脂蛋白受体LOX1介导内皮细胞活化和功能失调,激发炎症过程,在动脉粥样硬化的发生和发展中起着极为重要作用。本研究观察TLR4激动是否调节内皮细胞LOX1表达。方法应用脂多糖(LPS)刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24h。采用RTPCR和流式细胞术分别检测TLR4、LOX1mRNA和蛋白表达水平。为了观察转录因子NFκB在调节LOX1表达中的作用,应用NFκB特异性抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)预处理细胞,然后以LPS刺激,检测LOX1mRNA和蛋白变化。结果LPS(10～1000ng/mL)上调HUVECsTLR4和LOX1mRNA表达,LPS(1000ng/mL)上调TLR4和LOX1蛋白表达,CAPE(20μg/mL)可抑制LPS介导的LOX1表达上调。结论TLR4/NFκB信号途径可能通过上调内皮细胞LOX1表达参与动脉粥样硬化的发生及发展。
- 王虹艳曲鹏富晶姜华
- 关键词：TOLL样受体4脂多糖人脐静脉内皮细胞氧化低密度脂蛋白受体
- 抑制NF-κB对Toll样受体4在Goldblatt鼠左室心肌中表达的影响被引量：15
- 2005年
- 目的观察两肾一夹(twokidney,oneclip)高血压大鼠肥厚的左室心肌细胞中Toll样受体4(Tolllikereceptor4,TLR4)的表达情况。并且应用NFκB阻断剂PDTC进行干预,观察阻断NFκB以后,TLR4在Goldblatt鼠左室心肌细胞中表达的变化,探讨TLR4与左室肥厚发生的关系及NFκB的活性对TLR4表达的影响。方法雄性SpragueDawley(SD)大鼠40只,随机分为高血压非用药组(H组,n=13)、PDTC治疗组(P组,n=14)和假手术组(C组,n=13)3组。H组和P组采用两肾一夹法建立大鼠高血压模型,C组手术过程同上,但不放置银夹。术后两周开始给药直至术后8周,P组给予PDTC200mg/(kg·d)皮下注射,H组和C组给予等体积的生理盐水。每周监测各组大鼠的尾动脉压。术前及处死前行超声心动图检查。术后8周处死大鼠,留取左室标本并称重。应用免疫组化法观察各组大鼠心肌组织中NFκB的表达情况,应用Westernblot检测TLR4在各组大鼠心肌组织中蛋白的表达情况。结果P组血压及左室重量指数(LVMI)较H组显著降低。H组NFκB的表达明显高于C组,而P组大鼠心肌NFκB的表达明显被抑制。各组TLR4的表达情况与NFκB相一致。结论(1)TLR4和NFκB在Goldblatt鼠左室心肌中的表达水平明显增高。(2)PDTC抑制心肌NFκB表达的同时下调TLR4蛋白水平的表达。(3)TLR4信号通路的活化可能参与Goldblatt鼠心肌肥厚的发生和发展。
- 王纪文曲鹏姜华王虹艳李桂华和亚萍富晶吕申
- 关键词：NF-KBTOLL左室心肌心肌肥厚
- TLR4激动对内皮细胞粘附功能的影响及阿托伐他汀的干预研究被引量：6
- 2006年
- 目的:观察Toll样受体4(TLR4)激动对脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化低密度脂蛋白受体LOX-1的调节和对单核细胞与HUVECs粘附率的影响,以及LOX-1在内皮细胞粘附功能中的作用,并观察阿托伐他汀的干预作用。方法:RT-PCR方法检测TLR4、LOX-1 mRNA表达水平,流式细胞术检测TLR4、LOX-1蛋白表达水平,细胞计数法计算单核细胞与HUVECs粘附率。结果:脂多糖(1 mg/L)孵育24 h上调HUVECs TLR4、LOX-1mRNA和蛋白的表达,增加单核细胞与HUVECs粘附率,抗LOX-1抗体部分抑制LPS介导的单核细胞与HUVECs粘附率的增加,阿托伐他汀(10μmol/L)抑制脂多糖介导的上述效应。结论:TLR4激动上调LOX-1表达及增加内皮细胞粘附功能,LOX-1在LPS介导的单核内皮细胞粘附功能中起部分作用,阿托伐他汀可能通过抑制TLR4表达及TLR4介导的LOX-1表达而发挥其内皮细胞保护作用。
- 王虹艳曲鹏于志红姜华周晓钰
- 关键词：阿托伐他汀脂多糖类LDL
- 高血压大鼠左室重构时Toll样受体4的表达及作用被引量：10
- 2008年
- 目的探讨Toll样受体4（toll like receptor 4，TLR4）在高血压大鼠左室重构中的表达及作用。方法健康雄性sprague—dawley（SD）大鼠6～8周龄，体重160～190g。采用两肾一夹法建立Coldblatt鼠模型，45只SD大鼠随机分为高血压组（25只）和假手术组（20只）。每周测1次尾动脉压，每两周测1次超声心动图。术后第8周，应用RT—PCR及Western—blot从mRNA及蛋白水平检测左室心肌TLR4的表达情况；放免法检测血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量。结果与假手术组相比，术后8周高血压组尾动脉压、收缩末期经线室壁应力（Meridional end—systolic wall stress，MESS）及左室重量指数（left ventricle mass index，LVMI）、相对室壁厚度（relative wall thickness，RWT）和心肌AngⅡ含量均明显增高（P〈0．01）；高血压组大鼠左室心肌组织中TLR4 mRNA及蛋白表达水平也明显升高（P〈0．01）。相关性分析TLR4蛋白表达与LVMI、RWT呈正相关；同时与动脉压、MESS及局部AngⅡ含量相关。结论高血压左室重构时TLR4表达明显增高，表明TLR4及其介导的免疫、炎症反应可能参与高血压左室重构的发生发展，持续的压力负荷及心肌局部AngⅡ含量可能对左室心肌TLR4表达起到重要调节作用。
- 姜华曲鹏王纪文李贵华
- 关键词：高血压心室重构TOLL样受体
- Toll样受体4/核因子κB和氧化低密度脂蛋白受体LOX-1对单核内皮细胞黏附的影响被引量：19
- 2005年
- 目的近年研究表明介导先天免疫反应的受体Toll样受体4(TLR4)参与动脉粥样硬化的发生发展。TLR4激动后通过诱导核因子κB(NFκB)激活,调控炎症因子的表达。研究观察TLR4/NFκB激活对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化低密度脂蛋白受体(lectinlikeoxidizedlowdensitylipoproteinreceptor1,LOX1)、细胞间黏附分子1(intercellularadhesionmolecule1,ICAM1)、E选择素(Eselectin)表达的调节,以及它们在介导单核内皮细胞黏附中的作用。方法应用脂多糖(LPS,1mg/L)刺激HUVECs24h。采用RTPCR方法检测TLR4、LOX1、ICAM1、EselectinmRNA表达水平;采用蛋白质印迹技术检测TLR4、LOX1蛋白表达水平及核蛋白NFκBp65表达的变化;采用直接计数法观察HUVECs与单核细胞的黏附率。结果LPS上调TLR4表达,激活NFκB,上调HUVECsLOX1、ICAM1、Eselectin表达,增加单核细胞与内皮细胞的黏附率;抗LOX1、ICAM1、Eselectin抗体均部分抑制LPS介导的单核与内皮细胞黏附率的增加;NFκB抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)抑制了LPS介导的上述效应。结论TLR4/NFκB激活上调LOX1、ICAM1、Eselectin表达,它们均在LPS介导的单核内皮细胞黏附过程中起部分作用,NFκB在LPS介导的上述效应中起关键调节作用,干预NFκB激活可能成为防治动脉粥样硬化的靶目标。
- 王虹艳曲鹏吕申刘敏姜华
- 关键词：脂蛋白氧化低密度脂蛋白受体TOLL样受体4内皮细胞黏附核因子ΚBLOX-1
- Toll样受体4-可能参与高血压左室重构的一个新的跨膜信号转导受体(英文)被引量：2
- 2007年
- 目的:观察Goldblatt大鼠左室重构过程中TLR4表达及其与压力负荷及左室心肌血管紧张素Ⅱ含量的相互关系,探讨TLR4在高血压左室重构发生发展中的作用及参与机制。方法:健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠7-9周龄,体重165-210 g。采用2肾一夹法建立Goldblatt大鼠模型,45只SD大鼠随机分为高血压组(H组,n=25)和假手术组(Sham组,n=20)。每周测1次尾动脉压,每2周测1次超声心动图,术后第8周,处死大鼠,留取左室心肌组织。免疫组化观察左室心肌TLR4表达,应用RT-PCR及Western blotting从mRNA及蛋白水平检测TLR4的表达情况;放免检测左室心肌AngⅡ的含量。结果:术后8周H组尾动脉压、收缩末期经线室壁应力(MESS)及左室重量指数(LVMI)、相对室壁厚度(RWT)和心肌AngⅡ含量均明显高于sham组(P<0.01);H组大鼠左室心肌组织中TLR4 mRNA及蛋白表达水平均明显高于sham组(P<0.01);免疫组化发现TLR4的表达,H组主要是在心肌细胞膜,尤其2个或2个以上的心肌细胞相邻处有团簇样表达,但也有半数样本的胞浆内有少量表达;正常对照组主要弥漫表达于胞浆内,胞膜的表达极少。相关性分析TLR4蛋白表达与反应左室重构的LVMI、RWT呈正相关(r=0.614,P<0.01;r=0.621,P<0.01);同时与反应压力负荷的尾动脉压、MESS及局部AngⅡ含量相关。结论:Goldblatt大鼠左室重构过程中TLR4 mRNA及蛋白水平均明显增加,增强表达的TLR4主要位于心肌细胞膜,尤其2个或2个以上的心肌细胞相邻处有团簇样表达。提示TLR4这一与免疫炎症密切相关的跨膜信号转导受体及其介导的信号通路可能参与高血压左室重构的发生发展。
- 姜华曲鹏王纪文李桂华和亚萍
- 关键词：高血压心室复建
