国家自然科学基金(81201407)
- 作品数：10 被引量：32H指数：4
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- 壳聚糖水凝胶复合脂肪间充质干细胞修复兔关节软骨缺损被引量：11
- 2016年
- 目的探讨利用脂肪间充质干细胞（ADSCs）复合壳聚糖水凝胶支架构建的组织工程软骨修复兔关节软骨缺损的效果。方法分别取新西兰大白兔皮下脂肪和肋软骨，消化后体外扩增培养分别得到P1代ADSCs和软骨细胞。将ADSCs消化后制成细胞悬液，并种植于灭菌后的壳聚糖水凝胶上，体外培养1周构建组织工程软骨，将构建的组织工程软骨植入到兔的关节软骨缺损处。实验分为复合组（缺损处植入ADSCs复合新型壳聚糖水凝胶支架）、细胞组（缺损处注射一定浓度的软骨细胞悬液）、材料组（缺损处植入单纯的壳聚糖水凝胶）和对照组（缺损处未做任何处理），各组分别于术后12周取样，通过大体观察、HE染色、番红-O及Ⅱ型胶原免疫组化染色等方法观察缺损关节软骨的修复情况，并用国际关节软骨修复协会（ICRS）制订的评分法进行组织学评分。结果复合组缺损软骨的修复效果明显优于其他3组，新生组织与正常组织结合紧密，且结构和细胞外基质的分泌情况类似于正常组织。对照组、细胞组、材料组和复合组ICRS评分分别为（7．06±0．19）分、（7．14±0．22）分、（7．46±0．26）分和（13．89±0．14）分，复合组与其他各组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论ADSCs复合壳聚糖凝胶支架构建的组织工程软骨对缺损关节软骨具有良好的修复作用，且修复是一种结构性的修复。
- 林涛陈竹袁德超刘康向小聪周玉川冯刚
- 关键词：壳聚糖间质干细胞软骨关节
- GDF-5基因重组腺病毒修复人退变髓核细胞的实验研究
- 2019年
- 目的探讨腺病毒介导的GDF-5基因对人退变髓核细胞外基质表达的影响,探求一种基因治疗新途径。方法利用腺病毒载体将GDF-5基因导入退变髓核细胞,设置为空白对照组(Control组)、阴性对照组(GFP组)、实验组(GDF-5组)3组,并分为3、7、14、21天四个观察时间点,分别检测3组髓核细胞sGAG、Hyp的含量,免疫染色、Safranine-O染色观察细胞外基质合成情况,Real-timePCR检测Aggrecan、CollagenⅡmRNA表达水平。结果GDF-5组髓核细胞sGAG/DNA、Hyp/DNA均在14、21天较Control组和GFP组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),而Control组与GFP组之间任意观察时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05);免疫染色、Safranine-O染色结果显示GDF-5组髓核细胞的蛋白多糖、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖在14、21天均呈强阳性染色,Control组和GFP组呈弱阳性染色。Real-timePCR结果显示GDF-5组Aggrecan、CollagenⅡmRNA的表达在14、21天较Control组和GFP组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论腺病毒介导的GDF-5能明显促进人退变髓核细胞Aggrecan、CollagenⅡmRNA的表达,并增加蛋白多糖、Ⅱ型胶原的合成,对细胞外基质具有明确的修复作用,是一种有效的基因治疗新方法。
- 罗栩伟李艳冯刚苟林白亦光杨飞刘康陈竹
- 关键词：GDF-5重组腺病毒髓核细胞基因治疗
- Ⅱ型胶原-透明质酸构建组织工程软骨复合三维纳米支架的体外实验研究被引量：9
- 2013年
- 目的探讨Ⅱ型胶原-透明质酸（hyaluronic acid，HA）构建软骨组织工程复合三维纳米支架的可行性。 方法将Ⅱ型胶原和HA以8∶1（W∶W）比例溶于三氟乙醇和水按1∶1（V∶V）比例混合的溶剂中制成溶液，通过静电纺丝技术制备三维多孔纳米支架材料，通过光镜和扫描电镜观察其表面形貌，测定其孔隙率、吸水率、表面接触角和降解率。取1周龄日本大耳兔肋软骨，采用酶消化法制备软骨细胞。取第2代软骨细胞种植于支架上，用细胞计数试剂盒8（cell counting kit 8，CCK-8）评价其细胞黏附性及增殖情况；细胞-支架复合物体外连续培养2周后，行组织学和免疫组织化学染色观察其生物学形态及细胞外基质（extracellular matrix，ECM）分泌情况。 结果以最佳电纺液浓度为10%、接收距离为10 cm、纺丝注射速度为5 mL/h电纺获得的支架材料，光镜及扫描电镜观察示其孔隙均匀，纳米纤维直径均匀（300～600 nm），孔隙率为89.5% ± 25.0%，表面接触角为（35.6 ± 3.4）°，24 h内支架吸水率可达1 120% ± 34%，48 d内支架降解率可达42.24% ± 1.51%。CCK-8检测结果显示，培养12 h细胞在支架上黏附率可达169.14% ± 11.26%，培养7 d时细胞存活率可达126.03% ± 4.54%。组织学和免疫组织化学染色示，细胞在支架上黏附增殖情况良好，可分泌ECM；细胞在支架上培养2周后，有类似于软骨陷窝的结构形成。 结论以Ⅱ型胶原-HA制备的复合三维纳米支架材料具有良好的物理性能、生物学性能和促进细胞黏附及增殖的能力，是一种良好的组织工程软骨支架材 料。
- 杨泽龙陈竹陈竹白亦光刘康冯大雄白亦光
- 关键词：组织工程软骨静电纺丝透明质酸
- BMG／PBST双相组织工程纤维环的体外构建被引量：2
- 2016年
- 目的探讨骨基质明胶（bone matrix gelatin，BMG）／聚对苯二甲酸-共-丁二酸丁二醇酯[poly（butylenesucci—nate-co-terephthalate），PBST]双相组织工程纤维环的构建。方法PBST通过静电纺丝的方式制备成薄膜，检测其吸水率、孔隙率。取兔纤维环细胞进行体外培养，并通过番红“O”、Ⅱ型胶原免疫组化染色进行细胞鉴定；鉴定后的细胞种植到PBST薄膜支架上，通过扫描电镜观察细胞在支架上的生长情况。以BMG作为外纤维环支架，以PBST纺丝作为内纤维环支架，构建新型双相组织工程纤维环支架。将细胞种植到双相支架上，体外培养3、7、21d后，分析双相组织工程纤维环的生物学特性及力学性能。结果PBST纺丝薄膜的孔隙率为61．83％±7．33％，吸水率为297．34％±57．13％。纤维环细胞经番红“O”、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定呈阳性，表现出纤维环细胞的特征。经鉴定后的细胞种植在薄膜支架上培养3、7d后，扫描电镜显示细胞在薄膜支架上黏附并增殖；将纤维环细胞接种到BMG／PBST双相支架上，培养3、7、21d后，HE染色显示细胞随培养时间的增加逐渐渗透到薄膜支架内部；番红“O”、Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阳性，表明细胞在支架上分泌出大量糖胺聚糖和Ⅱ型胶原等纤维环细胞特有的细胞外基质。种植细胞后的双相支架体外培养21d后，支架的弹性模量[（17．56±1．47）MPa]明显较无细胞的双相支架的弹性模量[（14．83±1．02）MPa]增加。结论初步构建的BMG／PBST双相组织工程纤维环具有良好的细胞相容性和力学性能，为进一步构建完整组织工程椎间盘奠定了基础。
- 袁德超陈竹向小聪刘康冯刚
- 关键词：明胶
- GDF5过表达与ZIP8基因沉默双重功能慢病毒载体的构建及鉴定
- 2017年
- 目的构建过表达生长分化因子5(GDF5)与基因沉默锌离子转运蛋白(ZIP8)的双重功能慢病毒载体,检测其在诱导多能干细胞中的表达效率并建立稳定细胞系,为骨关节炎的细胞治疗提供种子细胞奠定相关研究基础。方法以人的GDF5cDNA为模板合成GDF5全长序列,设计合成靶向小鼠ZIP8的shRNA序列,依次分别与双酶切的载体pRNAU6.2相连,构建双重功能慢病毒载体。将重组质粒及阴性对照质粒分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染iPSCs细胞,实时定量PCR和免疫印迹分别检测GDF5蛋白和ZIP8mRNA的过表达与沉默效果。经G418筛选获得稳定高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的诱导多能干细胞(iPSCs)稳定细胞株。结果成功构建了双重功能慢病毒载体pRNAU6.2-CMV-hGDF5-mshZIP8-U6,经感染和G418筛选获得稳定表达高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的iPSCs稳定细胞株。结论成功构建的pRNAU6.2-hGDF5-mshZIP8-U6慢病毒载体,可有效上调GDF5与下调ZIP8的蛋白和mRNA的表达,成功建立稳定高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的iPSCs细胞株,为骨关节炎的细胞治疗建立可靠的细胞平台。
- 向小聪邓丽冯刚肖东琴刘康陈竹杨飞
- 关键词：骨关节炎慢病毒IPSCS
- 软组织平衡术联合Scarf和Akin截骨治疗中重度踇外翻畸形被引量：3
- 2020年
- 目的评估软组织平衡术联合Scarf和Akin截骨治疗中重度踇外翻畸形的疗效。方法回顾分析2017年9月~2019年9月我院足踝外科采用软组织平衡术联合Scarf截骨和Akin截骨手术治疗的28例(35足)中重度踇外翻患者临床资料。观察患者术后并发症发生情况并记录截骨愈合时间;术后第3、6月随访时摄X线片测量踇外翻角(HVA)、第1、2跖骨间夹角(IMA),记录术前美国矫形足踝协会(AOFAS)和疼痛视觉模拟评分(VAS),并与术前比较;采用Roles-Maudsley评分对患者进行满意度调查。结果共27例(34足)患者获得随访,随访时间6~24个月,平均12.4个月。所有手术伤口均一期愈合,无伤口感染或伤口裂开发生;所有患者的两处截骨均一期愈合,愈合时间(2.7±0.4)月,无截骨延迟愈合或不愈合发生。与术前相比,术后6月HVA、IMA、AOFAS、VAS均降低(均P<0.05)。患者满意率92.6%。结论软组织平衡术联合Scarf和Akin截骨治疗中重度踇外翻疗效良好。
- 吴辉罗栩伟冯刚杨飞李亮
- 关键词：踇外翻
- 新型壳聚糖水凝胶结合软骨细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究(英文)被引量：4
- 2015年
- 目的：评估壳聚糖水凝胶结合肋软骨细胞构建的新型组织工程软骨对兔关节软骨缺损的修复效果。创新点：利用自主研发的具有良好生物相容性和稳定性的壳聚糖水凝胶与软骨细胞，在体外初步构建组织工程软骨，并尝试利用其修复缺损的关节软骨，从而为关节软骨缺损的修复提供了一种新的治疗方法。方法：取兔肋软骨体外培养扩增，获得P2代软骨细胞，将其种植到冻干的壳聚糖水凝胶上，体外培养一周，获得初步构建的组织工程软骨。构建兔膝关节软骨缺损模型，并分为3组：实验组植入组织工程软骨；对照组植入壳聚糖水凝胶；空白组不做任何处理。分别于术后4、8和12周取材，通过大体观察、苏木精．伊红染色、番红-O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色等方法观察缺损关节软骨的修复情况，并用国际关节软骨修复协会（ICRS）制定的评分法进行大体及组织学评分。结论：兔肋软骨细胞能在实验室自主构建的壳聚糖水凝胶上增殖并分泌细胞外基质（图2），植入到兔关节软骨缺损处后，对缺损关节软骨具有良好的修复作用（图3和5），且修复是一种完全的结构性的修复（图5～7）。
- Ming ZHAOZhu CHENKang LIUYu-qing WANXu-dong LIXu-wei LUOYi-guang BAIZe-long YANGGang FENG
- 关键词：关节软骨修复组织工程软骨
- 用于构建完整组织工程椎间盘支架材料的研究进展
- 2016年
- 椎间盘退行性变是临床上常见的一类高发病率疾病,是引起下腰痛的主要原因。目前临床上主要治疗手段为保守治疗和外科手术治疗,但都只能缓解疼痛,难以从根本上解决椎间盘退行病变所造成的结构和功能缺失。随着组织工程技术的发展,为模拟天然椎间盘结构和功能而构建的完整组织工程椎间盘为广大患者带来新的希望。支架材料作为组织工程椎间盘构建的关键环节,是目前研究的热点和难点。本文就构建纤维环、髓核、软骨终板和完整组织工程椎间盘4个方面支架材料的研究现状做一简要综述,并提出构建完整组织工程椎间盘支架材料中存在的问题。
- 杨飞肖东琴陈竹冯刚
- 关键词：椎间盘
- 生长分化因子-5(GDF-5)促进人退行性变髓核细胞外基质表达情况的研究（英文）被引量：4
- 2016年
- 目的：研究腺病毒介导的GDF-5对人退行性变椎间盘髓核细胞生长和细胞外基质表达的影响，探索椎间盘退行性变基因治疗的新途径。创新点：首次验证了GDF．5对人退行变的髓核细胞的生长和细胞外基质的分泌均具有明显的促进作用，为椎间盘退行性变疾病早期基因治疗提供了新的途径。方法：利用腺病毒介导的GDF．5转染人退变的髓核细胞，设空白对照组、阴性对照组（绿色荧光蛋白（GFP）组）和实验组（GDF-5组）三个组，3、7、14和21天四个时问点。在预定的时间点，通过蛋白质免疫印迹（Westernblotting）、番红-O染色、免疫组化染色、酶联免疫法定量检测（ELISA）、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和细胞外基质的定量分析等手段，验证GDF-5对退变髓核细胞外基质表达的影响，同时对GDF．5对髓核细胞生长情况的促进作用进行了表征。结论：Ad—GDF-5能成功转染人退变的髓核细胞（图1），能有效地促进人退变髓核细胞细胞外基质Aggreean和Ⅱ型胶原（CollagenⅡ）分泌（图4-7），RT-PCR的结果表明Aggrecan和CollagenII基因表达也得到了明显的增强（图8）。同时GDF-5对人退变的髓核细胞的生长也有一定的促进作用（图9）。因此，Ad-GDF-5是椎间盘退行性变早期基因治疗的新途径。
- Xu-wei LUOKang LIUZhu CHENMing ZHAOXiao-wei HANYi-guang BAIGang FENG
- 关键词：椎间盘退行性变生长分化因子-5髓核腺病毒
- 携载生长分化因子5质粒的壳聚糖-透明质酸-硫酸软骨素微球在骨关节炎基因治疗中的应用（英文）
- 2018年
- 目的:骨关节炎是临床上的一种常见病和多发病。本研究尝试利用壳聚糖、透明质酸和硫酸软骨素为载体,制备一种携载生长分化因子5(GDF-5)质粒的纳米微球用于骨关节炎的基因治疗。创新点:首次利用壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素三种原料制备可携载GDF-5质粒的三元纳米微球,并将其应用到骨关节炎的治疗中。方法:在55°C下,按不同比例混合壳聚糖、透明质酸钠、硫酸软骨素和GDF-5质粒,利用静电吸附原理制备携载GDF-5质粒的三元纳米微球。分别利用扫描电镜和激光粒度散射仪测试微球的形貌和粒径;利用凝胶电泳检测质粒与微球的结合情况;利用CCK-8检测微球的细胞毒性。将携载GDF-5质粒的微球与软骨细胞共培养,并将脂质体和空载组作为对照组,在预定的时间点通过免疫荧光染色、免疫组化染色以及生化成分分析,观察微球对软骨细胞外基质分泌情况的影响。最后将该纳米微球注射到骨关节炎模型兔体内,通过大体观察、苏木精-伊红(H&E)染色、免疫荧光染色和免疫组化分析该微球对骨关节炎的作用。结论:本研究成功地利用壳聚糖、透明质酸和硫酸软骨素为原料,制备出携载GDF-5质粒的纳米微球。其中GDF-5质粒可以有效地促进软骨细胞外基质的分泌,透明质酸和硫酸软骨素是临床上常见的治疗骨关节炎的药物。微球具有良好的理化性能,其细胞毒性小,转染效率高,在体内外均能有效地促进软骨细胞外基质的分泌,能够在一定程度上延缓骨关节炎的进展。该纳米微球将是一种极具希望的可应用于骨关节炎基因治疗的载体。
- Zhu CHENShang DENGDe-chao YUANKang LIUXiao-cong XIANGLiang CHENGDong-qin XIAOLi DENGGang FENG
- 关键词：骨关节炎基因治疗
