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武汉市科技攻关计划项目(20066002056)

作品数：11 被引量：72H指数：5
相关作者：郭爱珍陈焕春陈颖钰晁彦杰吴波更多>>
相关机构：华中农业大学武汉市结核病医院宜昌市夷陵区奶牛养殖技术服务中心更多>>
发文基金：武汉市科技攻关计划项目国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 11篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 8篇农业科学
  • 4篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 7篇结核
  • 5篇ESAT-6
  • 5篇MPB70
  • 4篇牛结核
  • 4篇牛结核病
  • 4篇杆菌
  • 4篇CFP-10
  • 4篇ELISA
  • 3篇牛分枝杆菌
  • 3篇牛结核病诊断
  • 3篇抗体
  • 3篇CFP10
  • 3篇IFN-Γ
  • 2篇蛋白
  • 2篇特性分析
  • 2篇体外
  • 2篇体外释放
  • 2篇结核病
  • 2篇结核病诊断
  • 2篇结核菌

机构

  • 12篇华中农业大学
  • 4篇武汉市结核病...
  • 2篇宜昌市夷陵区...
  • 1篇武汉市蔬菜科...
  • 1篇中国检验检疫...
  • 1篇湖北省动物疫...
  • 1篇武汉市奶业管...

作者

  • 11篇郭爱珍
  • 10篇陈焕春
  • 9篇陈颖钰
  • 7篇晁彦杰
  • 6篇吴波
  • 6篇邓铨涛
  • 5篇张书环
  • 4篇詹枝华
  • 4篇谭亚娣
  • 3篇周金海
  • 3篇曹莎
  • 3篇项杰
  • 2篇钦博
  • 2篇魏武
  • 2篇童庆伟
  • 2篇匡有吉
  • 2篇颜邦芬
  • 2篇刘朝
  • 2篇张桂荣
  • 2篇赵波

传媒

  • 3篇中国人兽共患...
  • 2篇生物工程学报
  • 2篇中国奶牛
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇动物医学进展
  • 1篇中国预防兽医...

年份

  • 1篇2009
  • 4篇2008
  • 7篇2007
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立被引量：22
2007年
实验旨在建立牛重组IFN-γ（BovIFN-γ）的ELISA检测技术，为牛传染病的免疫学诊断提供新方法。PHA刺激体外培养的奶牛外周血白细胞，从培养细胞中提取总RNA，经过RT-PCR扩增出BovIFN-γ基因cDNA，进一步克隆至pET28a，转化大肠杆菌，经IPTG诱导，表达出预期大小（18kD左右）组氨酸标记蛋白，经鉴定为BovIFN-γ；以纯化的重组BovIFN-γ为免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术，获得4株能稳定分泌抗BovIFN-γ单克隆抗体的细胞株，分别命名为A7、A10、G6与G10。免疫球蛋白亚类鉴定证明杂交瘤细胞所分泌的抗体均为IgG1，腹水效价在1：2^10×100～1：2^11×100之间。Western-blot分析显示，4株单抗均能特异性结合重组BovIFN-γ。ELISA试验表明，4株单抗只与融合蛋白BovIFN-γ反应，而不与非相关性蛋白Ag85B、ESAT-6-CFP-10、GM-CSF等发生反应。选取A10细胞株分泌的单克隆抗体、纯化的多克隆抗体及辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗免IgG，建立了检测BovIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法。实验结果表明，此方法检测敏感性达到2ng／mL，特异性良好，为进一步建立灵敏、特异的病原感染诊断方法奠定了基础。
李川谭亚娣陈颖钰胡巧云马艳张桂荣钦博晁彦杰陈焕春郭爱珍
关键词：单克隆抗体ELISA克隆
四种牛分枝杆菌特异性蛋白融合表达及在牛结核病诊断中的临床应用被引量：8
2007年
以原核表达的MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6融合蛋白作为诊断抗原,建立牛结核病抗体检测间接ELISA(iELISA)。该iELISA与导致常见牛病的非相关抗原无交叉反应。用iELISA检测90份健康牛血清,确定样本阴阳性临界值(S/P)为0.17。与商品化胶体金试剂条(ICG)平行检测150份临床奶牛血清样本,结果与ICG的符合率为93.33%(140/150)。以结核菌素皮内试验(TST)为参考方法,检测了华中地区四个奶牛场的560头中国荷斯坦奶牛和90份进口奶牛结核阴性血清,结果iELISA与TST的总符合率为87.32%(489/560)。对其中22头奶牛进行鼻拭子分菌检验,4头分菌阳性奶牛的血清抗体检测也为阳性,iELISA与细菌培养的总符合率为77.27%(17/22)。以TST为参考方法,iELISA的敏感性和特异性分别为72.37%和89.67%。
吴波张书环邓铨涛项杰陈军刘朝陈鑫宋念华陶淑珍黄继根韩永佩赵波林祥梅陈焕春郭爱珍
关键词：IELISA牛结核病MPB70CFP10ESAT-6
重组CFP-10／ESAT-6抗原ELISA法对活动性肺结核诊断的评估被引量：4
2008年
目的以rCFP-10／ESAT-6融合蛋白抗原、植物血凝素（PHA）、生理盐水分别处理活动性肺结核患者外周血致敏T淋巴细胞，测定同一标本IFN-γ释放水平，探讨其对结核感染与发病的诊断意义。方法病例组111例为临床确诊肺结核患者，对照组292例为经胸部透视和结核菌素试验（PPD）筛选的大学生。入选对象取血3．0ml，均分为3份，每管1．0ml，分别加入rCFP-10／ESAT-6融合蛋白、PHA和生理盐水，孵育后ELISA法测定IFN-γ的吸光度（A）值及其抗体。结果rCFP-10／ESAT-6融合蛋白处理：IFN-γ测定值病例组x=1．3885±0．6236，对照组x=0．2944±0．0917，组间t′=16．4259，P〈0．05；以0．42为切割值，病例组阳性率93．58％，对照组阳性率13．07％。PHA处理：病例组x=1．2463±0．5541，对照组x=0．5613±0．0640，t′=19．1797，P〈0．05。生理盐水处理：病例组x=0．0772±0．0444，对照组x=0．0290±0．0235，t′=13．9487，P〈0．05。病例组抗体阳性率66．36％，对照组7．19％。结论利用rCFP-10／ESAT-6融合蛋白为特异性抗原，ELISA法测定外周血致敏淋巴细胞IFN-γ释放水平对结核感染诊断的敏感性〉90％，且无论特异性或非特异性处理，活动性肺结核患者IFN-γ释放水平均明显升高，血清抗体阳性率也高于对照组。
詹枝华陈颖钰袁冶项杰周金海郭爱珍
关键词：酶联免疫吸附法Γ-干扰素
人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用被引量：4
2008年
本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFN-γ基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到31.25pg/mL。采集111位结核病阳性病人与292位临床健康对照者肝素抗凝全血,利用结核菌特异性抗原ESAT-6/CFP-10融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA及商品化试剂盒平行检测所有样本,结果表明两种方法的检测结果相符。结核患者的检测灵敏度为95.5%,健康对照的阳性检出率为16.7%,患者与健康对照的阳性检出率差异极显著(P<0.01),证实所建立的方法灵敏度与特异性均很高,具有良好的应用前景。
陈颖钰邓铨涛詹枝华郭爱珍项杰陈军周金海曾庆志杜义祥魏武童庆伟晁彦杰匡有吉陈焕春
关键词：结核病IFN-ΓELISA
人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用
本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFNγ7基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IF...
陈颖钰邓铨涛詹枝华郭爱珍项杰陈军周金海曾庆志杜义祥魏武童庆伟晁彦杰匡有吉陈焕春
关键词：结核病IFN-ΓELISA
文献传递
基于结核菌素与CFP10/ESAT6的牛IFN-γ检测法在牛结核病诊断中的比较研究被引量：8
2008年
本研究通过比较三种刺激物(牛结核菌素、禽结核菌素和牛型结核菌特异性抗原CFP10/ESAT6对结核菌素皮内变态反应阳性牛的IFN-γ刺激反应,探讨IFN-γ检测法在我国牛结核病诊断中的应用前景。无菌采集22头结核菌素皮内变态反应阳性牛的血液,肝素抗凝。每1mL全血与1mLRPMI1640完全培养基混合均匀,并加入0.1mL(20μg)PHA(阳性对照孔)、0.1mL(20μg PHA)CFP10/ESAT6融合蛋白、0.1mL(2000U)牛结核菌素(PPD/B)、0.1mL(2500U)禽结核菌素(PPD/A)或等量PBS(无刺激阴性对照),37℃培养过夜。次日用夹心ELISA法检测各刺激组0.1mL培养上清的IFN-γ,以OD630表示IFN-γ浓度。结果,特异性抗原CFP10/ESAT6刺激组与牛结核菌素(PPD/B)刺激组的IFN-γ反应具有良好的相关性,相关系数为0.84。但CFP10/ESAT6刺激组IFN-γ浓度与牛和禽PPD的比较反应(以两刺激组IFN-γ浓度差值表示)间无相关性,相关系数为-0.11。分析禽PPD组的IFN-γ反应,发现实验牛中有少数牛对禽PPD有反应。以OD630=0.17为阳性反应切割值,牛PPD检出阳性牛21头,CFP10/ESAT6检出20头,牛和禽PPD比较反应(以OD值差值表示)检出14头,禽PPD阳性反应3头。扣除禽PPD阳性反应牛后,牛和禽PPD比较反应与牛PPD刺激组的相关系数增至0.54。结果表明,牛PPD的IFN-γ释放反应检测灵敏度最高。当出现牛型结核菌与环境分枝杆菌混合感染时,应用牛和禽PPD比较反应检测牛结核的准确度低,混合感染牛被误判为结核阴性牛。而基于CFP10/ESAT6的IFN-γ释放反应不受环境分枝杆菌的影响,检测具有良好的特异性与敏感性。
陈颖钰邓铨涛郭爱珍晁彦杰匡有吉匡有吉陈焕春
关键词：牛结核牛结核菌素CFP10ESAT6
牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用被引量：28
2007年
为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性。比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条。在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较。本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%。快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景。
张书环杨俊兴晁彦杰颜邦芬吴波曹莎陈颖钰谭亚娣陈焕春郭爱珍
关键词：免疫层析牛分支杆菌牛结核抗体检测
CFP-10/ESAT-6特异性IFN-g释放反应诊断活动性肺结核的研究被引量：1
2008年
前期研究已经建立了基于结核分枝杆菌特异性抗原CFP-10/ESAT-6融合蛋白刺激外周血单核细胞IFN-γ释放反应,本研究旨在证实该方法在活动性肺结核及结核菌潜伏感染诊断中的意义。实验对象包括111例当地医院收治的活动性肺结核病人(病例组)及283例某大学入学新生(健康对照者)。采集肝素抗凝血,分别加入含结核菌抗原CFP-10/ESAT-6、植物血凝素及无刺激物(PBS)的细胞培养孔中,培养过夜,次日收集血清,进行IFN-γ检测。同时,对其中58位病人志愿者及46位健康对照志愿者进行了结核菌素(PPD)皮内变态反应。病例组与健康对照组的PPD皮内变态反应阳性率分别为79.3%(46/58)和76.1%(35/46),无显著差异(P>0.05),表明PPD皮内变态反应不能用于活动性肺结核的检测。病例组IFN-γ体外释放反应的阳性率为95.5%(106/111),而健康对照组阳性率为16.3%(46/283),两组间均存在极显著差异,表明IFN-γ体外释放反应诊断活动性肺结核具有很高的灵敏度(95.5%)与良好的特异性。在健康组中,IFN-γ体外释放反应与PPD皮内变态反应的总符合率为50.0%,且IFN-g体外释放反应阳性者中,83.3%为PPD皮内变态反应阳性;在病例组中,二者的总符合率为72. 4%,IFN-g体外释放反应阳性者中,77.8%为PPD皮内变态反应阳性。CFP-10/ESAT-6特异性IFN-γ体外释放反应诊断活动性肺结核具有很高的灵敏度与特异性,PPD皮内变态反应由于受卡介苗免疫等因素影响在我国不能用于诊断活动性肺结核病与结核菌感染。
陈颖钰詹枝华郭爱珍项杰邓铨涛曾庆志杜义祥周金海魏武童庆伟陈焕春
关键词：结核CFP-10ESAT-6PPD
牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析被引量：5
2007年
目的牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析。方法应用PCR方法从牛分枝杆菌临床分离株基因组中扩增获得mpb70、mpb83、cfp-10和esat-6四个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因cfp10-esat6和mpb83-cfp10-esat6,将mpb70和mpb83-cfp10-esat6串连于载体pUC19-Linker上,再将mpb70-mpb83-cfp10-esat6连于表达载体pET28a(+)中得到重组质粒pET70-83-C10-E6。转化BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导获得以可溶形式表达的融合蛋白。用Ni2+亲合层析法纯化该融合蛋白。结果经ELISA验证该融合蛋白能分别与抗原蛋白MPB70、MPB83和CE(cfp10-esat6)的多抗反应,说明该融合蛋白具有四个抗原蛋白的免疫学活性。Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛其它疾病的阳性血清不反应。热稳定性试验证明该融合蛋白属于热稳定性蛋白。结论融合表达了牛分枝杆菌的四种特异性抗原蛋白,该蛋白具有单个蛋白的免疫原性和稳定性,作为一种新型的诊断抗原具有良好的应用前景。
张书环吴波颜邦芬曹莎陈颖钰晁彦杰凌洁玉谭亚娣陈焕春郭爱珍
关键词：牛分枝杆菌结核
间接ELISA检测牛分枝杆菌抗体方法的建立及初步应用被引量：9
2007年
针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种以上抗原的特异性抗体为阳性时,即可判断为结核检测阳性。以TST为标准,判断ELISA方法的敏感性与特异性。结果证明,ELISA方法具有较好的敏感性(71.4%)。对ELISA检测为强阳性的奶牛进行细菌分离,并对5头结核菌分离阳性奶牛进行TST检测,结果有3头为TST阳性,2头可疑,显示出ELISA方法对严重感染牛的检测较TST具有更高的敏感性。由于TST与ELISA分别以细胞免疫与体液免疫为基础,两种检测方法结合应用可进一步提高牛结核病的检出率。
张桂荣万学济陈颖钰吴波晁彦杰吕文钦博郭爱珍陈焕春谭亚娣
关键词：牛分枝杆菌ELISAMPB70检疫
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