湖南省卫生厅重点课题(Z02-01)
- 作品数：3 被引量：19H指数：2
- 相关作者：贺智敏刘孝荣陈主初余艳辉郑春艳更多>>
- 相关机构：中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅重点课题国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源性抗HER2胞外段Fab噬菌体抗体库的构建及筛选被引量：3
- 2011年
- 目的:构建全人源抗HER2胞外段(HER2 ECD)噬菌体Fab抗体库,从中筛选出特异性的抗体,并对其进行鉴定。方法:体外致敏并用EB病毒(EBV)转化HER2高表达乳腺癌患者的外周血单核细胞(PBMC),用PCR分别扩增重链Fd和轻链κ/λ基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3中,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建抗HER2 ECD人源化Fab噬菌体抗体库。以纯化HER2 ECD蛋白为抗原进行3轮固相淘选,富集抗HER2 ECD的抗体,并随机挑选克隆进行ELISA,获得的阳性克隆进一步以Western blot鉴定其抗原结合活性,对其中活性最高的克隆进行DNA测序。结果:构建了容量为2.5×107的抗HER2 ECD的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了4株与HE2 ECD特异性结合的阳性克隆,Western blot分析显示其与HER2 ECD能较好的结合。选取结合活性最高的阳性克隆进行DNA序列分析,结果显示其重链可变区、轻链可变区分别与人胚系免疫球蛋白基因有高度的同源性。结论:成功构建了全人源抗HER2 ECD噬菌体抗体库,并筛选出抗HER2 ECD特异性较强的噬菌体克隆,为获得新的有临床应用价值的HER2 ECD抗体提供了实验基础。
- 张为家刘孝荣李官成贺智敏
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库FAB抗体
- 乳腺癌组织中HER2与TOPOⅡα基因表达的检测及相关性分析被引量：2
- 2004年
- 目的 检测人表皮生长因子受体Ⅱ (HER2 /neu)与拓扑异构酶 (TOPOⅡα)在乳腺癌组织中的表达 ,探讨二者的相关关系及在乳腺癌临床化疗中的潜在价值。方法 采用RT -PCR和免疫组织化学方法分别检测 2 4例乳腺癌组织和相应的癌旁组织的HER2、TOPOⅡα的转录和蛋白质水平的表达。结果 RT -PCR结果显示 ,乳腺癌组织中HER2和TOPOⅡα阳性率分别是 2 9% ( 7/2 4)和 92 % ( 2 2 / 2 4) ,明显高于癌旁组织 [4 % ( 1/ 2 4)和 2 1% ( 5 / 2 4) ,P <0 0 0 1] ;免疫组化检测癌组织发现HER2和TOPOⅡα的表达率分别为 3 0 % ( 6/ 2 0 )和 94% ( 16/ 17) ,与RT -PCR结果一致 ,且 6例HER2表达阳性的组织中TOPOⅡα表达均为阳性 ,二者的表达相关 ,R =0 5 2 4,P <0 0 0 1。结论 HER2和TOPOⅡα在乳腺癌组织比癌旁组织有明显增加的表达率 ,且两基因的表达相关 ,提示两基因表达的上调在乳腺癌的发生及恶性表型维持中可能起一定作用。
- 郑春艳贺智敏唐利立袁建辉杨芳刘孝荣余艳辉陈主初
- 关键词：乳腺癌基因表达
- HER2介导乳腺癌细胞多药耐药的作用及机制被引量：14
- 2005年
- 目的筛选HER2高表达乳腺癌细胞化疗耐受的药物种类,探讨HER2介导的乳腺癌多药耐药的机制。方法构建HER2稳定高表达的乳腺癌细胞MCF-7/HER2模型;MTT法检测该细胞对多种临床常用的抗乳腺癌药物的敏感性;Hochest33258染色观察药物诱导的MCF-7/HER2的凋亡率,并采用聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中bcl-2和survivin基因的mRNA表达。结果MCF-7/HER2细胞对Taxol,MMC,5-FU,VP-16及TSPA的耐药指数分别为对照细胞的74,22,2.5,3.5和2.8倍,出现了明显的药物抗性(P<0.05);而对CDDP,ADM,VBL,VCR,NBV和MTX等的耐药指数与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);由Taxol,MMC,5-FU,VP-16诱导的MCF-7/HER2细胞凋亡率明显低于对照细胞;MCF-7/HER2细胞survivin基因表达明显高于对照组,而bcl-2基因表达与对照组比较,差异无统计学意义。结论HER2可介导乳腺癌细胞对Taxol,MMC,5-FU,VP-16和TSPA等的多药抗性,这种多药抗性的产生可能与HER2上调survivin表达所致的凋亡抗性有关。
- 丁渭郑春艳贺智敏吕辉刘孝荣余艳辉陈主初
- 关键词：乳腺癌表皮生长因子受体2存活素药物耐受性
