安徽省高校省级自然科学研究项目(2006KJ320B)
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
- 相关作者：王明丽陈敬贤刘倩黄维夏俊保更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽医科大学第一附属医院哥伦比亚大学更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人巨细胞病毒pp65特异性抗体测定在原发感染诊断中的应用被引量：5
- 2007年
- 目的通过测定患者单份血清人巨细胞病毒(HCMV)pp65特异性IgM抗体和IgG亲和指数(AI),建立HCMV原发感染的临床判断标准。方法从临床收集40份患儿血清和尿标本,以本室自制的pp65为抗原,运用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本中HCMVpp65特异性IgM抗体;同时通过尿素变性实验,以6M尿素作为温和蛋白变性剂,测定HCMVpp65IgGAI。尿标本常规处理后接种人胚成纤维(HF)细胞进行病毒分离,观察HCMV特异性细胞病变效应(CPE),聚合酶链反应(PCR)试验检测细胞培养物UL83基因,间接免疫荧光试验检测细胞玻片HCMV抗原。并将病毒分离结果同血清学方法进行比较。结果40例标本中,IgM阳性13例,IgG阳性30例,其中,仅IgM阳性4例,病毒分离结果亦为阳性,可诊断为原发感染;30例IgG阳性标本中,2种抗体均为阳性9例(A组),其中,5例AI<50%,病毒分离结果均为阳性,判断为原发感染;1例AI在50%与60%之间,为可疑原发感染,需要进一步鉴定;3例AI>60%,判断为继发感染。IgG阳性21例(B组),其中仅3例(14.29%)AI<50%,但病毒分离结果为阴性,提示患者不久前曾发生HCMV原发感染,特异性IgM抗体已经转阴,病毒进入潜伏状态;余18例患者AI均>60%,判断为继发感染;2种抗体均为阴性的标本有6例,病毒分离结果亦为阴性,说明患者未被感染。统计学分析,A组与B组之间差异有统计学意义(P<0.05)。血清学方法与病毒分离比较,一致率为75.49%,该方法灵敏度为100%,特异度为87.10%,准确度为90.00%。结论以HCMVpp65重组蛋白为抗原检测特异性抗体以及相应IgGAI的ELISA,可快速诊断HCMV原发感染和继发感染;该方法具有高度特异性与敏感性,操作简便,重复性好,具有良好的临床应用前景。
- 刘倩陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒抗体原发感染
- 老年小鼠先天性潜伏感染人巨细胞病毒致大脑皮质细胞凋亡的研究
- 2007年
- 目的 观察先天性人巨细胞病毒（HCMV）潜伏感染至老年，对小鼠大脑皮质细胞凋亡的影响。方法 选择鼠龄为24个月HCMV先天性感染中枢神经系统模型小鼠。分为3组，每组6只，分别为：HCMV先天性潜伏感染老年鼠组（潜伏感染组）、HCMV先天性潜伏再激活感染老年鼠组（潜伏再激活感染组）和健康对照老年鼠组（健康对照组）。采用透射电镜、TUNEL法和流式细胞仪检测分析各组小鼠大脑皮质细胞凋亡情况。结果 电镜检测发现，同健康对照组比较，潜伏感染组和潜伏再激活感染组部分神经元细胞核染色体固缩、核物质碎片化、凋亡小体形成等特征性凋亡改变。TUNEL法和流式细胞仪检测发现健康对照组凋亡细胞最少，潜伏感染组凋亡细胞比率较健康对照组升高，而潜伏再激活感染组凋亡细胞最多；t检验潜伏感染组、潜伏再激活感染组与健康对照组凋亡率比较，差异均有统计学意义（均为P〈0．01）。结论 先天性感染HCMV后长期潜伏在小鼠的大脑皮质，至老年后可诱导细胞凋亡。
- 赵俊王明丽陈敬贤
- 关键词：巨细胞病毒病毒潜伏期细胞凋亡
- 重组HCMV pp65组合抗原间接ELISA法检测IgM抗体的研究
- 2007年
- 目的探索人巨细胞病毒(human cytomega|ovirus,HCMV)组合抗原在检测血清 HCMVIgM 中的诊断价值。方法分别对两种不同编码区重组 pp65抗原(重组抗原1和2)及其按不同比例的混合物(组合抗原),采用间接 ELISA 法判定最适包被浓度、抗体的最适稀释度、各阶段最适反应条件等,并对经商品化试剂盒反复验证的40份 HCMV IgM 阳性血清及40份阴性血清标本进行检测。结果已知 HCMV IgM 阳性的40份血清标本中,重组抗原1、2及其组合抗原检出的阳性数分别为30、32和39份;其中20份与2种抗原均发生反应,另外分别有10和12份只与其中1种抗原发生反应。40份阴性血清标本与3种抗原均未发生反应。与试剂盒反复验证的结果相比较,3种抗原特异性均为100%,敏感性分别为75%、80%和97.5%,一致率分别为75%、80%和97.5%。结论组合抗原在保证特异性的同时,提高了检测的敏感性,同时与试剂盒反复验证的结果有高度一致性,说明组合抗原可以作为HCMV急性/原发感染的诊断试剂。
- 黄维王明丽
- 关键词：酶联免疫吸附测定巨细胞病毒感染
- 人巨细胞病毒地方分离株的鉴定及其UL83序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的鉴定从合肥市某医院先天性脑瘫患儿尿标本中分离的4株人巨细胞病毒（HCMV）毒株并对其UL83基因序列进行分析，为HCMV感染的预防及pp65蛋白疫苗的研制提供参考依据。方法应用细胞培养法复苏病毒，间接免疫荧光法检测pp65蛋白表达，并用特异性引物对UL73基因进行PCR，扩增的产物经凝胶纯化后测序；序列结果运用DNAMAN软件和GenBank登录的3株代表性HCMV毒株进行核苷酸和氨基酸序列比对。结果HCMV AD169株与HCMV-1分离株的UL83基因核苷酸及编码氨基酸序列的同源性均为100％，与其余3株的同源性也达99．26％～99．69％；4株HCMV分离株与Merlin株、Towne株在相应基因片段核苷酸及氨基酸的同源性最低的分别为98．95％，99．06％。结论UL83序列分析结果表明，HCMV UL83编码pp65蛋白的优势抗原决定簇氨基酸序列无变化。
- 史永林陈敬贤王明丽
- 人巨细胞病毒pp65 IgG-AI快速诊断试剂的临床应用被引量：2
- 2008年
- 目的评价人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)pp65 IgG-亲和力指数(Avidity index,AI)快速诊断试剂的临床应用价值。方法以自制的截短pp65重组蛋白作为诊断试剂,对本室血清库中保存的标本,采用ELISA间接法检测其特异性IgG抗体,分析该试剂的灵敏度、特异性和准确度。检测临床收集的89份患者血清标本(其中5例被明确诊断为HCMV活动性感染)的pp65 IgG抗体,并与意大利DIESSE公司IgG检测试剂盒结果进行比较。同时,对pp65 IgG阳性标本,运用尿素变性ELISA间接法检测其AI值,与意大利DIESSE公司IgM检测试剂盒结果进行比较,评价AI检测在HCMV感染诊断中的价值。结果用pp65快速诊断试剂检测阳性、阴性血清特异性IgG抗体,均与原确认结果相同,灵敏度、准确度和特异性均达100%。两种诊断试剂IgG抗体检测结果,差异无显著意义。pp65诊断试剂对pp65 IgG阳性标本的AI值进行检测,AI<60%标本共41份,阳性率为46.07%,较参比试剂IgM检测阳性率(23.59%)高;5份明确诊断HCMV活动性感染的患者血清标本中,pp65诊断试剂与参比试剂检测IgG抗体,各有4份阳性,一致率为100%,pp65诊断试剂检测AI值为阳性的标本有3份,其中,参比试剂检测IgM为阳性的仅有1份。临床明确诊断为HCMV肺炎的患者血清标本,诊断试剂检测AI值为可疑阳性,但参比试剂检测HCMV IgM抗体为阴性。结论pp65 IgG-AI快速诊断试剂可初步诊断HCMV感染,简单快速,重复性好,具有良好的临床应用前景。
- 刘倩黄维崔寰陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒诊断试剂
- 人巨细胞病毒与动脉粥样硬化的相关性研究进展被引量：3
- 2009年
- 夏俊保段巧建王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒动脉粥样硬化细胞黏附因子脂质代谢凋亡
- 3种方法检测HCMV先天性感染对老年小鼠大脑皮质细胞凋亡的比较被引量：5
- 2007年
- 目的分析TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和透射电镜3种细胞凋亡检测方法的优缺点。方法在已建立的HCMV先天性感染小鼠中枢神经系统模型基础上,选用鼠龄为24个月模型鼠进行试验。试验分为3组(每组6只)HCMV先天性潜伏感染老年小鼠组(A组)、HCMV先天性潜伏再激活感染老年小鼠组(B组)和正常对照老年小鼠组(C组)。采用TUNEL法和流式细胞仪检测各组小鼠大脑皮质细胞凋亡情况,采用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化。结果TUNEL法和流式细胞术检测发现C组凋亡细胞最少,A组凋亡细胞比率较C组有所升高,而B组凋亡细胞最多;检测结果经T检验分析发现A组、B组与C组各组间凋亡率差异均有显著性。透射电镜检测发现,同C组比较,A组和B组部分神经元细胞核染色体固缩,核物质碎片化,凋亡小体形成等特征性凋亡改变。结论HCMV先天性感染可致老年小鼠大脑皮质细胞凋亡。TUNEL法和流式细胞术可用于凋亡的定量检测,但TUNEL法易受主观因素的影响,而透射电镜是凋亡定性检测的可靠方法。
- 赵俊王明丽陈敬贤
- 关键词：巨细胞病毒感染流式细胞术
- 人巨细胞病毒感染与系统性红斑狼疮病情活动性的关联性研究被引量：8
- 2008年
- 目的探索人巨细胞病毒(HCMV)感染与系统性红斑狼疮(SLE)病情活动之间的关系。方法采用病毒分离、聚合酶链式反应(PCR)检测HCMVUL54基因和间接免疫荧光试验(IFA)检测HCMVpp65抗原的方法,对49份SLE患者血白细胞标本进行HCMV分离鉴定,并结合临床资料分析HCMV感染与SLE病情活动的相关性。结果49份SLE患者血白细胞标本中,HCMV病毒分离后出现典型细胞病变的有3份,经PCR和IFA联合检测鉴定阳性的有12份,阳性率为24.5%;Logistic回归分析显示,SLE活动期患者的HCMV感染率为38.5%,显著高于SLE非活动期患者8.7%的HCMV感染率(OR=8.7,95%CI:1.4～53.3,P=0.019)。结论HCMV感染与SLE病情活动呈现显著正相关。
- 崔寰陈伟夏俊保刘倩黄维李迎伟王明丽
- 人巨细胞病毒原发感染BALB/c小鼠大脑皮质模型的建立被引量：2
- 2007年
- 目的建立人巨细胞病毒（HCMV）原发感染BALB／c小鼠大脑皮质的模型，为进一步研究其发病机制奠定实验基础。方法分别用2×10^6、2×10^5、2×10^4、2×10^3、2×10^2PFU／ml的HCMV AD189株腹腔注射6～8周SPF级BALB／c小鼠雌雄各6只作为实验组，同时设立灭活病毒对照组和细胞对照组。1个月后取各组小鼠大脑皮质组织进行病毒分离与鉴定、PCR和RT-PCR分别检测各标本中HCMVUL83基因及UL54的转录、HE染色。结果2×10^6、2×10^5PFU／ml实验组的雌性小鼠病毒分离、PCR及RT-PCR均为阳性；HE染色可见海马区出现了明显的病理变化。雄性小鼠、低剂量（2×10^4、2×10^3、2×10^2PFU／ml）实验组、灭活病毒组和HF对照组均为阴性。结论HCMVAD169株腹腔注射6～8周龄SPF级雌性小鼠1个月可测出大脑皮质发生急性炎症反应，为HCMV所致的原发感染状态，且小鼠性别及病毒的接种量可能与感染发生存在密切关系。
- 黄维王明丽吴喜林刘倩陈敬贤
- 关键词：巨细胞病毒感染疾病模型
