国家自然科学基金(39680011)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院三峡大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳头瘤病毒16型晚期基因L1在原核细胞的表达及免疫效果观察被引量：3
- 2007年
- 目的：人乳头瘤病毒16型（HPV16）疫苗的研制可望防治宫颈癌的发生、发展，本实验从中国感染人群中克隆L1基因，期望制备中国人群的HPV16的预防性疫苗。方法：从HPV16阳性的尖锐湿疣临床标本中，PCR扩增HPV16L1基因，克隆、测序，并在原核细胞表达L1蛋白，纯化蛋白经过复性后，电镜观察病毒样颗粒（VLP），VLP免疫动物观察抗体产生情况。结果：克隆的HPV16L1，测序结果发现有4个特异性突变位点是nt6240的C-G、nt6432 A→G、nt6901-03及nt6951-53。将HPV16L1基因克隆到原核表达载体pET-28a（＋），高表达的蛋白应用蛋白转印证实是HPV16L1蛋白，纯化的蛋白复性后可以自组装VLP，免疫动物产生高滴度的抗体。结论：从临床标本克隆表达了HPVl6L1基因，可以在原核细胞高表达及体外组装VLP，并且具有良好的免疫原性。为研制HPV16预防性疫苗探索一条易于推广而经济的制备途径。
- 刘朝奇许雪梅徐建青李昆司静懿刘世德
- 关键词：HPVL6L1基因蛋白表达
- 人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究被引量：1
- 2008年
- 目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。
- 刘朝奇许雪梅徐建青李昆司静懿刘世德
- 关键词：人乳头瘤病毒16型L1E7免疫原性
- 人乳头瘤病毒16型早期基因E7的克隆及其在原核细胞中的表达
- 1998年
- 目的进一步研究与宫颈癌密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的生物学活性。方法采用PCR法从中国妇女宫颈癌标本中扩增HPV16早期基因E7,测序分析其DNA的序列。结果克隆的HPV16E7基因与标准型进行比较表明,前者无核苷酸突变。将此基因装入原核表达载体,能在E.Coli中高效表达出谷胱甘肽S-转移酶(GST)-E7蛋白。Western印迹分析表明,此融合蛋白能与E7抗体特异地结合。结论克隆的HPV16E7基因及其表达的蛋白可为今后分子流行病学调查及疫苗研制提供有用的资料。
- 刘朝奇司静懿刘世德许雪梅宋国兴李昆
- 关键词：E7基因克隆人乳头瘤病毒
