上海市科委科技攻关项目(034119822)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 相关作者：罗其中沈剑虹江基尧包映晖杨绍峰更多>>
- 相关机构：上海第二医科大学附属仁济医院上海消化疾病研究所上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：上海市科委科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 化学合成siRNA对原代皮层神经元NgR表达的抑制效应被引量：1
- 2006年
- 目的:了解化学合成siRNA对原代培养神经元NgR表达的抑制效果和对细胞的毒性作用。方法:实验于2005-03/07在上海市消化疾病研究所进行。①取怀孕16d的SD大鼠3只进行大鼠原代皮层神经元培养。②化学合成一段针对大鼠NgR基因编码区的siRNA,用阳离子脂质体转染大鼠皮层神经元。③分别于转染前、转染后24,48,72,96h行反转录-聚合酶链反应检测NgRmRNA水平;转染后48h行免疫细胞化学检测NgR表达的变化;碘化丙啶染色检测转染后各时间点神经细胞的存活情况。结果:①转染siRNA后24h和48hNgRmRNA水平明显下降,到72h明显回升,转染后96hNgRmRNA水平与转染前已无显著差异。②与转染无关序列oligo的细胞相比,转染siRNA的细胞其NgR表达明显下降。③碘化丙啶染色显示转染后24和48h,用脂质体转染的细胞(包括转染siRNA、无关序列Oligo和单纯脂质体组)其碘化丙啶阳性率与非转染对照组无明显差异,而转染后72和96h碘化丙啶阳性率显著高于未转染组[siRNA组为(12.57±0.69)%和(13.60±0.61)%;无关序列组为(12.64±0.47)%和(13.61±0.37)%;脂质体组为(12.59±0.29)%和(14.08±0.31)%;未转染组为(8.41±0.16)%和(8.40±0.71)%;P<0.05]但在各时间点,脂质体转染的各组间碘化丙啶阳性率不存在明显差异。结论:化学合成siRNA能有效抑制原代皮层神经元的NgR表达,并于短期内维持于低水平。该段siRNA转染的毒性作用主要来自于转染试剂,与序列本身无明确关系。
- 沈剑虹包映晖罗其中江基尧
- 关键词：神经元RNA大脑皮质细胞培养
- siRNA抑制神经元NgR mRNA的时效关系和毒性研究被引量：10
- 2006年
- 目的了解化学合成小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对原代培养神经元Nogo受体(Nogo receptor,NgR)mRNA作用的时效关系和毒性作用。方法化学合成一段针对大鼠NgR基因编码区的siRNA,用阳离子脂质体转染大鼠皮层神经元。分别于转染前、转染后24h、48h、72h、96h行RT-PCR检测NgR mRNA水平。碘化丙啶(PI)染色检测转染后各时间点神经细胞的存活情况。结果转染siRNA后24h和48h NgR mRNA水平明显下降,到72h明显回升,转染后96h NgR mRNA水平与转染前差异无统计学意义。PI染色显示转染后24h和48h,用脂质体转染的细胞(包括转染siRNA、无关序列Oligo和单纯脂质体组)其PI阳性率与非转染对照组无统计学意义,而转染后72h和96h两者差异有统计学意义,但在各时间点,脂质体转染的各组间PI阳性率差异无统计学意义。结论化学合成siRNA能有效促进原代皮层神经元的NgR mRNA降解,并于短期内维持于低水平。该段siRNA转染的毒性作用主要来自于转染试剂,与序列本身无明确关系。
- 沈剑虹罗其中包映晖江基尧童菊芳杨绍峰
- 关键词：RNA干扰NGR
- 化学合成siRNA抑制原代皮层神经元NgR的表达被引量：3
- 2007年
- 目的筛选能有效抑制神经元NgR表达的siRNA序列。方法根据siRNA靶序列设计原则,设计并化学合成针对大鼠NgR基因编码区的siRNA三对,并以一对无关序列的寡核苷酸作为阴性对照。原代培养的大鼠皮层神经元分为5组:siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组、无关序列组、非转染组,用阳离子脂质体TransMessenger Transfection Reagent转染。转染后48h行RT-PCR和免疫细胞化学检测NgR表达水平的变化。结果转染48h后,与序列2、3和无关序列转染以及未转染的细胞相比,序列1转染的神经元NgR mRNA水平明显下降,并且其NgR抗体免疫荧光染色的荧光强度也明显减弱。结论化学合成siRNA能有效地抑制原代皮层神经元NgR的表达。
- 沈剑虹罗其中包映晖江基尧童菊芳
- 关键词：神经元SIRNANGR神经细胞培养
- 中枢神经再生抑制信号传导机制研究进展被引量：3
- 2005年
- 近年来陆续发现了一些中枢神经轴突生长的抑制因子,如Nogo-A、MAG、OMgp等。目前已发现,它们可通过一个共同的NgR-P75-LINGO-1受体复合物,将抑制信号导入神经元胞内,进一步传递给Rho-A,引起一系列的反应,最终导致生长锥的溃变。除了Rho-A途径外,还存在其它信号途径,如Enabled途径和LIMK途径,以及一些间接的、调节性的信号途径,它们共同作用,传递髓鞘的抑制信号,抑制神经突的生长和轴突的再生。探明抑制信号的传导过程对于克服中枢神经的再生障碍有着重要意义。
- 沈剑虹罗其中
- 关键词：NOGOLINGO-1P75中枢神经再生信号传导轴突生长
- Nogo-66受体单链RNA干扰对大鼠脊髓半切损伤的治疗效应
- 2008年
- 目的观察Nogo-66受体（NgR）单链RNA干扰（siRNA）对大鼠脊髓半切损伤的治疗效应。方法建立大鼠脊髓半切损伤模型，脑室内注射筛选出的有效NgR siRNA，采用运动功能评分、辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪、HE染色等方法，评价NgR siRNA对损伤脊髓的治疗效应。结果神经功能评分示，从第4周起，siRNA治疗组的运功功能恢复好于等渗盐水组和空白对照组，但差异无统计学意义。HRP逆行神经示踪示，治疗组多数可于脊髓前角见较多的标记细胞，与等渗盐水组和空白对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。HE染色示脊髓损伤后8周，等渗盐水组和对照组的损伤区纤维排列紊乱，siRNA组部分大鼠损伤区见有较连续的纤维通过。结论NgR siRNA可促进脊髓损伤后的神经再生修复。
- 包映晖沈剑虹梁玉敏罗其中江基尧
- 关键词：脊髓损伤RNA干扰技术
