国家自然科学基金(39670239)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 相关作者：左伋夏蓓莉郑东航杨增杰杨增杰更多>>
- 相关机构：上海医科大学复旦大学上海医学院南京师范大学更多>>
- 发文基金：美国中华医学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 正义和反义表达grp75基因的哺乳动物细胞克隆的建立
- 1998年
- 为了进一步研究葡萄糖调节蛋白(grp75)基因及其产物的生理功能和它在疾病发生发展过程中的作用,以 peDNA3为载体构建了正义(向)和反义(向)的 grp75 cDNA 真核细胞表达载体系统,并对转染哺乳动物(PC12)细胞系后所筛选得到的阳性克隆进行免疫印迹分析;结果表明转染了正向grp75 cDNA 表达系统的细胞克隆在原有 GRP75表达的基础上表达量显著增加;而转染了反向 grp75cDNA 表达乐统的细胞克隆中 GRP75的表达水平明显下降,说明所构建的正向及反向 grp 75cDNA 表达系统在哺乳动物细胞系中得到了有效的表达,显示所构建的表达载体及阳性细胞系将可用于 grp75基因的生理和病理研究中。
- 左伋荣琦郑东航夏蓓莉陈秀珍
- 关键词：GRP75哺乳动物细胞系克隆
- grp75对细胞缺糖损伤的保护作用被引量：6
- 2000年
- 为研究ｇｒｐ７５的功能，对过表达ｇｒｐ７５的ＣＨＬ细胞进行无糖培养以施加能量代谢应激，运用台盼蓝染色计数、ＬＤＨ释放测定和流式细胞术等方法评估其损伤程度。结果显示，无糖培养５ｈ，过表达ｇｒｐ７５细胞和对照组细胞比较，细胞活率、亚二倍体细胞率均无明显差别；无糖培养 １０ｈ，过表达ｇｒｐ７５ 细胞的活率高于对照组（Ｐ＜ ０．０１），亚二倍体细胞率低于对照组（Ｐ＜０．０５）；无糖培养至２０ｈ，两组细胞活率和亚二倍体细胞比率无显著差别。ＬＤＨ释放测定结果显示，无糖培养４ｈ，过表达ｇｒｐ７５细胞和对照组细胞ＬＤＨ释放百分比无显著差别；无糖培养７～１５ｈ，过表达ｇｒｐ７５细胞ＬＤＨ释放百分比低于对照组（Ｐ＜０．０５）；无糖培养２０ｈ，两组细胞ＬＤＨ释放百分比无显著差别。这一研究结果表明，过表达ｇｒｐ７５的细胞对一定强度的缺糖损害有明显的耐受性（表现为较轻的细胞膜损伤，较轻的ＤＮＡ断裂和较高的存活率），即细胞内ｇｒｐ７５具有对抗缺糖损伤的作用。
- 郑东航左伋杨增杰夏蓓莉张咸宁
- 关键词：葡萄糖调节蛋白75过表达细胞保护
- 过表达葡萄糖调节蛋白75的细胞对能量代谢应激的抵抗性
- 2000年
- 郑东航左伋杨增杰夏蓓莉张克雄
- 关键词：葡萄糖调节蛋白75细胞抵抗性
- 葡萄糖调节蛋白75的表达特性被引量：6
- 2001年
- 目的 研究不同条件下葡萄糖调节蛋白 75基因的表达情况。方法 用多组织尼龙膜 (multipletissuenylon ,MTN)Northern杂交显示 grp75在组织中的表达情况 ,用Northern杂交方法研究其在缺糖、氧化磷酸化阻滞剂叠氮钠、Ca2 + 增强剂A2 3187处理后的表达情况。结果 grp75在多组织中都有表达 ,且表达量大致相同 ,在缺糖培养的情况下 ,细胞的 grp75基因明显呈上调表达。高浓度的叠氮钠能够使grp75基因表达大幅度上调 ,A2 3187使grp75的表达量增加。 结论 grp75基因在细胞中有构成性表达 ,能够在多种组织的细胞中发挥作用 ,grp75基因的表达量和细胞自身的能量代谢有关 ,为 grp75基因对细胞缺糖保护提供了证据 ;在grp75表达与调控过程中 ,Ca2 +
- 李华杨增杰夏蓓莉左伋
- 关键词：葡萄糖调节蛋白75NORTHERN杂交钙离子分子伴侣基因表达
- 分子伴侣grp75在缺糖损伤细胞恢复中的作用被引量：2
- 2003年
- 葡萄糖调节蛋白75(grp75)属于热休克蛋白70家族中的一员,细胞中葡萄糖水平下降时(类似于缺血),grp75表达增高。为研究grp75在缺糖及缺糖再灌注条件下对细胞的作用,本文以中国仓鼠肺细胞株CHL为材料,采用脂质体介导的方法,以grp75表达载体pcDNA3/grp75转染CHL细胞,获得过表达grp75的细胞克隆;置于无糖培养基培养20h及无糖培养12h换含糖培养基继续培养8h(缺糖再灌注)或含糖培养20h,运用MTT法、LDH测定和流式细胞术分析等方法评估细胞损伤程度。MTT测定显示,未转染细胞缺糖再灌流的增殖能力比完全培养20h增殖能力明显降低(p<0.05),且低于无糖培养20h(p<0.05),转染细胞缺糖再灌流的增殖能力明显高于对照组(p<0.01);LDH测定结果显示,未转染细胞缺糖再灌流LDH释放百分比显著高于完全培养20h(p<0.01),与无糖培养20h无明显差别(p>0.05),转染细胞缺糖再灌流LDH释放百分比显著低于对照组(p<0.01);流式细胞术分析表明,转染细胞的凋亡率明显低于对照组。以上结果表明grp75过表达的细胞在缺糖损伤细胞的恢复中具有一定强度的抗损害作用。
- 高璀乡张双全殷志敏刘雯
- 关键词：葡萄糖调节蛋白无糖培养损伤细胞热休克蛋白
- 构建中国仓鼠肺细胞的过表达葡萄糖调节蛋白75细胞克隆模型并评估其细胞保护作用被引量：1
- 2005年
- 目的:以无糖培养12h后再以完全培养基继续培养的方法模拟细胞缺血后再灌注的损伤情况,观察葡萄糖调节蛋白75在缺糖及缺糖再灌注条件下对细胞的保护作用。方法:实验于2002-09/2004-02在复旦大学医学院医学与细胞遗传系实验室完成。以中国仓鼠肺细胞株为材料,置于无糖条件下培养12h后,重换含糖培养基继续培养以建立缺血再灌注体外培养模型,并采用脂质体介导的方法,以葡萄糖调节蛋白75表达载体(pcDNA3/葡萄糖调节蛋白75)转染中国仓鼠肺细胞细胞,获得过表达葡萄糖调节蛋白75的细胞克隆,运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法,乳酸脱氢酶释放率测定等方法评估细胞损伤程度。结果:①克隆细胞用葡萄糖调节蛋白75抗体对其蛋白质产物进行印迹分析,克隆细胞葡萄糖调节蛋白75蛋白表达量明显高于对照组。②四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法显示,未转染细胞缺糖再灌注的增殖能力比完全培养20h增殖能力明显降低(P<0.05),且低于无糖培养20h(P<0.05);重新灌注后,葡萄糖调节蛋白75过表达的细胞的增殖能力明显高于对照组(P<0.01)。③乳酸脱氢酶释放测定结果显示,转染细胞缺糖再灌注乳酸脱氢酶释放百分比显著高于完全培养20h(P<0.01),与无糖培养20h无明显差别(P>0.05),葡萄糖调节蛋白75过表达的细胞乳酸脱氢酶释放百分比显著低于对照组(P<0.01)。结论:通过建立过表达葡萄糖调节蛋白75的细胞克隆以无糖培养模拟能量代谢应激,观察葡萄糖调节蛋白75对处于能量代谢性应激中细胞的保护作用,以及应激后细胞的恢复情况。发现表达葡萄糖调节蛋白75的细胞较未转染的细胞具有更高的存活率,细胞膜损伤和DNA损伤较轻,说明葡萄糖调节蛋白75在细胞缺糖后再灌注损伤中具有一定的保护作用。
- 高璀乡李向荣陈正平李信梅
- 关键词：缺血转染
