国家自然科学基金(30371489) 作品数:5 被引量:31 H指数:4 相关作者: 毛萌 周晖 孙小妹 罗小丽 李胜富 更多>> 相关机构: 四川大学 四川大学华西医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部科学技术研究重点项目 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
脑源性神经营养因子诱导的丝裂原活化蛋白激酶信号通路 被引量:2 2006年 脑源性神经营养因子(B ra in-derived neurotroph ic factor,BDNF)是脑组织中含量最丰富的神经营养因子而且可能为一活性依赖性神经元存活因子。体外试验证实BDNF对正常皮质神经元有维持存活效应;对缺氧神经元有确切保护作用。它主要通过丝裂原活化蛋白激酶(M itogen-activated prote in k inase,M APK)信号通路及C a2+/钙调蛋白依赖性激酶(C a2+/C a lm odu lin-dependen t k inase,C aM K)信号通路调节脑细胞的生长、分化、存活、抗凋亡作用,而且其信号传导通路之间存在着复杂的交叉串扰机制。 孙小妹 毛萌关键词:脑源性神经营养因子 丝裂原活化蛋白激酶 CAMP反应元件结合蛋白 信号传导 脑源性神经营养因子对缺氧神经元的保护作用及其细胞内信号传递 被引量:9 2006年 目的:观察体外培养大鼠胚脑皮质神经元对缺氧耐受的时间窗,探讨外源性脑源性神经营养因子对缺氧神经元保护作用的时效-量效关系,及该保护作用可能的细胞内信号传递途径。方法:实验于2004-02/2005-02在四川大学华西医院移植工程及移植免疫实验室完成。体外培养孕17~19dSD大鼠皮质神经元,随机数字法分为基线对照组、单纯缺氧组及缺氧+脑源性神经营养因子组,7d后作缺氧培养,采用四氮唑盐比色法检测0~10h段各时间点单纯缺氧组和缺氧+脑源性神经营养因子组(分别在缺氧前24h及缺氧前即刻加入25~100μg/L脑源性神经营养因子)存活率的差别,并用Westernblotting检测两组神经元在Akt/磷酸化Akt及CREB/磷酸化CREB表达的差别。结果:①脑源性神经营养因子对缺氧神经元的保护作用是相对的,该保护作用具有时效-量效关系,缺氧前24h加入大剂量脑源性神经营养因子组(100μg/L)优于缺氧即刻加入小剂量(25μg/L)组,缺氧损伤到一定程度后(>10h)脑源性神经营养因子的保护作用将明显减弱犤缺氧前24h加入100μg/L脑源性神经营养因子在1,2,4,8,10h细胞活性分别为基线对照组的(133.85±3.72)%,(109.83±5.43)%,(86.15±0.68)%,(53.78±1.71)%,(33.41±1.64)%,而缺氧前即刻加入25μg/L脑源性神经营养因子组在以上时点细胞活性分别为基线对照组的(81.55±1.07)%,(92.10±4.89)%,(78.75±1.87)%,(43.58±2.42)%,(33.13±0.94)%,单纯缺氧组的细胞活性分别为基线对照组的(82.12±3.15)%,(81.79±2.61)%,(64.5±4.56)%,(45.9±1.74)%,(35.45±1.25)%犦。②加入脑源性神经营养因子可使磷酸化Akt表达增加,磷酸化CREB表达提前并维持较长时间。结论:脑源性神经营养因子可减轻缺氧对神经元的损害,而Akt表达上调可能是脑源性神经营养因子发挥其对缺氧神经元保护作用的重要途径之一。 周晖 毛萌 罗小丽 孙小妹 李胜富关键词:缺氧 脑源性神经营养因子 神经元 不同光激发钙荧光探针的性质、选择标准及测定过程的标准化 被引量:6 2007年 目的:概括钙荧光探针的分类,选择钙荧光探针的基本思路以及细胞内钙测定的标准化。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库2000-01/2006-12相关钙荧光探针方面的文献,检索词“calcium fluorescent indicators,calcium measurement”,限定文献语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,选取包括钙荧光探针的文献,开始查找全文。纳入标准:与钙荧光探针及细胞内钙测定相关的文献。排除标准:重复研究、个案报告、综述、Meta分析的文献。资料提炼:共检索到103篇关于钙荧光探针及细胞内钙测定的文献,最终纳入30篇符合标准的文献。资料综合:钙荧光探针可分为定性探针及定量探针两类,定性探针多为可见光激发的单波长探针,其代表有Fluo3和Fluo4等,定量探针多为紫外激发的双波长探针,其代表为Fura2及Indo1等。选择钙荧光探针需考虑试验目的,探针进入细胞的方式,探针的离解常数及测定所用仪器等。测定细胞内钙时,应注重测定过程中的标准化,同时注意钙荧光探针测定过程中的潜在问题,避免混杂因素的干扰。本文主要综述如何选择钙荧光探针。结论:选择合适的钙探针,注意钙荧光探针测定过程中的标准化及其他潜在问题,可对细胞内钙离子浓度进行较为准确的测定。 周晖 毛萌关键词:钙 荧光探针 钙及钙调蛋白依赖性激酶在神经元缺氧损伤中的作用 被引量:5 2007年 目的探讨钙及钙调蛋白依赖性激酶(calmodulin dependent kinase,CaMK)在神经元缺氧损伤中的作用及机制。方法体外培养大鼠胚脑皮质神经元,随机分为单纯缺氧组及钙阻滞剂干预组,其中钙阻滞剂干预组采用尼莫地平(nimodipine)、MK-801分别阻断L-VSCC受体、NMDA受体的传导,采用MTT法测定各组神经元缺氧前后细胞活性,用Fluo-4AM荧光探针测定各组细胞内钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡ及CaMKⅣ的表达。结果尼莫地平及MK-801组细胞活性较单纯缺氧的对照组高;尼莫地平可迅速降低缺氧神经元的细胞内钙,MK-801可长时间降低缺氧神经元的细胞内钙。尼莫地平可抑制CaMKⅡ的表达,MK-801对CaMKⅡ的表达无明显影响,但可抑制CaMKⅣ的表达。结论尼莫地平和MK-801可分别通过抑制CaMKⅡ和CaMKⅣ表达实现对缺氧神经元的保护作用。 周晖 孙小妹 罗小丽 毛萌关键词:神经元 缺氧损伤 钙 脑源性神经营养因子对缺氧胚脑皮质神经元发挥保护作用的细胞内信号传导机制 被引量:10 2006年 目的:通过胚脑皮质神经元的体外培养,探讨遭受缺氧刺激时,脑源性神经营养因子(Brain derivedneurotrophic factor,BDNF)对神经元发挥保护作用时所启动的细胞内信号传导通路。方法:对胚鼠皮质神经元进行体外培养,提取不同缺氧时间点单纯缺氧的对照组及BDNF干预组的细胞蛋白,采用免疫印记(western blotting)方法检测两组神经元在细胞外信号调节激酶(extracellular signal-related kinase,ERK1/2)/磷酸化ERK1/2、蛋白激酶Akt/磷酸化Akt、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 Mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)/磷酸化P38MAPK表达上的差别。结果:与单纯缺氧组比较,加入BDNF可引起磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT表达的增强,而磷酸化的P38MAPK在两组均没有表达。结论:BDNF引起磷酸化ERK1/2及磷酸化AKT表达的上调可能为BDNF发挥对缺氧神经元保护作用的机理之一。 孙小妹 毛萌 周晖 罗小丽 李胜富关键词:脑源性神经营养因子 缺氧 ERK1/2 AKT