国家自然科学基金(30371493)
- 作品数：8 被引量：33H指数：2
- 相关作者：傅俊江卢光琇邢晓为李麓芸钟锠高更多>>
- 相关机构：中南大学中南大学湘雅三医院青海大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- SRG4在出生后小鼠睾丸及隐睾中的表达特性被引量：1
- 2007年
- 研究小鼠生精新基因SRG4在出生后小鼠睾丸及手术隐睾中的表达特性,为了解SRG4在精子发生中的作用奠定基础。取出生后1,3,12w小鼠睾丸进行免疫组化检测,观察SRG4蛋白在出生后小鼠不同发育阶段睾丸中的表达;制备单侧手术隐睾模型,取术后0～18d的隐睾组织进行半定量RT-PCR检测,观察SRG4 mRNA在隐睾病变过程中的表达变化,并对隐睾术后18d睾丸进行组织原位杂交分析。免疫组化分析结果表明,SRG4蛋白在出生1w的小鼠睾丸中几乎检测不到,在出生3w的小鼠睾丸中有明显表达,在出生12w的小鼠中大量表达,主要分布在精母细胞和圆形精子细胞胞浆及胞膜,呈不均匀分布。半定量RT-PCR结果发现,SRG4 mRNA在小鼠隐睾术后0～6d表达没有明显下调,9d开始表达下调,第18d表达最低。组织原位杂交结果表明,术后18d隐睾睾丸生殖细胞大量凋亡,精曲小管中仅见到个别的SRG4阳性信号,而对照则不受影响。上述结果说明,SRG4蛋白表达受小鼠生长发育调控;隐睾模型中,随着生殖细胞的大量凋亡,SRG4基因表达下调,提示SRG4基因可作为一个精子发生特定阶段的分子标记用以研究精子发生过程。
- 邢晓为李麓芸卢光琇
- 关键词：睾丸隐睾精子发生
- 46,XY女性性反转患者SRY基因的两个新突变类型(英文)被引量：1
- 2005年
- Y染色体上的性别决定区域———SRY基因作为睾丸决定因子,可以调控男性性别发育过程。SRY基因是一种转录因子,属于带有高迁移率族蛋白家族,该家族成员包含能与DNA结合的HMG盒基序。已知SRY基因的缺失和点突变是造成XY女性性反转的病因之一。通过筛查10位中国46,XY女性性反转病人SRY基因的开放阅读框区域,探寻新的突变类型。用标准方法从外周血中抽提gDNA,通过聚合酶链式反应扩增SRY基因中部的609bp的DNA片段。扩增后的PCR片段被克隆到pUCm T载体中,在ABI3773自动测序仪上完成测序。运用限制性内切酶酶切分析的方法验证DNA测序的结果。结果表明,在两个患者的SRY基因中分别发现了新的核苷酸点突变,并都导致氨基酸替代。一个突变发生在SRY基因的5′端HMG盒外的核苷酸第113位腺嘌呤(A)被鸟嘌呤(G)取代,并导致谷氨酸被甘氨酸替换;另一个突变是第387位核苷酸发生T被A替换,该突变引起第129位的酪氨酸变成终止密码,她父亲的SRY序列被证明是正常的野生型。通过查询文献和人类基因突变数据库(HGMD),这两个突变都是以前未见报道过的新型SRY基因突变,并使因核苷酸替换引起SRY基因突变总数增加到45。
- 周畅傅俊江李麓芸卢光琇
- 关键词：SRY基因HMG盒
- 可诱导的稳定表达Spata3细胞系的建立及特征(英文)
- 2008年
- spata3是一个在睾丸中特异性表达的基因,可能与精子发生或生精细胞凋亡相关。为了进一步研究Spata3的功能,将spata3克隆入经修饰的pcDNA5/FRT/TO表达载体,应用Flp-InTMT-RExTM-293细胞系作为宿主细胞,成功地构建了可被四环素或Doxycline诱导的稳定表达Flp-InTMT-RExTM-sptat3的细胞系。该细胞系在spata3基因的3'端有2×FLAGtag和2×Histag,在缺乏可利用的spata3或其抗体的情况下,也能够很容易地应用商品化的FLAG抗体检测到spata3全长蛋白的表达。这种可诱导的稳定表达Flp-InTMT-RExTM-spata3的细胞系的建立,不仅有利于spata3的分析鉴定和功能研究,而且对于其他蛋白质的分离纯化和功能研究也有很好的借鉴作用。
- 傅俊江曾卫民李月红郭明日
- 关键词：稳定细胞系蛋白质表达
- 长白与青海八眉“二元杂交”猪种群PERV亚型分析被引量：2
- 2007年
- 目的研究长白与青海八眉"二元杂交"猪种群携带的内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)亚型,为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据。方法从长白与青海八眉"二元杂交"猪种群中随机采集33头个体外周血,应用PCR和RT-PCR技术分别检测PERV前病毒DNA和mRNA,研究该种群携带PERV的亚型,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。克隆测序该猪种PERVenv基因,结果用NCBI中的BLAST软件进行分析。结果所检测的33头个体均带有PERV前病毒DNA,外周血中均有PERV mRNA表达,其中,69.7%(23/33)个体携带env-A,env-B和env-C三种囊膜蛋白基因,而其余的30.3%(10/33)个体只带有env-A和env-B两种囊膜蛋白基因,env-C基因缺失。灵敏性分析实验结果表明,PCR扩增PERV时,DNA模板不能少于15ng。克隆env-A,env-B和env-C基因,结果提交GenBank(GenBank登录号分别为DQ856326、DQ856327、DQ856328)。生物信息分析结果表明,该猪种env基因与GenBank登录其他猪种序列相比存在差异,其中env-A、env-B基因发生移码突变,蛋白合成提前终止。结论长白与青海八眉"二元杂交"猪种群携带PERV,69.7%个体为PERV-ABC亚型;缺失突变使PERVenv-A,env-B基因阅读框发生改变,有可能影响其感染特性,从生物安全性方面综合考虑,该猪种不宜作为异种移植供体。
- 邢晓为许生成莫朝晖宁鹏王勇王维
- 关键词：猪内源性逆转录病毒异种移植克隆
- 一个人类精子发生相关新基因TSARG7的克隆和初步功能研究(英文)被引量：2
- 2006年
- 精子发生是一个多基因参与的复杂的生理过程,虽然人们克隆了一些与精子发生相关的基因,但迄今为止,人们对精子发生的分子机制了解有限,因而克隆相关的新基因,并研究其在理论上和实践上的功能仍然十分重要。该文从人类睾丸cDNA文库出发,以小鼠精子发生相关基因mTSARG7基因为电子探针,得到1个与人类的精子发生相关的新基因TSARG7(GenBank登录号为AY513610)。该基因的cDNA全长为2463bp,含有12个外显子和11个内含子,定位在人类8号染色体8p11.21上。TSARG7编码的蛋白质含有456个氨基酸,分子量为56.295kDa,等电点为9.13,为胞浆中非分泌性蛋白,具有磷酸酰基转移酶(PISC)的结构域,属于酰基转移酶家族的新成员,该家族成员具有脂质合成的功能。TSARG7和mTSARG7,TSARG7和Au041707分别具有97%的同源性。该基因在睾丸中特异表达,亚细胞定位在胞浆中表达。TSARG7mRNA在13岁的睾丸中开始表达,并且随着精子的发生和性成熟而稳定增加,热应急实验显示该基因的表达与温度相关。综上所述,该文克隆了人的1个新基因,该基因与精子的发生和性成熟相关。
- 谭小军黄志平李蔍芸聂东宋钟锠高傅俊江卢光琇
- 关键词：基因克隆睾丸精子发生
