中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(12-2)
- 作品数：9 被引量：25H指数：3
- 相关作者：杨威陶立陈泽祥李军彭昊更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所广西大学河南农业大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 广西奶牛隐孢子虫病的流行病学调查被引量：9
- 2012年
- 为了调查广西奶牛隐孢子虫病的流行情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对广西9个奶牛场和4个奶牛个体养殖户的1 612头份粪样进行隐孢子虫卵囊的检测,并以基于18SrRNA基因的PCR-RFLP技术对分离的隐孢子虫卵囊进行种类鉴定。结果显示,7个奶牛场发现存在隐孢子虫感染,隐孢子虫阳性粪样为189头份,总感染率为11.72%(189/1 612)。在感染的年龄段上,1～6月龄犊牛的隐孢子虫感染率为21.3%,显著高于7～12月龄的青年牛(9.6%)和大于1岁龄的成年牛(3.8%)(P<0.01)。感染季节以冬季感染较高,但与夏季感染结果相比差异不显著(P>0.05)。PCR-RFLP分析显示,分离的7个隐孢子虫株均为安氏隐孢子虫。调查表明,广西奶牛隐孢子虫虫株以安氏隐孢子虫为主,感染率与河南、江苏、安徽、吉林等省份相似。
- 陶立陈泽祥韦志锋王荣军秦若甫李军唐林生彭昊兰美益魏晓瑞杨威
- 关键词：隐孢子虫奶牛流行病学调查
- 隐孢子虫截短热休克蛋白70(HSP70)基因的原核表达及其抗原性分析被引量：2
- 2014年
- 根据Gen Bank上的安氏隐孢子虫HSP70基因主要抗原片段区序列设计特异性引物,用RT-PCR方法扩增出目的片段,构建克隆载体,双酶切后连接到p ET-32a表达载体,成功构建了表达质粒p ET-32a-HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到表达菌中,IPTG诱导表达,表达产物经过SDS-PAGE和Western blot鉴定和分析,证实获得HSP70融合蛋白。以鼠抗安氏隐孢子虫卵囊高免血清为一抗进行Western blot检测,试验结果证实重组HSP70蛋白具有良好的免疫反应性,为建立隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定了基础。
- 彭昊唐林生李军陶立陈泽祥潘艳谢永平许力干杨威黄维义
- 关键词：隐孢子虫热休克蛋白70免疫原性
- 安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因与热休克蛋白70基因的重组联合表达被引量：1
- 2014年
- 利用双酶切方法将安氏隐孢子虫热休克蛋白70(HSP70)基因部分编码区连接到含有安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因(COWP)的表达质粒pET-32a-COWP上,构建了表达质粒pET-32a-COWP-HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,30℃,经1.5mmol/L IPTG诱导表达6h,表达产物主要以可溶的形式表达。使用小鼠抗安氏隐孢子虫超免疫血清为第一抗体进行Western-blot检测,结果有明显的目的条带出现,说明重组蛋白能被抗安氏隐孢子虫抗体识别。
- 李军唐林生彭昊陶立潘艳潘艳许力干陈泽祥杨威许力干
- 关键词：安氏隐孢子虫
- 安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白的原核表达及其免疫原性研究被引量：1
- 2014年
- 【目的】验证安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白(COWP)的免疫原性,为建立安氏隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定基础。【方法】根据Gen Bank已公布的安氏隐孢子虫COWP同源基因序列(DQ060431)设计引物,克隆COWP基因并构建原核表达载体,经IPTG诱导表达后,采用蛋白印迹法检测其免疫原性。【结果】扩增获得的COWP基因片段为549bp,其序列与Gen Bank已公布COWP同源基因序列(DQ060431)的同源性达100%,将其插入p ET-32a载体可构建p ET-32a-COWP表达载体。重组菌在30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h后,其表达形式以可溶性表达为主;NTA-Ni亲和层析柱层析时用200 mmol/L咪唑洗脱液洗脱,即能得到纯化的重组蛋白,重组蛋白分子量约40 k Da。以抗His标签鼠单克隆抗体或鼠抗安氏隐孢子虫高免血清为一抗进行Western blotting检测,均能获得预期的目的条带。【结论】重组COWP蛋白具有良好的免疫原性,可作为安氏隐孢子虫病免疫学诊断的候选抗原。
- 彭昊唐林生李军黄维义陶立陈泽祥谢永平许力干杨威
- 关键词：安氏隐孢子虫原核表达免疫原性
- 广西奶水牛场隐孢子虫感染情况的调查被引量：8
- 2013年
- 了解广西奶水牛隐孢子虫病的感染情况,为兽医生物安全卫生提供数据。采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行检测,共检测南宁、来宾等6市8个奶水牛养殖场1 009头份不同日龄的奶水牛新鲜粪样。应用形态学分类和PCR技术对分离的隐孢子虫卵囊进行种类鉴定,发现1头奶水牛呈隐孢子虫感染阳性,其卵囊通过分离纯化后,经形态学和分子生物学鉴定为安氏隐孢子虫(Cryptosporidium anderso-ni)。广西奶水牛隐孢子虫感染率极低,主要是安氏隐孢子虫感染。
- 谢永平魏晓瑞李军陶立闭炳芬韦志锋彭昊陈泽祥杨威王晓丽
- 关键词：隐孢子虫奶水牛
- 广西2月龄内犊奶牛隐孢子虫感染情况调查被引量：2
- 2014年
- 自Tyzzer （1907）首次发现小鼠隐孢子虫（C.muris）以来,国内外学者对隐孢子虫病进行了大量研究,已在人、哺乳动物、禽类、爬行动物和鱼类等多种动物中发现15个种类的隐孢子虫感染^[1-3],其中可感染牛的隐孢子虫种为安氏隐孢子虫（C.an-dersoni小球隐孢子虫（C.parvum）、牛隐孢子虫（C.boris）、小鼠隐孢子虫（C.muris）、犬隐孢子虫（C.ca-nis）、猫隐孢子虫（C.fells）、猪隐孢子虫（C.suis）、鹿样基因型（C.deer-like genotype）和赖氏隐孢子虫（C.ryanae）^[4-5].隐孢子虫对牛的感染与牛的年龄呈正相关性[6].
- 魏晓瑞陶立李军谢永平闭炳芬陈泽祥韦志锋秦若甫兰美益彭昊杨威王晓丽
- 关键词：犊奶牛月龄隐孢子虫感染安氏隐孢子虫
- 牛隐孢子虫多重PCR方法的建立及应用被引量：8
- 2012年
- 目的为寻求一种牛源隐孢子虫的快速检测手段。方法根据牛隐孢子虫COWP基因和ITS-1基因,设计合成两对特异性引物,用以特异性扩增牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫,扩增长度分别为1 033bp和263bp。通过反应条件的优化,特异性试验及扩增片段的序列测定的验证,建立多重PCR方法。结果应用该方法对采集自广西不同地区的1613份牛粪样进行牛隐孢子虫检测,安氏隐孢子虫阳性粪样为189份,微小隐孢子虫阳性粪样1份,与常规隐孢子虫分离鉴定结果一致。结论表明该方法可用于隐孢子虫的流行病学调查及临床诊断。
- 彭昊李军陶立陈泽祥韦志锋许力干杨威
- 关键词：微小隐孢子虫安氏隐孢子虫多重PCR
- 柳江县奶牛肠道寄生虫感染情况的调查被引量：2
- 2014年
- 为了解及掌握柳江县奶牛消化道寄生虫流行情况并评估其对奶牛的危害程度.本研究对柳江县3个奶牛场随机抽取80头份奶牛粪便运用饱和盐水漂浮法、饱和蔗糖溶液漂浮法和尼龙兜淘洗法检查虫卵及卵囊.表明：奶牛肠道寄生虫总感染率为12.5％ （10/80）;隐孢子虫感染率为10％ （8/80）,其中0～12月龄小牛感染率为20％ （4/20）,成年奶牛感染率为6.67％ （4/60）;球虫感染率为2.5％ （2/80）,其中0～12月龄小牛感染率为10％ （2/20）,成年奶牛感染率为0％（0/60）;未发现其它种类寄生虫虫卵或卵囊.此次调查表明柳江县成年奶牛感染了隐孢子虫,而小牛感染了隐孢子虫、球虫,且感染率较高,因此应引起足够重视.此次调查结果为防治奶牛寄生虫病提供了科学依据,对柳江县奶牛业健康发展有重要意义.
- 周金石韦志锋秦若甫李国庆陶立谢永平杨威
- 关键词：奶牛肠道寄生虫隐孢子虫感染率
- 隐孢子虫重组蛋白包被抗原的筛选及ELISA方法的建立及初步应用被引量：2
- 2015年
- 为建立检测牛隐孢子虫抗体的间接ELISA方法,本研究将重组表达的隐孢子虫卵囊壁蛋白（COWP）、热休克蛋白70（HSP70）蛋白及COWP-HSP70串联蛋白分别作为包被抗原,进行反应条件的优化,建立了3种间接ELISA检测方法。建立的这3种方法均具有较高的特异性和敏感性。与伊氏锥虫,球虫和弓形虫阳性血清均无交叉反应,最低检出血清稀释倍数分别为1∶1 600、1∶3 200和1∶3 200。经过筛选,确定COWP-HSP70串联蛋白为包被抗原的间接ELISA方法为最佳检测方法。以该方法进行的重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数分别为3.9%～8.2%和4.7%～8.3%。采用建立的ELISA方法与传统的粪检法分别对174份临床样品进行检测,隐孢子虫感染的检出率分别为9.2%和12.07%,两者符合率为97.13%。本研究建立的以COWPHSP70串联蛋白为包被抗原的牛隐孢子虫间接ELISA检测方法适用于临床牛隐孢子虫感染的检测。
- 李军唐林生唐林生彭昊潘艳陶立许力干潘艳杨威陈泽祥
- 关键词：隐孢子虫热休克蛋白70酶联免疫吸附试验
