内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJ09100)
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 相关作者：锡林高娃布日额吴金花刘燕王学理更多>>
- 相关机构：内蒙古民族大学河北征宇制药有限公司黑龙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 牛源无乳链球菌sip蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2011年
- 为测定牛源无乳链球菌表面免疫相关蛋白(sip)的抗原性,本实验通过建立间接ELISA方法,对该蛋白的抗原性进行分析及鉴定。根据无乳链球菌sip基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位优势区编码的基因序列,并将其与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒pET-sip,转化宿主菌BL21中,经IPTG诱导,获得重组蛋白,western blot分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,建立检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.125μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000。应用该方法对无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌兔阳性血清进行检测,结果表明,该方法具有良好的特异性和灵敏度。
- 郎景民布日额孙立杰刘娣吴金花锡林高娃刘燕史芬芳
- 关键词：无乳链球菌原核表达间接ELISA
- 牛乳腺炎无乳链球菌内蒙古分离株SIP基因抗原表位的高效表达及其免疫活性鉴定
- 本研究根据GenBank中已公布的牛源无乳链球菌SIP基因序列抗原表位序列设计1对引物,以无乳链球菌分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增出SIP抗原表位序列。对其进行克隆、测序、转化、诱导表达及免疫活性鉴定。结果显示克...
- 郎景民布日额刘娣吴金花锡林高娃刘燕
- 关键词：无乳链球菌原核表达免疫活性
- 文献传递
- 奶牛乳腺炎无乳链球菌pgk基因的克隆与序列分析被引量：9
- 2011年
- 目的获得牛乳腺炎无乳链球菌分离菌株pgk基因序列,分析其基因与氨基酸的同源性。方法参考Gen-Bank上公布的牛源无乳链球菌pgk基因序列设计合成1对引物,通过PCR扩增获得其序列并进行克隆与测序分析。结果所扩增的pgk基因序列的大小为1 197 bp,负责编码399个氨基酸残基。对比扩增的分离菌株pgk基因序列与GenBank上公布的B群无乳链球菌pgk基因(AE009948)相似性达到99.83%,编码的氨基酸序列相似性达到99.74%。结论该基因序列具有高度的保守性,为进一步对分离菌株的pgk基因进行高效表达及其产物的抗原性研究奠定了基础。
- 张海宝布日额王学理吴金花孙立杰唐吉思锡林高娃刘燕
- 关键词：无乳链球菌克隆
- 牛乳腺炎无乳链球菌Pgk基因抗原优势区原核表达产物的抗原性分析
- 2011年
- 为了探索牛乳腺炎无乳链球菌磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,Pgk)基因编码蛋白的抗原性,根据GenBank公布的牛源无乳链球菌Pgk基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出Pgk蛋白抗原优势区的编码序列,并对其进行克隆、测序、转化、诱导表达及抗原性鉴定。结果显示克隆的Pgk基因序列含有984 bp,编码328个氨基酸残基。临床分离株与GenBank上公布的B群无乳链球菌菌株Pgk基因(AE009948)核苷酸序列同源性为99.09%,氨基酸序列同源性为99.69%。将扩增的Pgk基因片段克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体Pgk-pET30a(+),再将筛选的阳性重组质粒转化至BL21工程菌,经IPTG诱导获得部分可溶性表达Pgk重组蛋白。经Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在90%以上的蛋白,经Western blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步探索其对奶牛的免疫原性研究奠定了良好的实验基础。
- 张海宝布日额吴金花王学理孙立杰唐吉思锡林高娃刘燕张忠祥
- 关键词：无乳链球菌原核表达抗原性
- 牛乳腺炎无乳链球菌内蒙古分离株sip基因抗原表位序列的高效表达及其抗原性鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的本实验的目标是克隆、高效表达牛源无乳链球菌的sip基因抗原优势区序列,并进行其抗原性鉴定。方法根据GenBank中已公布的牛源无乳链球菌sip基因序列抗原表位序列设计1对引物,以无乳链球菌分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位序列,并进行克隆、测序、转化、表达及抗原性鉴定。结果克隆的sip基因抗原表位序列为897 bp,编码299个氨基酸,与GenBank中公布的牛无乳链球菌sip基因(AF151361)比对后,其相似性为99.8%,氨基酸相似性为99.7%;经高效表达后其可溶性表达率48.7%。重组蛋白的分子质量单位为40.3 ku。经纯化得到纯度在90%以上的SIP蛋白,Western blot显示重组蛋白能被抗无乳链球菌血清识别。结论本研究成功构建了rSIP-pET30(a)重组质粒,并高效表达SIP,且该重组蛋白具有抗原性,为建立奶牛隐性乳腺炎抗体监测方法与乳中无乳链球菌的检测方法奠定了基础。
- 郎景民布日额吴金花王学理锡林高娃刘燕
- 关键词：无乳链球菌原核表达抗原性
- 奶牛乳腺炎无乳链球菌分离株sip基因截短序列的克隆与序列分析
- 为获得无乳链球菌分离菌株sip基因抗原性优势区序列,本实验对分离于内蒙古自治区某规模化奶牛场患隐性乳腺炎乳样中的菌株,在常规常规鉴定的同时,根据GenBank上公布的牛源无乳链球菌sip基因序列设计1对截断扩增其抗原优势...
- 张忠祥布日额孙立杰吴金花郎景民史芬芳赵金鱼
- 关键词：牛乳腺炎无乳链球菌
- 文献传递
