国家自然科学基金(30960147)
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 相关作者：权金星刘静李伟华陈卫杨海静更多>>
- 相关机构：甘肃省人民医院兰州大学宁夏医科大学更多>>
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- 油酸调节人血管平滑肌细胞TLR4的增殖活性及炎性因子的表达被引量：6
- 2013年
- 目的探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用。方法 MTT法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达;Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量。结果油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞增殖活性,增加油酸浓度,抑制细胞增殖。油酸上调TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1 mRNA表达最大幅度为6.5、7.4、7.4和7.1倍。IL-6、IL-8和MCP-1蛋白表达最大上调幅度为2.16、1.93和2.06倍。200μmol/L组TLR4蛋白表达的吸光度值为(1.70±0.62),与对照组(0.29±0.22)比较P<0.05。LPS组TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1的表达明显增加(P<0.05)。结论油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子mRNA及蛋白表达。
- 杨海静陈卫权金星李伟华刘静邱明才
- 关键词：油酸细胞因子基因表达
- TLR4通路在软脂酸诱导人血管平滑肌细胞IL-6基因表达中的作用被引量：1
- 2013年
- 构建Toll样受体4（TLR4）shRNA腺病毒表达载体（pGSadeno—TLR4）并感染人主动脉血管平滑肌细胞（HA-VSMC），采用软脂酸和不同的信号通路阻断剂处理HA—VSMC，以实时定量PCR检测白细胞介素6（IL-6）mRNA的表达，酶联免疫吸附法（ELISA）检测NF—KBp65活性和IL-6的蛋白水平。结果显示，软脂酸增加HA—VSMCIL-6mRNA和蛋白水平，且具有明显的剂量依赖关系，软脂酸（400μmol／L）处理6h作用最明显。IL-6mRNA的表达水平为对照组的10．43倍（P〈0．01）。IL-6蛋白水平在软脂酸作用24h时达到峰值，约为对照组的2．18倍（P〈0．01）。NF．KB阻断剂parthenolide下调软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达分别为65％和59％（均P〈0．01），蛋白激酶C（PKC）阻断剂白屈菜红碱下调软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达分别为24％和28％（均P〈0．05）。而细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059和磷酸肌醇3激酶抑制剂wortmannin对软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达均无明显作用（均P〉0．05）。pGSadeno．TLR4下调软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达分别为72％和75％（均P〈0．01），下调软脂酸刺激的NF—KBv65活性约62％（P〈0．01）。这些结果提示TLR-4／NF—KB和PKC信号通路介导了软脂酸诱导的人主动脉血管平滑肌细胞IL-6基因表达。
- 权金星高啸波杨海静陈卫李伟华李永红刘静
- 关键词：软脂酸TOLL样受体4白细胞介素6
- 果蝇样受体4介导游离脂肪酸调节人血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达被引量：4
- 2013年
- 目的探讨软脂酸对人主动脉血管平滑肌细胞（HA—VSMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因表达的调节及果蝇样受体4（TLR4）信号通路的作用。方法采用不同剂量的软脂酸（100、200、400μmol/L）处理HA—VSMC6、12、24h，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞MCP．1mRNA表达，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测MCP-1蛋白表达，观察软脂酸调节MCP-1表达的剂量依赖关系和时间效应；采用蛋白激酶C（PKC）抑制剂白屈菜红碱、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）抑制剂wortmannin、神经酰胺抑制剂myriocin和核因子KB（NF—KB）抑制剂parthenolide分别处理细胞30min，再加入软脂酸（400μmol/L）处理细胞6h后，实时荧光定量PCR检测MCP-1mRNA的表达水平，ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平，研究软脂酸调节MCP-1表达依赖的信号通路；构建TLR4短发夹RNA（shRNA）腺病毒pGSadeno-TLR4并感染HA—VSMC沉默TLR4基因表达，实验同时设空白对照组（PBS缓冲液）和对照病毒（pGSadeno-GFP）组。细胞感染96h后更换培养基，再加入软脂酸（400μmoL／L）处理细胞6h，采用实时荧光定量PCR检测MCP-1mRNA表达水平，ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平。提取细胞核蛋白，采用ELISA检测NF—KBp65亚基活性，观察TLR4／NF-KB通路在软脂酸调节HA-VSMCMCP-1基因表达中的作用。组间均数比较采用单因素方差分析。结果采用软脂酸处理细胞6h后，对照组及100、200和400μmoVL软脂酸组MCP-1mRNA表达分别为1．00±0．02、3．30±2．84、8．21±4．31和11．25±2．73（F=7．57，P〈0．05）；MCP-1蛋白表达分别为（127±10）、（147±10）、（163±18）和（194±14）ng／L（F=7．81，P〈0．05）。软脂酸可促进HA-VSMCMCP-1mRNA和蛋白表达且具有明显的剂量依赖关系。细胞培养12h和24h后，随着软脂酸浓度的增加，MCP-1mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增加趋势，但时间效应则不明显。采用不同�
- 高啸波权金星杨海静陈卫李伟华李永红刘静
- 关键词：软脂酸单核细胞趋化蛋白-1
- 2型糖尿病Toll样受体4与颈动脉内膜中层厚度的相关性研究被引量：6
- 2015年
- 目的探讨2型糖尿病患者外周血单个核细胞Toll样受体4（TLR4）信号与颈动脉内膜中层厚度（CIMT）的相关性。方法选取本院2型糖尿病住院患者66例，其中2型糖尿病无大血管病变组[CIMT〈0．9mm]20例，2型糖尿病合并大血管病变组（CIMT≥0．9mm或有颈动脉斑块）46例。性别、年龄匹配的健康志愿者40名作为对照组。采用流式细胞术检测外周血单个核细胞TLR4表达水平，测定CIMT、超敏C反应蛋白（hs—CRP）、白细胞介素（IL）-6和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）水平。应用单因素方差分析、Pearson相关分析、多元线性回归分析及logistic回归分析等进行数据分析。结果2型糖尿病合并大血管病变组TLR4表达水平显著高于2型糖尿病无大血管病变组和对照组[（18．60±4．64对14．92±3．47，12．80±2．60），P〈0．05]；2型糖尿病合并大血管病变组IL-6、hs—CRP及MCP-1水平较对照组显著增高I（6．08±3．16对4．52±2．04）pg／ml，（2．67±2．40对1．53±1．49）mg／dl，（307．99±113．39对242．50±48．04）pg／ml，均P〈0．05]，但与2型糖尿病无大血管病变组比较无显著性差异（均P〉0．05）；Pearson相关分析表明：CIMT与TLR4、IL45、hs．CRP、MCP-1、年龄、空腹血糖、HbA，，和稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）呈正相关（r=0．540、0．244、0．271、0．329、0．381、0．490、0．471、0．410，均P〈0．05），与高密度脂蛋白胆固醇（HDL．C）呈负相关（r=-0．323，P〈0．05）。TLR4与CIMT、HOMA—IR．IL-6、hs．CRP和MCP．1呈正相关（r=0．540、0．428、0．214、0．242、0．385，均P〈0．05），与HDL—C呈负相关（r=-0．384，P〈0．05）。多元线性逐步回归分析显示：TLR4、年龄、空腹血糖是CIMT的独立影响因素（R。=0．292、0．423、0．492，均P〈0．05）。Logistic回归分析显示TLR4水平升高是颈动脉斑块形成的危险因素（OR=1�
- 吕亚亚师维雅左玉琼何启娟李永红周祖邦许衍甲权金星刘静
- 关键词：糖尿病TOLL样受体4动脉粥样硬化颈动脉内膜中层厚度
- 透明质酸对游离脂肪酸引起的人主动脉血管平滑肌细胞表达IL-6、IL-8和TNF-α的影响
- 2017年
- 目的探讨透明质酸(HA)对游离脂肪酸(FFA)引起的人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)表达白细胞介素6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法培养HA-VSMC,用不同浓度(0、100、200、400μmol/L)FFA和不同浓度FFA+高分子量HA(HMW-HA)或低分子量HA(LMW-HA)处理细胞24、48 h。噻唑蓝法检测FFA和FFA+HA对HA-VSMC存活率的影响;Ed U染色检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测培养上清IL-6、IL-8和TNF-α含量;实时荧光定量PCR和Western blot检测IL-6、IL-8和TNF-αmRNA及蛋白表达水平。结果(1)FFA在400μmol/L内呈浓度依赖性诱导HA-VSMC增殖;(2)HMW-HA、LMW-HA均对FFA诱导的HA-VSMC增殖有抑制作用,且HMW-HA抑制作用强于LMW-HA;(3)FFA显著促进HA-VSMC IL-6、IL-8和TNF-α的分泌,且有明显的时间和浓度依耐性;HA可以抑制上述作用;(4)实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,FFA+HMWHA组、FFA+LMW-HA组IL-6、IL-8、TNF-αmRNA及蛋白表达水平均低于FFA组(均P<0.01),其中FFA+HMW-HA组又低于FFA+LMW-HA组(P<0.01)。结论 (1)FFA诱导HA-VSMC IL-6、IL-8、TNF-αmRNA和蛋白表达升高;(2)HA对FFA引起的HA-VSMC IL-6、IL-8和TNF-α的表达有抑制作用,且HMW-HA抑制效果强于LMW-HA。
- 杨兴文李伟华李元董莉权金星韩平治
- 关键词：透明质酸游离脂肪酸白细胞介素6白细胞介素8因子Α
