国家自然科学基金(30672121)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：尹良军邓忠良陈林王雪燕柯珍勇更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院第三军医大学大坪医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 成纤维细胞生长因子Ⅱ型受体功能获得型点突变影响小鼠颅底软骨发育被引量：1
- 2007年
- 目的:对比野生型小鼠和成纤维细胞生长因子Ⅱ型受体(fibroblast growth factor receptor2,fgfr2)基因S252W突变型小鼠颅底软骨的生长发育情况,探讨fgfr2功能持续增强对小鼠颅底软骨发育的影响。方法:实验于2004-03/2005-04在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤中心实验室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。①fgfr2+小鼠和C57BL/6J小鼠交配后取F1代,利用聚合酶链反应方法进行fgfr2突变型小鼠基因型的鉴定,得到野生型和fgfr2受体功能获得型点突变型两组小鼠。②标本取材及处理:分别在两组实验动物中,取胚胎期16d(E16)、胚胎期17d(E17)、新生2d(P2)、新生8d(P8)的小鼠的颅底作为标本。一部分体积分数为0.75的乙醇溶液固定。另一部分标本行40g/L多聚甲醛固定,150g/L乙二胺四乙酸溶液脱钙,常规石蜡包埋、切片。③阿尔辛-茜素红骨架染色显示颅底整体骨骼的发育情况。软骨组织染为蓝色,骨组织染为红色。④脱钙骨切片后进行苏木精-伊红染色。未脱钙骨切片后进行Calcein染色,荧光显微镜下观察钙化组织的情况。⑤使用地高辛RNA标记试剂盒按照产品说明制备Col 10(Collagen 10)地高辛标记的互补RNA探针,对颅底软骨联结进行检测软骨分化标志基因表达情况的原位杂交。⑥组织切片染色结果使用SPOT Advanced软件进行数码拍摄。结果:①实验小鼠颅底发育的大体情况:fgfr2受体功能获得型点突变小鼠从胚胎后期开始就表现出短颅现象。②阿尔辛蓝-茜素红骨架染色、Calcein染色和苏木精-伊红染色显示,fgfr2受体功能获得型点突变小鼠出生后颅底软骨联结没有出现提前融合的现象,但是颅底软骨生长发育差,软骨细胞增生区、肥大区缩短。突变小鼠的颅底软骨发育障碍导致颅底骨组织的生长发育也出现障碍。③原位杂交:Col10在野生型和突变型小鼠颅底软骨的表达部位未�
- 尹良军杜晓兰刘志君苏楠张宜华杨京金琝赵玲陈林
- 关键词：成纤维细胞生长因子受体软骨细胞
- FGF信号持续增强对体外培养小鼠骺板的影响
- 2010年
- 目的不同强度和持续时间下FGF信号的生物效应可能不同,探讨FGF信号持续增强对体外培养小鼠骺板生长的影响及可能机制。方法取胚胎期15d的C57BL/6J小鼠掌骨建立体外培养模型,分为3组(各40只掌骨)。对照组加入0.1%DMSO,bFGF组加入100μg/L bFGF和0.1%DMSO,PD98059组加入100μg/L bFGF和50μmol/L PD98059(含0.1%DMSO)。培养6d后用Calcein溶液对掌骨的钙化组织染色,测量其总长度(total length,TL)和钙化组织长度(ossifi ed tissue length,OSL)的增加百分率。培养7d提取骺板软骨细胞的RNA,实时荧光定量PCR仪检测Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,ColⅡ)、ColⅩ、Ihh(Indian hedgehog)基因表达的变化。结果胚胎小鼠的掌骨在体外培养条件下继续生长发育。培养6d后,bFGF组掌骨TL增加百分率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),OSL增加百分率显著小于对照组(P<0.05);PD98059组掌骨TL增加百分率和OSL增加百分率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),但均较bFGF组显著提高(P<0.05)。培养7d,bFGF组Ihh、ColⅡ和ColⅩ基因表达的相对含量均较对照组显著降低(P<0.05);PD98059组ColⅡ和ColⅩ基因表达的相对含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于bFGF组(P<0.05),Ihh基因表达的相对含量均显著高于对照组和bFGF组(P<0.05)。结论持续的FGF信号增强可能通过Ihh下调来影响ColⅡ和ColⅩ表达,使体外培养的骺板生长迟滞。细胞外信号调节激酶信号通路可能在上述机制中发挥重要作用。
- 尹良军沈岳邓忠良卢先红晏铮剑聂茂陈林
- 关键词：BFGF骺板体外培养小鼠
- 骨保护素的克隆及对骨髓间充质干细胞分化的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:克隆人骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)基因并构建其重组腺病毒,观察其对BMSCs分化的影响.方法:RT-PCR方法从人肝克隆OPG基因全长cDNA,利用穿梭质粒将OPG基因重组获得复制缺陷型重组腺病毒AdOPG;分离培养兔骨髓间充质干细胞,使用AdOPG感染兔BMSCs,以RT-PCR及Western Blot的方法鉴定BMSCs对OPG的表达。比色测定和细胞碱性磷酸酶染色法观察AdOPG感染BMSCs后5d时碱性磷酸酶(ALP)的表达。结果:克隆获得人OPG基因,测序与Gene bank一致,构建的重组腺病毒AdOPG滴度达109efu/ml,AdOPG感染BMSCs5d后ALP活性值为(21024±507)IU,AdGFP对照组为(3079±89)IU,空白对照组为(2156±78)IU。结论:骨保护素有利于骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化。
- 陈富徐希彦柯珍勇尹良军郭常辉王雪燕林春阳邓忠良
- 关键词：腺病毒人骨保护素骨髓间充质干细胞
