国家自然科学基金(30471911)
- 作品数：12 被引量：56H指数：5
- 相关作者：周洪王晓庚刘文佳张非煜左健更多>>
- 相关机构：西安交通大学首都医科大学附属北京安贞医院西安交通大学口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 持续压力对体外培养的人破骨细胞形态和基质金属蛋白酶9、抗酒石酸酸性磷酸酶表达的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨施加持续压力对体外培养的人破骨细胞功能的影响。方法:从脐血中提取单核细胞,α-MEM培养液中加入RANKL和M-CSF作为诱导因子,细胞培养14d。对鉴定为阳性的成熟破骨细胞施加100kPa持续性压力,加载时间分别为1h、3h、5h,观察加力后细胞形态的变化;对破骨细胞的2种重要功能酶—基质金属蛋白酶9(MMP-9)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)进行染色,每组随机选取20个细胞进行灰度分析,应用SPSS12.0软件包对MMP-9和TRAP表达量进行t检验,分析持续压力对破骨细胞的影响。结果:在持续压力的作用下,破骨细胞形态由不规则形态向圆形变化发展。加力1h后,TRAP表达量(59.61±14.95)与未加力组(80.01±9.69)有显著性差异(P<0.05);MMP-9在加力5h后(60.44±8.49)表达量增加,有统计学意义(P<0.05)。结论:体外持续压力可刺激成熟破骨细胞形态发生变化,MMP-9和TRAP表达量增加,说明应力能上调破骨细胞的骨吸收功能。
- 许海燕周洪饶国洲
- 关键词：TRAP
- 高纯度破骨样细胞体外培养及功能表达的研究被引量：7
- 2008年
- 目的建立大量高纯度破骨样细胞体外培养的方法,并运用分子生物学技术观察体外诱导培养的破骨样细胞标志酶的基因表达。方法按照巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)30ng/mL、核因子κB受体活化因子配基(RANKL)50ng/mL的质量浓度对骨髓单个核细胞诱导培养6d,利用形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、Giemsa染色、骨吸收陷窝检测以及破骨细胞标志酶基因表达的检测,对生成的破骨样细胞进行鉴定。结果实验获得的破骨样细胞中,TRAP阳性的单核破骨样细胞多见、TRAP阳性的多核破骨样细胞数量相对较少,胞核从2个到十几个不等;光镜下牙本质片上可见各种形态的骨吸收陷窝;应用RT-PCR方法证实破骨样细胞表达膜型基质金属酶(MT1-MMP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TRAP和组织蛋白酶K(CK)4种标志酶。结论以M-CSF和RANKL作为诱导因子,对大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养可以获得具有典型的破骨细胞形态特征,可以表达特征性标志酶基因,且数量大、纯度高。
- 刘文佳王晓庚周洪李昂
- 关键词：破骨样细胞细胞培养巨噬细胞集落刺激因子
- 沉默FoxM1通过促进线粒体释放细胞色素C诱导口腔鳞癌细胞凋亡被引量：11
- 2019年
- 目的:研究沉默叉头框蛋白M1 (FoxM1)基因对口腔鳞癌细胞凋亡影响及机制。方法:口腔鳞癌SCC9细胞感染FoxM1-shRNA慢病毒或阴性对照慢病毒,用RT-qPCR和Western blot测定沉默效果。MTT法测定细胞活力变化,平板克隆实验测定细胞克隆形成能力变化,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Western blot测定细胞中cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白水平变化,JC-1法测定细胞线粒体膜电位变化,Western blot测定细胞线粒体和胞浆中细胞色素C(cytochrome C)蛋白水平的变化。结果:FoxM1-shRNA慢病毒感染成功下调口腔鳞癌细胞中FoxM1的表达(P<0.05),阴性对照慢病毒对细胞中FoxM1表达水平没有影响。沉默FoxM1的口腔鳞癌细胞活力降低(P<0.05),细胞克隆形成能力也降低(P<0.05),细胞凋亡率及cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白水平均升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),胞浆中cytochrome C蛋白水平升高(P<0.05),线粒体中cytochrome C蛋白水平降低(P<0.05)。结论:沉默FoxM1可以通过降低口腔鳞癌细胞线粒体膜电位、促进线粒体释放cytochrome C而诱导细胞凋亡。
- 王晓庚刘林左健张非煜李若萱
- 关键词：口腔鳞癌线粒体细胞凋亡
- 静压力作用下人牙周膜细胞差异表达蛋白质的质谱分析被引量：4
- 2009年
- 目的:观察人牙周膜细胞静压力下细胞内蛋白质表达的变化,为进一步探讨静压力与人牙周膜细胞代谢之间的关系奠定基础。方法:采用固相pH梯度/SDS-PAGE双向电泳和质谱分析技术,对人牙周膜细胞静压力干预组和未加力组细胞胞内总蛋白质进行分析,应用Image Master 2D Platinum Software 5.0分析软件,鉴定2组细胞的双向电泳图谱,差异表达的蛋白质点为30个,选择其中5个新出现的差异点进行质谱分析和数据库检索。结果:第3和第5个蛋白质点得到了鉴定,分别为早老蛋白(presenilin 2)和儿茶酚胺-O-甲基转移酶(catechol O-methyltransferase),2种蛋白质在加力组中新表达。结论:早老蛋白与Notch蛋白具有相关性,而Notch通路可能是参与牙周膜细胞生物力学改建的一条信号传导途径;儿茶酚胺-O-甲基转移酶与降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)有关,而CGRP在骨代谢中发挥重要作用。
- 安源远周洪阮禹松饶国洲
- 关键词：人牙周膜细胞静压力质谱分析早老蛋白
- Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系被引量：7
- 2019年
- 目的探究Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的表达与临床病理特征的关系。方法选取行手术切除的口腔癌组织60例作为研究组;另选取癌旁正常口腔组织60例作为对照组。采用免疫组织化学染色检测两组Sp1和miR-92b在组织中的表达差异,并比较不同淋巴结转移情况、分化程度及临床分期组织Sp1和miR-92b表达水平;采用Logistic回归分析口腔癌组织中Sp1和miR-92b表达水平与临床病理特征的关系。结果 Sp1和miR-92b在研究组中的阳性表达率分别为80. 00%(48/60)、73. 33%(44/60)明显高于对照组中的阳性表达率分别为8. 33%(5/60)、11. 67%(7/60),差异有统计学意义(P <0. 05);口腔癌组织中肿瘤分化类型中~高分化与低~未分化Sp1和miR-92b表达均无统计学意义(P> 0. 05);有36例出现淋巴结转移,其中91. 67%Sp1表达阳性,86. 11%miR-92b表达阳性。40例临床分期Ⅲ+Ⅳ期,其中90. 00%Sp1表达阳性,85. 00%miR-92b表达阳性,差异具有统计学意义(P <0. 05);采用Logistic回归分析口腔癌组织中Sp1和miR-92b表达差异与临床病理特征淋巴结转移及临床分期密切相关(P <0. 05)。结论 Sp1和miR-92b在口腔癌组织中的阳性表达率高,其表达水平与肿瘤分期及淋巴结转移密切相关,检测Sp1和miR-92b对口腔癌预后的评估具有重要意义。
- 王晓庚刘林左健张非煜李若萱
- 关键词：SP1口腔癌临床病理特征
- 不同浓度破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子体外诱导大鼠破骨样细胞形成的研究被引量：8
- 2008年
- 目的探讨破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子在大鼠破骨样细胞形成、分化中的作用,为进一步研究正畸牙齿移动的生物力学机制奠定基础。方法应用不同浓度的破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子对提取的SD大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养,分别于培养1、3、5、7 d利用TRAP染色、骨吸收陷窝检测等对单核及多核破骨样细胞的生成进行鉴定,对TRAP(+)的细胞进行计数和统计学分析。结果巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子对TRAP(+)的单核及多核破骨样细胞的诱导分化作用与时间有关:第3 d时逐渐增多,以第5 d和第7 d为最多;缺乏巨噬细胞集落刺激因子时,骨髓单个核细胞不能有效地分化为TRAP(+)的细胞;在破骨细胞分化因子浓度一定的条件下(50 ng/ml),TRAP(+)的细胞数与巨噬细胞集落刺激因子的浓度有关,当其浓度超过30 ng/ml时,TRAP(+)细胞数不再显著增加,曲线趋于平缓;当巨噬细胞集落刺激因子浓度一定的条件(50 ng/ml)下,TRAP(+)的细胞数与破骨细胞分化因子的浓度无关。结论以巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子作为诱导因子,对大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养,可获得TRAP(+)吸收陷窝(+)的破骨样细胞,且巨噬细胞集落刺激因子30 ng/ml、破骨细胞分化因子50 ng/ml时具有最强的生物学效应。
- 王晓庚刘文佳周洪李昂
- 关键词：破骨样细胞体外培养破骨细胞分化因子巨噬细胞集落刺激因子
- 体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的研究被引量：2
- 2007年
- 目的建立人破骨样细胞体外培养的方法,探讨1α,25-(OH)2D3、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、前列腺素E2(PGE2)等骨吸收刺激因子对破骨细胞分化、增殖和功能的影响,为进一步研究正畸牙齿移动的生物力学机制奠定基础。方法将脐血单核细胞接种于预置盖玻片和骨片的24孔培养板中,实验组分别加入诱导因子1α,25-(OH)2D3、M-CSF、PGE2,对照组不加,每3 d换液一次,培养7 d。采用倒置相差显微镜、TRAP染色等方法观察破骨样细胞的形成情况。结果第3天实验组单核细胞出现融合趋势,第7天TRAP染色可见阳性的多核破骨样细胞,但尚未形成骨吸收陷窝,以1α,25-(OH)2D3组破骨样细胞形成数量最多。结论脐血单核细胞经1α,25-(OH)2D3、M-CSF、PGE2体外诱导培养后可分化为TRAP(+)多核的破骨样细胞,且10-8mol/L的1α,25-(OH)2D3具有最强的生物学效应。
- 刘文佳周洪王晓荣
- 关键词：脐血单核细胞破骨样细胞M-CSFPGE2
- 持续静压力对人牙周膜成纤维细胞RANKLmRNA分泌活性的影响
- 2009年
- 目的:研究持续静压力(continuously compressive pressure,CCP)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,HPDLs)核因子受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)分泌活性的影响,初步探讨其在正畸性骨改建中的作用机制。方法:用组织块酶消化法培养获得人牙周膜成纤维细胞。建立空气静压力加载模型,分别对细胞加载0、50、100、150、200持续静压力0、0.5、1、1.5、2、4、6、12h,利用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reation,RT-PCR)检测RANKLmRNA分泌活性的变化。结果:牙周膜细胞在持续静压力作用下RANKLmRNA表达增强,100Kpa加压1.5h时,RANKLmRNA的表达达峰值。结论:持续静压力可上调人牙周膜成纤维细胞RANKLmRNA的表达。
- 吴承琼周洪王晓荣
- 关键词：牙周膜细胞静压力逆转录聚合酶链反应
- 压力与牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究持续静压力和人牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的影响,初步探讨静压力和牙周膜细胞在正畸性骨改建中的作用机制。方法密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞。用组织块酶消化法培养获得牙周膜细胞。建立transwell共培养系统,下层接种脐血单个核细胞,上层接种牙周膜细胞。A组为单核细胞与牙周膜细胞共培养加力;B组为单核细胞培养加力,另设不加力对照组A’、B’组。采用倒置相差显微镜观察及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞的形成及功能。结果A组下层细胞在加力后第2天出现细胞融合现象,3 d时可见明显的多核破骨样细胞,TRAP染色阳性,骨磨片染色可见典型的骨吸收陷窝。其他组仅有极少量多核细胞形成,未见骨吸收陷窝。结论静压力作用下,牙周膜细胞可以刺激脐血单核细胞分化为破骨样细胞。
- 吴承琼周洪王晓荣
- 关键词：脐血单核细胞牙周膜细胞破骨样细胞
- 血清中IL-8、Smad4水平与口腔癌患者预后转归的关系被引量：5
- 2019年
- 目的探讨口腔癌患者血清中IL-8、Smad4水平与预后转归的关系。方法选取口腔癌患者90例作为研究对象;均采用免疫组织化学染色法检测癌组织中Smad4表达情况,采用酶联免疫吸附法检测检测血清中IL-8水平。结果将口腔癌患者根据疗效分为进展(PD)组、稳定(SD)组、部分缓解(PR)组、完全缓解(CR)组4个组,PD组血清中IL-8水平及Smad4蛋白阳性率均明显高于其他三组(P<0.05);淋巴结转移患者IL-8和Smad4表达水平明显高于非淋巴结转移患者,临床Ⅲ期、Ⅳ期患者中IL-8和Smad4表达量显著高于其在临床Ⅰ、Ⅱ期中的表达(P<0.05);采用Logistic回归分析口腔癌患者血清中IL-8、Smad4水平与口腔癌患者预后转归密切相关,是口腔癌患者转移或复发的独立危险因素。结论口腔癌患者血清中IL-8高水平表达和Smad4阳性表达与口腔癌患者术后疗效差、预后差密切相关,是预后转归差的重要危险因素。
- 王晓庚刘林左健张非煜李若萱
- 关键词：口腔癌IL-8SMAD4预后转归
