国家自然科学基金(30671747)
- 作品数：17 被引量：37H指数：4
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- 磷脂酰肌醇-3激酶在石英诱导的DNA双链断裂修复中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）在石英致人胚肺成纤维细胞（HELF）DNA双链断裂修复中的作用.方法 用200μg/ml的石英刺激HELF和用显性失活突变体抑制P13K功能的HELF（DN-Δp85）不同时间.免疫印迹法检测磷酸化H2AX（γH2AX）的水平以及DNA依赖性蛋白激酶（DNA-dependent protein kinase,DNA-PK）的组成成分Ku70、Ku8和DNA-PKcs的蛋白水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.中性彗星试验检测DNA双链断裂损伤,用彗尾DNA百分含量值观察DNA双链断裂损伤程度变化,并计算DNA修复能力.结果 γH2AX的水平在石英刺激3 h明显增高,12 h达峰值,24 h下降.与HELF相比,石英诱导的DN-Δp85细胞γH2AX水平增高受到抑制.石英刺激HELF和DN-ΔP85细胞12 h组Ku70、Ku80和DNA-PKcs的蛋白水平（0.58±0.09、0.95±0.21、0.55±0.06,0.37±0.14、0.55±0.17、0.52±0.07）均高于相应的无石英刺激组（0.26±0.10、0.69±0.26、0.43±0.11,0.11±0.07、0.27±0.14、0.39±0.07）,差异有统计学意义（P〈0.05）.与石英刺激HELF 12 h组比较,石英刺激DN-ΔP85 12 h组的Ku70、Ku80蛋白水平增高受到抑制,差异均有统计学意义（P〈0.05）.石英刺激的HELF12 h组和DN-Δp85 12h组的彗尾DNA百分含量分别为9.78±1.15和11.79±4.90,明显高于同细胞系的无石英刺激组（2.40±0.69,3.31±1.35）,差异有统计学意义（P〈0.05）;与石英刺激HELF 12 h组相比,石英刺激HELF细胞24 h组彗尾DNA百分含量明显降低（4.19±0.47）,差异有统计学意义（P〈0.05）.石英刺激DN-Δp85 24 h组的彗尾DNA百分含量为（7.58±4.32）,明显高于无石英刺激DN-Δp85组和石英刺激HELF 24 h组,差异有统计学意义（P〈0.05）.HELF的DNA修复能力为75.74%,DN-Δp85的DNA修复能力为49.64%.结论 石英可诱导DNA双链断裂损伤,PI3K与DNA损伤修复有关,通过调节Ku70和Ku80的水平,可促进石英诱导的DNA双链断裂损伤的修复.
- 刘海峰张凤梅刘秉慈贾效伟叶萌
- 关键词：石英DNA损伤彗星试验DNA修复
- 粉尘致病性科研成果急需与粉尘防治相结合被引量：7
- 2008年
- 生产性粉尘是严重的职业有害因素，矽尘与石棉尘是两种主要的、危害性很强的生产性粉尘。结晶型二氧化硅不仅可导致肺纤维化，还可导致癌症。中国是世界上接触粉尘和患尘肺病人数最多的国家。至2006年底，中国尘肺病累计病例数为616442例，死亡146195例。在过去5年（2001至2006年）中，每年新病例数为8000～10000例，其中主要为矽肺和煤工尘肺。中国政府高度重视粉尘控制、粉尘毒性及粉尘致病机制的研究，并在这些方面取得了巨大成绩。
- 刘秉慈陈卫红William E. Wallace
- 关键词：粉尘防治生产性粉尘职业有害因素尘肺病人
- ERK和JNK/AP-1通路参与石英诱导的细胞周期改变被引量：8
- 2008年
- 目的探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞（human embryo lung fibroblasts，HELF）中转录因子活化蛋白-1（activator protein-1，AP-1）的活性改变，以及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）／AP-1通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用。方法用200μg／ml石英处理HELF细胞；用免疫荧光法检测细胞外调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated protein kinase，ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）蛋白磷酸化水平及细胞分布；运用AP-1荧光素酶报告基因技术检测AP-1荧光素酶活力；用MAPK显性失活突变体（dominant negative mutant,DN）（DNERK2、DN-JNK1和DN-p38）证明通路的上下游关系；用流式细胞术检测细胞周期变化。结果用200μg／ml石英分别处理转染AP-1报告基因的细胞（HELF-AP-1）6、12、24h，结果显示，AP-1活性随着时间变化而发生变化，6h活性增强，12h活性达峰值，24h活性略有降低；用200μg／ml石英分别处理细胞1和2h，结果显示，ERK和JNK在石英刺激1h后，磷酸化水平升高，主要集中于胞浆，2h后磷酸化水平进一步升高，并主要集中于胞核；200μg／ml石英处理细胞24h，G1期细胞所占比例从（63．80±9．57）％下降到（32.23±7.22）％，S期细胞所占比例从（35．17±10．33）％升高到（66．00±8．07）％；AP-1化学抑制剂姜黄素（20μmol／L）可明显减弱石英引起的G1期细胞比例减少和S期细胞比例增加；DN-ERK和DN-JNK的过表达均可明显降低石英诱导的AP-1活性增强，DN-p38的过表达对石英诱导的AP-1活性增强无明显影响。结论200μg／ml石英可诱导AP-1活性增强，并通过ERK、JNK／AP-1通路诱导细胞周期改变。
- 贾效伟刘秉慈史香林高艾叶萌张凤梅刘海峰焦石
- 关键词：石英细胞周期信号传递转录因子AP-1
- Ku80／p53通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞（human embryo lung fibroblasts，HELF）中Ku80蛋白表达的变化及Ku80／p53通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用。方法RNAi技术抑制Ku80蛋白表达，流式细胞技术检测细胞周期，免疫印迹技术检测Ku80、p53、p21蛋白的表达及p53-ser15磷酸化水平，并用Image—Proplus 6．0软件对条带光强度进行半定量分析。结果Ku80蛋白表达与石英刺激呈剂量-反应和时间-反应关系；石英刺激阴性对照H—NC细胞，G1期细胞所占比例从89．28％±2．19％下降到68．93％＋3．79％；抑制Ku80蛋白表达的HELF细胞（H—Ku80）的G。期细胞所占比例进一步减少，从85．16％±3．73％下降到59．92％±3．31％，差异均有统计学意义（P〈0．05）；抑制Ku80蛋白表达后，石英引起的p53、p21蛋白及p53-ser15磷酸化水平增高受抑制。结论Ku80对p53、p21蛋白表达及p53-ser15磷酸化水平起调节作用，Ku80／p53通路可能参与了石英诱导的细胞周期改变。
- 张凤梅刘秉慈叶萌贾效伟刘海峰
- 关键词：石英细胞周期信号转导P53
- DNA依赖性蛋白激酶在石英诱导的细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白依赖激酶2蛋白表达及细胞周期改变中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的 探讨DNA依赖性蛋白激酶（DNA dependent protein kinase,DNA-PK）在石英诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）中细胞周期蛋白E（CyclinE）、细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）蛋白表达及细胞周期改变中的作用.方法 200μg/ml石英处理阴性对照细胞（H-NC）及采用RNAi技术分别抑制DNA-PKcs和Ku80蛋白表达的细胞系（H-PKcs和H-Ku80）0、3、6、12、24 h,采用流式细胞术检测石英刺激24 h不同细胞系的细胞周期变化情况,免疫印迹（Western blot）技术检测不同细胞系各时间点CyclinE、CDK2蛋白的表达水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.结果 石英刺激H-NC,G1期细胞所占比例从83.53%±2.24%下降到69.11%±3.12%;石英刺激H-Ku80,石英诱导的G1期细胞的比例进一步减少,从85.16%±3.73%下降到59.92%±3.31%;石英刺激H-PKcs,G1期细胞比例也显示进一步减少,从75.06%±2.23%下降到58.32%±1.35%,差异均有统计学意义（P＜0.05）.石英刺激H-NC,CyclinE和CDK2蛋白表达随时间延长有增高趋势,并在12 h达峰值;石英刺激H-Ku80,H-PKcs和CyclinE蛋白表达水平在各时间点均低于H-NC,差异有统计学意义（P＜0.05）,CDK2蛋白的表达水平变化不明显.结论 DNA-PK参与石英诱导的细胞周期改变,对CyclinE的表达呈正性调节作用.
- 刘海峰张凤梅刘秉慈贾效伟叶萌
- 关键词：石英细胞周期细胞周期蛋白E
- c-Jun在肿瘤发生中作用的研究进展被引量：4
- 2008年
- c-Jun是核转录激活蛋白1（activation protein，AP-1）家族的组成成员。AP-1蛋白家族主要包括Jun（c-Jun、Jun-B和Jun-D）和Fos（c-Fos、FosB、Fra-1和Fra-2）2个蛋白家族。c-Jun不仅和Jun或Fos家族成员结合，以AP-1的形式发挥生物学功能，也可以单独作为转录因子参与基因转录调控。各种刺激如生长信号、紫外线或环境污染物可以诱导c-Jun活化，活化的c-Jun通过调节靶基因转录，参与增殖、分化和细胞凋亡等多种生理过程。c-Jun功能异常与许多疾病如恶性肿瘤、脑血管病等的发生密切相关。我们主要从增殖、分化、凋亡以及细胞周期等多个方面对c-Jun在肿瘤发生中的作用进行综述。
- 焦石刘秉慈刘海峰
- 关键词：C-JUN肿瘤发生基因转录调控PROTEIN家族成员FOSB
- 石英对人胚肺成纤维细胞DNA损伤作用被引量：3
- 2011年
- 目的探讨石英粉尘对DNA及染色体的损伤作用,为尘肺病防治提供理论依据。方法标准α石英刺激人胚肺成纤维细胞(HELF),采用免疫荧光技术检测H2AX磷酸化(γH2AX)水平以及分析中性彗星实验Olive矩,作为DNA双链断裂(DSBs)损伤程度的指标,微核实验观察染色体损伤情况。结果依次用0、100、200、400μg/mL石英刺激HELF细胞,γH2AX水平呈增高趋势,半定量结果分别为(521.9±233.1)、(823.3±201.5)、(1 375.5±311.5)、(1 545.6±145.7);Olive矩亦呈增高趋势,分别为(1.74±0.24)%、(2.67±0.36)%、(9.23±0.72)%、(14.16±1.05)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。相同剂量的石英刺激下,微核率增加,但差异无统计学意义。结论石英粉尘可引起DNA双链断裂,且存在剂量-效应关系。
- 刘海峰李晖张庆娟刘秉慈高学杰刘晓霞
- 关键词：尘肺病石英微核
- p53表达在石英诱导的细胞周期改变及DNA损伤修复中的作用被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨p53表达在石英致人胚肺成纤维细胞（HELF）细胞周期改变及DNA双链断裂（DNA double strand breaks,DSBs）修复中的作用.方法 3种方式分组处理细胞：（1）不同浓度（0、25、50、100、200、300、400μg/ml）的石英刺激HELF细胞12 h;（2）200 μg/ml石英刺激HELF细胞O、1、2,6、12、24 h;（3）200μg/ml石英刺激H-CMV和H-p53细胞O、12、24 h.用中性彗星试验检测石英所致的DSBs损伤强度,并计算DNA修复能力（DNA repair compentence,DRC）,用免疫印迹法检测蛋白表达和磷酸化水平,用流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 （1）200μg/ml的石英作用HELF细胞不同时间,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平随着作用时间的延长逐渐升高,12 h达峰值,24 h较12 h略有降低;不同浓度的石英作用HELF细胞12 h,随着石英浓度的增加,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平逐渐增强,呈现剂量-反应关系.（2）石英作用于p53 siRNA的阴性对照细胞H-CMV,DRC为57.19%：石英作用沉默p53表达的H-p53细胞后,DSBs的修复能力增强,DRC为87.68%.（3）石英作用p53siRNA的阴性对照细胞24 h后,S期细胞比例由（24.3±3.8）%增加到（31.8±1.1）%,差异有统计学意义（P〈0.05）;沉默p53表达后,石英诱导的HELF细胞S期细胞比例[（41.4±0.6）%]与同期对照组[（25.4±1.9）%]相比有明显增加.差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 石英可诱导p53表达及磷酸化水平的增加,p53表达上调可抑制石英所致S期细胞百分比的增加及石英所致DNA双链断裂的修复.
- 张凤梅刘秉慈刘海峰贾效伟叶萌
- 关键词：石英DNA损伤彗星试验DNA修复
- 铜蓝蛋白/PTEN 在石英致组蛋白修饰改变中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨铜蓝蛋白(Cp)在石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)组蛋白修饰改变中的作用以及人第十号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)在其中的影响。方法不同浓度的石英(50、100、200μg/ml)和不同浓度的Cp(10、20、30μg/ml)作用HELF细胞24 h,用蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测蛋白质赖氨酸乙酰化(acety-lys)水平以及组蛋白H2B、H3、H4乙酰化和H3甲基化水平。200μg/ml石英作用于HELF细胞和转染PTEN shRNA的HELF细胞(PT)1 h后,加入30μg/ml Cp作用24 h,用Western blot检测acety-lys水平,组蛋白H2B、H3、H4乙酰化和H3甲基化水平。结果石英暴露可诱导蛋白质acety-lys水平的增高,组蛋白H2B(lys5/12)、H3(lys9/14)、H4(lys12)乙酰化水平增加,组蛋白H3的2位精氨酸的甲基化水平降低。Cp可以逆转石英暴露所致的蛋白质acety-lys水平的增加,组蛋白H3、H4赖氨酸乙酰化水平的增加和组蛋白H3甲基化水平的减少。抑制PTEN的水平后,观察不到Cp对上述现象的逆转。结论 Cp可以逆转石英暴露诱导的组蛋白乙酰化和甲基化改变,PTEN参与了Cp对石英诱导的组蛋白修饰作用的改变。
- 张夏男李跃纲贾效伟刘秉慈叶萌
- 关键词：石英PTEN组蛋白修饰铜蓝蛋白
- Ku蛋白与DNA双链断裂修复关系的研究进展
- 2010年
- Ku蛋白（简称Ku）是Ku70与Ku80蛋白通过非共价键紧密结合形成的异二聚体结构，是存在于细胞中的DNA末端结合蛋白。Ku是一种多功能的蛋白，在许多重要的细胞生命过程中起着直接或间接的作用，如DNA损伤修复、端粒稳定、免疫球蛋白和T细胞受体V（D）J重排、细胞凋亡等。内外环境刺激可引起机体DNA损伤，DNA双链断裂（DNAdouble—strandbreaks，DSBs）是DNA损伤中最严重的一种。
- 刘海峰刘秉慈
- 关键词：DNA双链断裂KU蛋白DNA损伤修复T细胞受体异二聚体KU80
