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宁夏地区乙肝病毒感染者HBV基因分型与临床意义被引量：10: 2014年; 目的研究宁夏地区乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者的HBV基因型的分布情况,探讨其与HBV感染者的性别、年龄、肝功能、HBV-DNA载量及血清标记物水平的关系。方法应用基因型特异性多对引物巢式PCR法对175例HBV感染者的血清标本进行HBV基因型检测,并针对不同的基因型进行性别、年龄、肝功能、HBV-DNA载量及血清标记物水平的相关性分析。结果宁夏地区175例HBV感染者的血清标本中(汉族136例,回族39例)有12例(6.9%)未检测出基因型。在已检测出基因型的163例样本中,B基因型84例(48%),C基因型62例(35.4%),B+C混合基因型17例(9.7%)。B基因型在宁夏地区HBV感染者中占优势。HBV基因型与HBV感染者的ALT水平有关联(P<0.05),与年龄、性别、血清标记物水平等指标无关联性(P>0.05),C基因型在肝硬化和肝癌中所占的比例较B型和B+C型差异有统计学意义(P均<0.05)。结论宁夏地区HBV感染者的基因型包括B型、C型及B+C混合基因型,其中以B基因型为主,其次为C基因型。HBV基因型与ALT水平有关联,与本研究中其他指标无相关性,C基因型较B型和B+C型在肝硬化和原发性肝癌中所占比例增高。; 孙珍赵志军师志云赵玥赵洁魏军; 关键词：HBV感染者基因型巢式PCR

小鼠CD200基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1: 2013年; 目的：构建携带小鼠CD200基因的重组腺病毒载体,并鉴定其在小鼠胰腺内皮细胞（mile sven 1,MS1）中mCD200基因的表达情况。方法：mCD200基因亚克隆至腺病毒穿梭质粒pYr-adshuttle-4,获得重组质粒pYr-ads-4-mCD200。从该重组质粒上利用LR（attL×attR）特异性同源重组的方法,将mCD200表达框构建至腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST上,获得的重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd-4-mCD200,并用酶切和PCR等鉴定。采用TCID 50（tissue cell infectious dosage 50,TCID50）法测定重组腺病毒滴度。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,并感染小鼠内皮细胞MS1,通过荧光显微镜、real-time PCR检测MS1中小鼠CD200基因的表达。结果：PCR鉴定重组腺病毒证实重组腺病毒rAd-4-mCD200构建成功;扩增后检测病毒滴度约为109~1010pfu/ml;荧光显微镜及real-time PCR检测发现该重组腺病毒能在MS1细胞中高效的表达。结论：构建的重组腺病毒rAd-4-mCD200在MS1细胞中成功表达mCD200基因,为下一步开展关于CD200基因免疫抑制调节等相关研究奠定了基础。; 王琼陈冬梅王立斌魏军李玉奎; 关键词：腺病毒载体 CD200 免疫调节

人胎盘间充质干细胞的分离与鉴定被引量：4: 2010年; 目的从生产后胎盘中提取胎盘间充质干细胞,并对其进行干细胞特性鉴定。方法采用酶直接消化法从胎盘组织中提取间充质干细胞,并利用流式细胞术及染色体核型分析技术鉴定其干细胞特性。结果成功获得胎盘间充质干细胞,培养48h后即可见贴壁细胞,形态为成纤维细胞样,漩涡状生长,传代过程中细胞形态和特性未见明显变化,经细胞表面分子及染色体核型分析,证明其具备干细胞特性。结论用酶直接消化法所获得的胎盘间充质干细胞具备干细胞特性,可以作为临床干细胞治疗的种子细胞。; 王立斌刘婷马晓娜李玉奎魏军; 关键词：胎盘间充质干细胞流式细胞术

体外分步诱导人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞被引量：1: 2011年; 目的建立体外诱导人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞的分步诱导分化体系。方法分离纯化人母体来源胎盘间充质细胞,体外扩增后进行分步诱导分化,收获的胰岛素分泌细胞分别行免疫细胞化学和ELISA检测,并通过葡萄糖刺激的胰岛素释放试验(GSIS)评价其体外功能。结果分离纯化的人母体来源胎盘间充质细胞经培养及六步诱导分化后最终可形成胰岛素分泌细胞。免疫细胞化学检测诱导后细胞GLP-1、PDX-1和C-Peptide染色为阳性,ELISA结果显示该诱导细胞培养上清中胰岛素有较高的表达。诱导后的胰岛素分泌细胞在低糖和高糖刺激下的胰岛素释放量分别为(20.42±1.58)μIU/mL和(65.1±7.43)μI-U/mL(P<0.01)。结论通过建立体外人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞的分步诱导分化体系,获得具有一定胰岛素分泌能力的细胞,为胰岛移植的细胞来源提供了更有效的新途径。; 刘婷王立斌马晓娜朱永朝马丽君范恒李玉奎魏军; 关键词：胰岛素分泌细胞

人胎盘来源的两种间充质干细胞IL6、IL8、IL10和HGF表达水平的比较研究被引量：3: 2013年; 目的比较人胎盘母体和胎儿来源间充质干细胞(hmPMSCs/hfPMSCs)IL6、IL8、IL10和HGF表达水平的差异。方法采用酶消化法分离人胎盘母体和胎儿侧间充质干细胞(MSCs),并利用流式细胞仪和D2S1399、D10S2325、D18S535和GATA198B05四个STR基因座对细胞属性进行鉴定分析;通过q-PCR和ELISA分别测定hmPMSCs和hfPMSCs细胞培养上清液中IL6、IL8、IL10和HGF在基因及蛋白水平上的表达。结果所分离两种来源细胞表达MSCs表面标志分子CD73、CD90和CD105,不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR,母体来源细胞中上述四个STR位点的等位基因与母体亲本保持一致性,而胎儿侧来源细胞分别具有来自亲本双方的等位基因。hfPMSCs IL8、IL10和HGF mRNA的表达水平显著高于hmPMSC(sP<0.01),而IL6的表达水平差异无显著性。ELISA结果表明,hfPMSCs IL6、IL8和HGF蛋白表达水平显著高于hmPMSCs(P<0.01),IL10的分泌量两者无差异。结论 hmPMSCs和hfPMSCs中IL6、IL8和HGF三种细胞因子的分泌量差异存在显著性,其中hfPMSCs HGF的分泌量远高于hmPMSCs,提示hfPMSCs在免疫抑制和组织修复中可能更具临床应用潜力。; 朱永朝王立斌马海滨刘婷李玉奎魏军; 关键词：胎盘间充质干细胞

回族地区慢性乙型肝炎患者HBV-DNA与ALT及血清标志物的关系被引量：1: 2013年; 目的探讨宁夏地区283例慢性乙型肝炎(CHB)患者的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乙型肝炎病毒(HBV)-DNA载量与血清学标志物浓度之间的关联性。方法应用化学发光微粒子免疫分析法定量检测HBV血清学标志物和荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA载量。结果乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性患者较阴性患者的HBV-DNA载量较高、较乙型肝炎e抗体(抗-HBe)水平较低(P<0.01);女性的HBeAg和抗-HBe水平均较男性高(P<0.01);30～50岁组CHB患者的HBV-DNA、HBeAg、抗-HBe与小于30岁组、>50岁组比较差异有统计学意义(P<0.01);CHB患者中HBV-DNA载量与HBeAg呈正相关(r=0.451,P<0.01),与抗-HBe呈正相关(r=0.434,P<0.01);ALT与HBsAg呈正相关(r=0.131,P<0.05)。结论宁夏地区283例CHB的HBV-DNA载量、ALT与血清学标志物浓度有一定相关性,与国内外的研究结果相一致。; 孙珍赵志军贾伟师志云赵玥赵洁赵倩颖魏军; 关键词：HBV-DNA载量丙氨酸氨基转移酶

下一代测序技术在分子诊断中的应用被引量：9: 2013年; DNA测序是破译人类疾病的一种强大技术,尤其在癌症方面。飞速发展的下一代测序(next-generation sequencing,NGS)极大降低了测序成本,并且实现了高通量,这使我们可以获得整个基因组的序列,以及那些临床上确诊病人的全部基因组信息。然而下一代测序技术带来诸多益处的同时也带来了挑战,那就是怎样使这个技术在临床诊断中成为常规手段。本文就目前NGS的几大技术平台原理,在临床诊断中的应用,以及目前面临的挑战等进行综述。; 魏军赵志军; 关键词：下一代测序基因组学分子诊断

干扰素-γ对人胎盘胎儿来源间充质干细胞免疫调节功能的影响被引量：8: 2012年; 目的:从人胎盘组织中分离胎儿来源间充质干细胞(MSCs),并探讨干扰素-γ(IFN-γ)对人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hfPMSCs)免疫调节功能的影响。方法:采用酶消化法分离人胎盘胎儿侧MSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面分子CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45和HLA-DR,并利用D2S1399、D10S2325、D18S535和GATA198B05四个STR基因座对细胞属性进行鉴定分析;10 ng/mL IFN-γ诱导处理后,利用定量PCR(q-PCR)和ELISA分别测定对照组hfPM-SCs和IFN-γ处理后hfPMSCs IL-6、IL-8、IL-10和HGF基因及蛋白表达水平。结果:所分离细胞表达CD73、CD90和CD105,不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR,并分别具有来自亲本双方上述四个STR位点的等位基因。IFN-γ处理后,hfPMSCs IL-6 mRNA的表达水平显著提高(P<0.05),而IL-10和HGF的表达水平被下调(P<0.05)。ELISA结果表明IL-6蛋白表达水平显著升高,IL-8、IL-10和肝细胞生长因子的表达量降低(P<0.05)。结论:本研究成功的从人胎盘组织中分离和培养出hfPMSCs,且IFN-γ对其免疫抑制功能具有负调控效应。; 朱永朝马海滨刘婷王立斌李玉奎魏军; 关键词：干扰素-Γ 免疫调节

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国家自然科学基金(30960176)

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