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湖南省教育厅科研基金(08B067)
作品数:
1
被引量:3
H指数:1
相关作者:
邱宏
刘志杰
余敏君
张艳
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2008
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幽门螺杆菌Lpp20核酸疫苗的构建及其免疫活性的初步研究
被引量:3
2008年
目的构建幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Lpp20,并在HeLa细胞中进行表达。通过肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平。方法用PCR法扩增Lpp20全基因,再将Lpp20基因克隆至pcDNA3.1(+)真核细胞表达载体构建pcDNA3.1(+)/Lpp20重组体,观察其在HeLa细胞中的表达。将核酸疫苗pcDNA3.1(+)/Lpp20、对照空质粒pcDNA3.1(+)及PBS分组通过肌肉注射免疫6周龄C57BL/6小鼠,隔2周免疫一次,共免疫4次。间接ELISA法测定小鼠血清中抗Lpp20IgG抗体水平,双抗体夹心ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-1水平,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应。通过PCR法检测小鼠肌细胞中Lpp20基因的存在。结果小鼠接种pcDNA3.1(+)/Lpp20核酸疫苗后能产生特异性IgG抗体,6周后ELISA测定血清抗体A450值为0.74,效价为1:1024。核酸疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ含量明显升高[(410.36±56.23)pg/m1],与空质粒组[(25.26±10.85)pg/m1]之间差异有统计学意义(P〈0.01)。脾淋巴细胞增殖反应测定,核酸疫苗组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数(2.37±0.22)明显高于空质粒组(1.53±0.47)和PBS组(1.20±0.13),P〈0.01。PCR检测Lpp20基因可在小鼠肌细胞中存在。结论成功构建了pcDNA3.1(+)/Lpp20核酸疫苗,且其在小鼠体内可诱导较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答。为进一步研究该疫苗的免疫保护作用提供实验依据。
刘志杰
张艳
黎村艳
邱宏
余敏君
关键词:
幽门螺杆菌
LPP20
DNA疫苗
免疫反应性
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