国家自然科学基金(30471761)
- 作品数：19 被引量：86H指数：7
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- 神经干细胞联合氯化锂对急性脊髓损伤修复的试验研究
- 2009年
- 目的:观察神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)移植联合应用氯化锂(lithiumchloride,LiCl)对于大鼠急性脊髓损伤修复效果,并探讨二者相互作用。方法:利用MASCISimpacto(r多中心急性脊髓损伤打击器)制作大鼠脊髓打击伤模型,随机分为NSCs组、NSCs+LiCl组、LiCl组及空白对照组,分期进行BBB后肢运动功能评分及组织学检查,评价及比较各组修复效果。结果:NSCs组与NSCs+LiCl组BBB评分较LiCl组与对照组在2周后各时段差别有意义(P<0.01);NSCs+LiCl组BBB评分在4周后明显高于NSCs组(P<0.01);组织学检查表明NSCs组与NSCs+LiCl组组织学改变与LiCl组与对照组有显著差别,但是NSCs+LiCl组相对于NSCs组可以更明显的促进神经元再生。结论:NSCs联合LiCl具有良好的脊髓损伤修复作用,二者协同作用明显。
- 王璐王吉兴闫慧博李凌霞鲁凯伍
- 关键词：神经干细胞氯化锂脊髓损伤
- 大鼠嗅鞘细胞体外培养及免疫组化研究被引量：8
- 2006年
- 目的:建立体外纯化培养嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)的稳定方法并观察培养嗅鞘细胞(OECs)形态学特征。方法:原代培养成年雄性SD大鼠嗅球的嗅神经层和颗粒层中提取的OECs,利用差速贴壁和阿糖胞苷(Ara-c)抑制法除去混杂的成纤维细胞和星形胶质细胞以获得纯化的OECs。用P75抗体免疫组织化学染色鉴定OECs,计算纯化度。结果:此方法获得的OECs纯度可达93%以上。OECs的外形主要以突起细长的双极和三极为主,或无突起呈“煎蛋样”,随时间延长细胞生长排列呈现一定方向性。结论:此方法稳定易复制,可获得高纯度的OECs。
- 闫慧博江建明王宏余磊邱小忠王晓佳鲁凯伍
- 关键词：嗅鞘细胞细胞培养纯化免疫组化
- 荧光金标记技术在脊髓损伤修复中的应用
- ＜正＞目的:建立人脐血干细胞移植修复脊髓全横断损伤模型,采用荧光金（FG）逆行追踪技术,观察大鼠脊髓全横断损伤修复过程中的组织学变化,及其与大鼠后肢运动功能BBB评分之间的关系。方法:取健康足月产新生儿脐带血,分离、培养...
- 尹文化金大地鲁凯伍闫慧博王璐邓许勇
- 关键词：荧光金脊髓损伤干细胞
- 文献传递
- OECs移植联合IN-1抗体修复急性脊髓损伤的实验研究被引量：7
- 2008年
- 目的:研究嗅鞘细胞移植联合轴突生长抑制蛋白抗体IN-1局部持续注射对大鼠横断性脊髓损伤的修复作用。方法:成年雄性SD大鼠40只,建立胸脊髓全横断损伤模型,随机分成单纯对照组(10只)、嗅鞘细胞移植组(10只)、IN-1抗体微泵注射组(10只)和嗅鞘细胞移植联合IN-1抗体组(10只)。应用NF200免疫组化染色和免疫荧光染色对脊髓损伤区神经纤维再生进行形态学观察。采用BBB评分评估大鼠后肢功能恢复情况。结果:横断损伤共有9只大鼠死亡。术后8周可观察到Hoechet标记的嗅鞘细胞在体内存活并在脊髓内迁移;联合治疗(OECs+IN-1)组和OECs组可见脊髓损伤区杂乱无序的再生轴突,但无连续性神经纤维通过损伤区;IN-1组和对照组脊髓残端萎缩,未见轴突再生。后肢功能运动平均BBB评分:对照组、IN-1抗体组、细胞移植组和联合治疗组分别为7.70±0.24、7.89±0.15、10.50±0.25、11.33±0.24。结论:OECs移植联合IN-1抗体可促进损伤的脊髓神经轴突的存活和再生,较单纯应用OECs或IN-1能更好的促进脊髓损伤修复和大鼠后肢功能恢复。
- 闫慧博鲁凯伍江建明金大地
- 关键词：嗅鞘细胞脊髓损伤
- 氯化锂联合脐血干细胞移植修复大鼠脊髓损伤被引量：8
- 2010年
- 目的观察氯化锂联合脐血干细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤的修复效果。方法成年雌性SD大鼠80只,建立胸9脊髓全横断损伤模型,随机分对照组(A组,n=20)、氯化锂组(B组,n=20)、细胞移植组(C组,n=20)和氯化锂+细胞移植组(D组,n=20)。于术后1d、3d及每周的最后1天,应用BBB评分评价大鼠脊髓功能的恢复情况;8周后取材,通过Brdu细胞核标记观察移植细胞的存活、迁移;通过荧光金逆行追踪,观察脊髓神经纤维的再生与分布。结果 4只大鼠死亡。术后8周可观察到Brdu标记的脐血干细胞在体内存活并在脊髓内迁移;细胞移植组和氯化锂+细胞移植组可见少量连续性神经纤维通过损伤区。荧光金逆行脊髓追踪显示C组和D组可见被荧光金标记的神经锥体细胞穿越损伤区。术后8周A、B、C、D四组后肢功能运动BBB评分分别为4.11±0.14、4.50±0.15、8.31±0.11、11.15±0.18。结论氯化锂能促进人脐血间充质干细胞在损伤区的存活并向神经细胞分化,氯化锂联合脐血干细胞与脊髓去细胞支架移植能够促进细胞移植修复大鼠脊髓损伤的效果。
- 邓许勇周荣平鲁凯伍金大地
- 关键词：脊髓损伤氯化锂脐血干细胞移植
- 甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响被引量：9
- 2007年
- 目的:探讨大剂量甲基强的松龙(MP)对急性脊髓损伤(SCI)大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白表达的影响。方法:将56只成年SD大鼠分为正常对照组(A组,n=8)、急性脊髓损伤组(B组,n=24)和急性脊髓损伤后大剂量MP治疗组(C组,n=24),C组在损伤后早期从尾静脉注射大剂量MP治疗。分别在术后3、7、14d对B、C组大鼠后肢运动功能行BBB评分,再在各时间点处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色观察形态学变化和Nogo-A在脊髓组织中的分布特点;同时应用Western-blot方法测定各组相应时间点Nogo-A表达量,并与A组比较。结果:B、C组大鼠在损伤后各个时间点后肢运动功能均有一定程度的恢复,Nogo-A蛋白在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达,分布于神经细胞的细胞浆和脊髓神经纤维周围呈包裹神经纤维的状态。B、C组各个时间点Nogo-A表达均显著高于A组(P<0.05),7d时最高,14d时的表达量仍高于正常组;C组在各个时间点的表达量显著低于B组,差异有显著性(P<0.05)。结论:大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,早期应用大剂量MP对Nogo-A的表达具有明显的抑制作用。
- 江建明王宏闫慧博鲁凯伍张义生邱小忠
- 关键词：脊髓损伤NOGO-A
- 大鼠脊髓去细胞支架的形态学和体外细胞毒性研究(英文)
- 目的:探讨去除脊髓中的细胞,建立成年大鼠脊髓的化学萃取方法,为脊髓损伤修复提供具有仿生结构的支架。方法:取成年大鼠脊髓4段,用Triton X-100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取后的脊髓行石蜡切片、...
- 尹文化鲁凯伍金大地
- 关键词：脊髓化学萃取形态学
- 文献传递
- 稳定性大鼠脊髓全横断模型的建立被引量：20
- 2007年
- 目的:建立SD大鼠稳定、易复制的脊髓完全横断动物模型,并摸索术后护理方法,探讨性别对动物模型的影响。方法:实验于2005-03/09在南方医科大学临床解剖学研究所和广东省组织构建与检测重点实验室完成。①取40只SD大鼠(雌雄各半),体制量220～250g,按性别分为两组。体积分数为0.15的水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg/kg)大鼠,于T10节段处,用锐利刀片于硬膜外快速切割、完全横断脊髓,切除2mm脊髓节段,医用明胶海绵填充脊髓断端间隙。②术后,大鼠单笼饲养,皮下注射青霉素20万单位,1次/d、5mL生理盐水2次/d,持续1周;每日定时膀胱挤压排尿两三次,给与截瘫护理。③定期观察大鼠后肢运动情况,并进行BBB评分(0￣21分,得分越高后肢运动功能越好),动物存活8周以上。结果:①动物模型脊髓损伤程度完全一致,术后1周内所有大鼠BBB评分皆为0分。②术后8周内大鼠因膀胱破裂死亡5只(雌2雄3),雌、雄大鼠死亡率比较无差异(P>0.05)。③所有大鼠均可观察到不同程度的后肢自发性功能恢复,以第3,4周最为明显,至第8周BBB评分雌性为7.41±2.55,雄性为7.06±3.05。各时间点雌雄比较无差异(P>0.05)。结论:①建立的脊髓完全横断大鼠模型效果稳定,可复制性强,制作简便,护理方法有效。②大鼠在术后死亡率和术后后肢功能自发性恢复方面无性别上的差异。
- 闫慧博金大地鲁凯伍江建明王宏
- 关键词：脊髓损伤脊髓横断BBB评分
- 嗅鞘细胞体外诱导神经干细胞分化的实验研究
- 2009年
- 目的:研究嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)体外诱导神经干细胞(neuron stell cells,NSCs)分化的作用。方法:分别从3月龄SD大鼠的嗅球和新生SD大鼠的海马中分离OECs及NSCs,进行体外分离、培养及免疫荧光鉴定。构建OECs与NSCs共培养体系,分为3组,纯化培养的OECs+NSCs组,未纯化培养的OECs+NSCs组,单纯NSCs组。共培养后4、8、12d行神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光鉴定,统计NSCs分化为神经元的百分率。结果:经P75和S100双重免疫荧光鉴定所培养的细胞为OECs,经巢蛋白抗体(Nestin)免疫荧光鉴定所培养的细胞为NSCs。荧光显微镜观察可见被特异性烯醇化酶-异硫氰酸荧光素(NSE-FITC)荧光标记的神经元大多为多极神经元,少部分为双极神经元或假单极神经元,带有较长的轴突。在各时间点,共培养组中可见到多个神经元聚集生长,神经元数目明显多于单纯NSCs培养组,而共培养组之间无明显差别。共培养后12d,共培养组中NSCs分化为神经元的百分率大约为23%,而单纯NSCs培养组约为4%。在各时间点,共培养组神经元的转化率与单纯NSCs培养组神经元的转化率之间有显著性差异(P<0.001),而共培养组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:OECs在体外能够有效诱导NSCs向神经元转化。
- 闫慧博金大地张忠民鲁凯伍江建明
- 关键词：嗅鞘细胞神经干细胞共培养诱导分化
- 胶质细胞源性神经营养因子慢病毒载体体外转染嗅鞘细胞MOI值的研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）慢病毒载体（lentivirus vector）体外转染嗅鞘细胞（OECs）并能稳定表达目的 蛋白的最佳感染复数（MOI）.方法 构建GDNF-lentivirus,体外转染293T细胞,获得高滴度的慢病毒浓缩液,测定病毒滴度达2×108 TU/ml.不同MOI的情况下,GDNF-lentivirus体外转染OECs,Western blot检测GDNF的表达.结果 相差显微镜明视野下动态观察转染后的OECs生长状态良好,荧光显微镜下见大量绿色荧光蛋白（GFP）标记的转染成功的OECs.MOI=100时,OECs的转染率最高,约为75%,MOI=50时约为68%,MOI=10和MOI=1时分别为25%和13%,阴性对照组未见有绿色荧光表达.转染后第5天,收集OECs进行Western blot检测,MOI=100和MOI=50时GDNF表达最强,两者差异无统计学意义（P＞0.05）,MOI=10表达较少,而MOI=1表达最少,对照组无GDNF表达.结论 GDNF-lentivirus在体外既能高效转染OECs又不影响细胞活性,且转染后的OECs可以长期稳定表达GDNF的适宜MOI为50～100之间.
- 闫慧博鲁凯伍张忠民王晓佳金大地
- 关键词：GDNF慢病毒载体嗅鞘细胞
