重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ110328)
- 作品数：2 被引量：16H指数：1
- 相关作者：陈地龙游智梅李丹阳刘泽洪夏菁更多>>
- 相关机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市教育委员会科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人参总皂苷TSPG联合EPO对白血病细胞KG1-α增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨人参总皂苷TSPG单独或联合人促红细胞生成素(EPO)对人白血病细胞KG1-α增殖的影响及机制探讨。方法体外培养KG1-α细胞,选取处于对数生长期的细胞用于实验。空白对照组予以常规培养;人参总皂苷TSPG组分别加入25、50、100、200、400 mg/L TSPG;人参总皂苷+EPO组加入上述等量TSPG,同时加入0.5 U/L EPO,并设置EPO对照组。培养3、7、14 d后用CCK-8法检测TSPG单独或联合EPO对KG1-α细胞增殖的影响;运用Real-time PCR技术检测EPOR、STAT5、Jak2、AKT等EPO/EPOR通路相关基因的表达。用Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、P53、P16等蛋白的表达,EPOR蛋白的表达及其活性。结果人参总皂苷TSPG在体外能明显抑制KG1-α细胞的增殖,100μmol/L为最适作用浓度,7 d为最适作用时间,如果在EPO存在的条件下,其最适浓度则降低到75 mg/L;与对照组相比,在EPO存在的条件下人参总皂苷TSPG诱导可明显使细胞阻滞于G0/G1期,若不使用EPO则TSPG对细胞周期无影响;Real-time PCR检测结果显示TSPG诱导组KG1-α细胞内EPOR、Jak2、STAT5等由EPOR介导的JAK-STAT通路相关基因的表达均随TSPG浓度增加而降低,其中高浓度具有明显差异(P<0.05);Western blot检测经单独使用TSPG处理了7 d的KG1-α细胞,与对照组相比,其EPOR及p-EPOR表达明显下调,Jak2、STAT5、p-STAT5、Bcl-2蛋白表达下调,而Bax、Cleaved Caspase-3表达增高,P53及P16无变化;然而添加了EPO处理的各组p-EPOR、Jak2、p-STAT5、P53及P16的表达明显增加,Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的表达没有变化。结论 TSPG能下调细胞内由EPOR介导的Jak-STAT通路相关蛋白的表达,并降低EPOR的活性,进而下调Bcl-2、上调Bax和Cleaved Caspase-3来促进细胞凋亡;而添加了EPO后这种作用被拮抗,抑制细胞增殖的作用是通过上调P53及P16促进细胞衰老而产生的。
- 李丹阳夏菁冯子强石庆强游智梅刘泽洪陈地龙李静
- 关键词：人参总皂苷促红细胞生成素细胞衰老
- 人参皂苷Rg1对人白血病TF-1细胞EPOR信号通路的影响被引量：15
- 2014年
- 目的:探讨人参皂苷Rg1诱导急性髓系白血病M6型人红白血病TF-1细胞凋亡及其对红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)通路的影响,以及可能的机制。方法:不同浓度人参皂苷Rg1处理TF-1细胞后,应用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞的增殖活性,FCM法检测并在透射电子显微镜下观察人参皂苷Rg1诱导TF-1细胞的凋亡,FCM法和免疫荧光法检测TF-1细胞中EPOR蛋白的表达水平和分布情况,实时荧光定量-PCR法检测TF-1细胞EPOR mRNA的表达,蛋白质印迹法检测人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞的红细胞生成素(erythropoietin,EPO)反应性以及TF-1细胞中EPOR、磷酸化EPOR、酪氨酸激酶JAK2(Janus tyrosine kinase 2)、磷酸化JAK2、信号转导和转录激活因子5(signal transducers and activators of transcription 5,STAT5)、磷酸化STAT5、Bax、Bcl-2和caspase-3(激活型)蛋白的表达。结果:人参皂苷Rg1(12.5、25、50、100和200μmol/L)作用24、48和72 h后,TF-1细胞的增殖受到抑制(P<0.05)。人参皂苷Rg1(12.5、25和50μmol/L)作用48 h后,TF-1细胞的早期凋亡率高于人参皂苷Rg1未处理的对照组(P<0.05),透射电子显微镜下可见TF-1细胞出现凋亡变化。FCM法和免疫荧光检测结果均显示,人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞膜表面EPOR的表达明显减少,并且TF-1细胞EPOR mRNA的表达水平下调(P<0.05)。与对照组比较,人参皂苷Rg1作用后TF-1细胞EPOR总蛋白的表达水平无明显变化,但降低了TF-1细胞对EPO的反应性,磷酸化EPOR的表达水平明显下调,Bax和caspase-3(激活型)蛋白的表达水平明显上调,Bcl-2以及EPOR下游JAK2、磷酸化JAK2、STAT5和磷酸化STAT5的表达水平均明显下调(P均<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可明显抑制TF-1细胞的增殖并促进其凋亡,其促凋亡机制可能与降低TF-1细胞对EPO的反应性,下调EPOR下游相关蛋白的表达并激活caspase-3的表达有关。
- 夏菁李静左国伟赵亮魏强游智梅李丹阳刘泽洪陈地龙
- 关键词：白血病受体红细胞生成素人参皂苷RG1
