北京市自然科学基金(7032028)
- 作品数：9 被引量：49H指数：5
- 相关作者：朱平张英刘英胡亚美王逸群更多>>
- 相关机构：北京大学第一医院首都医科大学附属北京儿童医院中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 干扰素α-2b治疗慢性粒细胞性白血病的前瞻性随机对照研究被引量：7
- 2005年
- 目的比较高、低剂量干扰素(IFN)α2b治疗慢性粒细胞性白血病(CML)的效果。方法建立检测融合基因bcr abl的荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(RQ PCR)方法,观察治疗后融合基因表达水平的变化。选择30例临床初诊的CML患者随机分为两组,先服用羟基脲控制外周血白细胞达20×109/L以下,然后分别给予IFNα2b300万IU隔日皮下注射(3MIU组)和500万IU每周6次(5MIU组)皮下注射,治疗3～6个月,每月抽取骨髓标本,检测融合基因bcr abl的表达情况。结果RQ PCR的灵敏度达50拷贝bcr abl;分别取1×103拷贝/μl和1×107拷贝/μlbcr abl质粒,以及1例CML患者的cDNA同时作8管平行扩增bcr abl融合基因,批内变异系数分别为2.35%、1.48%和1.17%,不同批次之间以K562细胞cDNA作重复性分析,批间变异系数为5.13%;CML初诊患者bcr abl/GAPDH水平介于0.010～5.799,中位值为0.098;治疗3个月后3MIU组和5MIU组患者骨髓bcr abl水平平均下降19%和24%,两组比较差异无统计学意义(P=0.398),但是3MIU组副作用相对较小。结论RQ PCR监测融合基因bcr abl表达可以有效观察CML患者使用IFN的治疗效果;不同CML患者白血病细胞的bcr abl表达水平有较大差异;隔日3MIUIFN皮下注射治疗即可有效抑制CML白血病细胞的增殖,且副作用较小。
- 杜金伟朱平田丁董作仁杨淑莲李松波唐亚辉刘辉岑溪南张英朱强祝毓琳杨英王东侠王昭崔华马一盖陈文明刘复强马键王景文沈悌达万明
- 关键词：干扰素Α-2B慢性粒细胞性白血病前瞻性随机对照研究
- 抗磷脂综合征识别相关抗原的T细胞克隆受体分析被引量：2
- 2006年
- 为了了解识别抗磷脂综合征相关抗原的T细胞受体特征,用基因谱型图的方法分析一例抗磷脂综合征患者体内的T细胞特征。结果发现优势T细胞呈寡克隆性增生;进一步分析2群主要T细胞克隆的T细胞受体(TCR)基因特征表明,其TCRβ链基因主要由TCRβV8和TCRβV23家族基因编码,T细胞接触抗原的TCRβVCDR3区氨基酸序列分别是CASSLLVAGGPRAYNEQFFGPG和CASSLAGFGQPQHFGDG,其CDR3区模体YNEQFF-GPG和QHFGDG与报道的特发性血小板减少性紫癜和系统性红斑狼疮高度一致。结论这些自身免疫病增殖的T细胞克隆可能识别同样的抗原。
- 欧媛朱平朱霞顾江英刘静杜金伟张英刘红星庄昕
- 关键词：抗磷脂综合征T细胞受体
- 构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因表达载体的家族特异性抗淋巴瘤疫苗被引量：5
- 2004年
- 目的 构建免疫球蛋白重链可变区 (IgHV)基因片段与细胞因子粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)或白细胞介素 2 (IL 2 )的融合基因表达载体作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗 ,接种动物了解该疫苗抗淋巴瘤免疫功能。方法 从脐带血免疫球蛋白基因文库获得 6个片段长度差异较大的IgHV3基因片段 ,测序后利用生物信息资源分析预测其重链可变区的T细胞表位 ,分析IgHV1 6个片段。选择包含了绝大多数T细胞表位的IgHV1、IgHV3基因 ,将框架区 (FR)为主的IgHV(FR)基因片段及IgHV(FR)与GM CSF或IL 2基因连接后形成的融合基因克隆到真核表达载体中。表达载体通过脂质体转染COS细胞 ,ELISA法确定GM CSF或IL 2的表达情况。将一些表达载体作为核酸疫苗免疫小鼠 ,通过间接免疫荧光法和细胞因子分泌法检测小鼠抗同一家族淋巴瘤和正常淋巴细胞的免疫反应。结果 计算机评分系统预测显示在每个IgHV序列中约存在 30个左右分别受HLA位点限制的T细胞表位 ,90 %以上的T细胞表位位于框架区 ,积分排位于前 1 0 %的T细胞表位都位于框架区。构建了去除CDR3区后以框架区 (FR)为主的IgHV1 (FR)和IgHV3(FR)真核表达载体。将GM CSF或IL 2基因连接到 2个IgHV基因的 3′端。IgHV (FR ) GM CSF/pcDNA3.0中GM CSF的表达量高于对照组 2
- 刘辉朱平林宁晶张英卜定方王奕嘉王逸群杨英
- 关键词：免疫球蛋白细胞因子融合基因基因表达载体肿瘤疫苗
- 急性B淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链可变区的细胞毒T淋巴细胞识别表位被引量：1
- 2005年
- 目的 分析儿童急性B淋巴细胞白血病 (B ALL)细胞免疫球蛋白重链可变区 (IgHV)的基因特征 ,确定IgHV的细胞毒T淋巴细胞 (CTL)识别表位。方法 PCR扩增 37例儿童B ALL的 7个IgHV基因家族 ,PCR产物直接测序 ,利用生物信息资源 ,分析所得序列的特征并预测B ALL细胞IgHV上与HLA A 0 2 0 1分子结合的九肽。合成预测九肽QLVQSGAEV ,进行T B杂交瘤细胞系 (T2 )结合实验 ,用荷肽抗原呈递细胞 ,反复刺激HLA A 0 2 0 1正常供者外周血中肽特异性CD8+ T细胞的扩增。结果 37例B ALL均检测到IgHV基因 ,经PCR产物测序 ,得到 4 0份IgHV基因序列 ,它们优先利用基因片段VH4 34(12 .5 % )和VH4 5 9(10 .0 % )。B ALL细胞的IgHV基因利用D7 2 7片段的频率 (15 .4 % )和在DJH结合区缺乏非编码核苷酸的频率 (2 0 .0 % ) ,均明显高于正常成人外周血淋巴细胞的IgHV基因。 17.5 %的序列含有不到 2 %的替代突变。从 4 0份B ALL细胞的IgHV序列 ,预测出 12条与HLA A 0 2 0 1分子有高亲和力的九肽 ,10条 (83.0 % )位于框架 1和 3区。合成九肽QLVQSGAEV使T2细胞表面HLA A 0 2 0 1分子的表达强度提高 1.6倍。HLA A 0 2 0 1正常供者外周血中的QLVQSGAEV特异性CD8+ T细胞 ,在荷肽抗原呈递细胞的重复刺激下 ,由 2轮刺激后的 1.6 %?
- 刘英朱平胡亚美
- 关键词：CD8^+T细胞急性B淋巴细胞白血病表位细胞毒T淋巴细胞正常供者重链可变区
- 儿童急性B淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链可变区基因的分子特征被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨儿童急性B淋巴细胞白血病 (B ALL)的起源及其免疫球蛋白重链可变区(IgHV)上可被细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)识别的表位 (epitope)。方法 PCR扩增 10 8例儿童ALL的 7个IgHV基因家族 ;PCR产物直接测序并翻译成氨基酸序列 ;利用生物信息资源分析B ALLIgHV基因重排类型、胚系基因片段利用及体细胞突变情况 ,并预测CTL细胞识别的表位。结果 6 6 %的ALL患儿检测到IgHV基因重排 ,其中单等位基因重排 37例 (5 2 .1% ) ,双等位基因重排 2 6例 (36 .6 % ) ,寡克隆基因重排 8例 (11.3% )。 4 0份B ALLIgHV基因序列中 ,不含终止密码子的读码框内 (inframe)重排 8份 (2 0 0 % )。重排利用最多的VH 家族为VH3、VH4和VH1,占 75 % ;VH4 5 9和VH4 34是VH4家族中利用频率最高的片段。优先利用的D家族为D3(35 .9% )和D2 (2 8.2 % ) ,D7 2 7的利用率 (15 .4 % )明显高于正常外周血淋巴细胞 (P =0 .0 2 )。JH6是B ALL利用最多的JH 基因片段 (47.5 % ) ,JH4 (2 7.5 % )次之。2 0 %的B ALL在DJH 连接区缺乏N核苷酸的插入 ,高于正常外周血淋巴细胞 (P =0 .0 2 )。 17.5 %B ALLIgHV基因发生替代突变 ,突变碱基散布于IgHV全长 ,互补决定区替代突变与静寂突变的比例≤1。 2 6例B ALLIgHV的HLA Ⅰ类分子结合肽 80
- 刘英朱平胡亚美
- 关键词：急性B淋巴细胞白血病T淋巴细胞PCR外周血生物信息资源
- 转mdr1基因诱导CIK细胞耐药并保持肿瘤杀伤活性被引量：14
- 2003年
- 目的 将多药耐药基因 (mdr1)转入细胞因子诱导的杀伤 (cytokine inducedkiller,CIK)细胞 ,观察其是否产生耐药性并且保持肿瘤杀伤活性。方法 用IFN γ ,CD3单抗 ,IL 2 ,IL 1等细胞因子体外诱导外周血单个核细胞获得CIK细胞。采用电穿孔方法将mdr1基因表达质粒pHamdr转入CIK细胞。转染后 72h提取细胞总RNA ,DNA酶消化残留质粒DNA后进行RT PCR ,鉴定mdr1基因表达 ;流式细胞仪检测细胞膜耐药蛋白 (P gp)表达。四唑蓝比色法 (MTT)检测转基因后CIK细胞对阿霉素和秋水仙碱的耐药性 ;同时检测转染前后CIK细胞对MCF7细胞 (人类乳腺癌细胞系 )的杀伤活性变化。结果 转染mdr1后的CIK细胞mdr1mRNA阳性 ,P gp阳性的CIK细胞为 2 1%～ 37% (平均 2 7% )。转染后CIK细胞获得了多药耐药性 ,对阿霉素的IC50 值较转染前升高了 2 2 .3～ 4 5 .8倍 ,对秋水仙碱的IC50 值升高了 6 .7～ 11.35倍。转染前后CIK细胞对MCF7肿瘤细胞的杀伤活性无明显变化 (P >0 0 5 )。结论 CIK细胞转入mdr1基因后获得了多药耐药性 ,转染后的CIK细胞仍然保持原有的肿瘤细胞杀伤活性。
- 杨永红李惠芳石永进王逸群张英王奕嘉朱平
- 关键词：CIK细胞肿瘤杀伤活性耐药性细胞免疫治疗肿瘤
- 骨髓增生异常综合征世界卫生组织新分型的临床评价被引量：12
- 2004年
- 朱平冯茹曹香红董玉君岑溪南
- 关键词：骨髓增生异常综合征世界卫生组织MDSAMLFAB分型
- 应用免疫球蛋白重链可变区上框架区来源的抗原九肽获得的细胞毒T细胞功能分析被引量：1
- 2005年
- 目的明确在B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白重链可变区(IgHV)的框架区(FR)上是否存在可以激发细胞毒T淋巴细胞(CTL)的抗原表位,这些来源于FR的抗原肽是否能够激发家族特异性的免疫反应,探讨按照B淋巴细胞肿瘤的IgHV基因分型进行家族性的免疫治疗的可能性。方法利用生物信息学系统预测了40例B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白序列的抗原表位,人工合成不同基因家族的抗原九肽,利用T2细胞结合实验检测预测的抗原肽和HLA分子的亲合力。利用体外CTL刺激扩增体系,诱导特异性的CTL细胞增殖,用肽/HLA四聚体检测特异性CTL的数目,应用LDH释放实验检测CTL的细胞毒活性并验证其家族特异性。结果在B淋巴细胞肿瘤的7个IgHV基因家族中找到了12个高亲和力的抗原九肽,其中10个(83%)位于FR,以HLA-A*0201正常供者的外周血单个核细胞(PBMNC)负荷该九肽作为抗原呈递细胞去刺激自身PBMNC,经过4轮刺激,CD8和肽/HLA四聚体双阳性细胞从0.38%上升到49.38%。LDH释放实验证明对HLA-A*0201(+)、IgHV1(+)靶细胞有明显的杀伤作用,并且被IgHV1肽刺激出的CTL不能识别负荷IgHV3肽的靶细胞。结论IgHV基因FR抗原九肽可以刺激产生具有HLA限制性的并且肽特异性的CTL,同时这样的杀伤作用具有家族特异性,以此为靶位有望对B淋巴细胞肿瘤进行家族特异性的免疫治疗。
- 郭晓玲朱平刘英刘静朱霞
- 关键词：免疫球蛋白重链可变区细胞毒T细胞淋巴瘤细胞
- 免疫球蛋白重链框架区的抗原九肽诱导特异性细胞毒T细胞增殖被引量：9
- 2004年
- 目的 探索免疫球蛋白重链可变区 (IgHV)是否存在T细胞识别的表位。 方法 PCR扩增 10 8例急性淋巴细胞白血病 (ALL)的 7个IgHV家族的重排基因 ,PCR产物直接测序并翻译成氨基酸。利用互联网生物信息资源分析B ALLIgHV基因的重排类型和基因变异 ,利用SYFPEITHI和BIMAS软件预测IgHV基因编码蛋白质的T细胞表位。合成代表性九肽IgHV1家族的QLVQSGAEV ,进行T2结合分析、合成九肽诱导的T细胞扩增、扩增细胞的HLA A 0 2 0 1/QLVQSGAEV四聚体检测等实验 ,确定合成九肽的免疫原性。结果 6 6 %的B ALL检测到IgHV基因重排克隆。在 4 0份测序得到的B ALLIgHV序列中 ,选出 2 6份进行HLA A 0 2 0 1分子结合九肽的预测 ,发现 7个IgHV家族共有 12条抗原九肽。除 1条位于第 3互补决定区 (CDR3)外 ,10条(83% )位于框架区 (FR) ,并与相应胚系VH 家族的代表序列相同 ;为同一IgHV家族的白血病细胞所共有。合成的IgHV1抗原九肽可将T2细胞表面HLA A 0 2 0 1分子的表达提高 1 6 3倍。HLA A 0 2 0 1正常供者的外周血淋巴细胞接受该九肽负荷的自身PBMC的 1轮刺激 ,CD8+ 四聚体 + 细胞达1 6 4 % ,继续接受该九肽负荷的T2细胞的 2轮刺激 ,CD8+ 四聚体+ 细胞增至 82 5 7%。
- 刘英朱平胡亚美
- 关键词：免疫球蛋白抗原细胞增殖急性B淋巴细胞白血病
