国家自然科学基金(30671700)
- 作品数：28 被引量：161H指数：6
- 相关作者：池玉杰于存闫洪波尹立伟郑苗苗更多>>
- 相关机构：东北林业大学齐齐哈尔大学安庆师范学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程医药卫生更多>>
- 灰树花的系统发育分析和主要木质素降解酶的测定被引量：14
- 2010年
- 对灰树花菌株迁西二号进行了ITS序列扩增与测序(GenBank登录号为GU584099),并对灰树花及相关白腐菌进行了基于ITS序列的系统发育分析,结果表明灰树花与Grifola sordulenta (Mont.) Singer等白腐菌的亲缘关系较近。采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基添加4种不同底物,对菌株迁西二号在25℃恒温下静置培养,得到了不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测了在470、420、310 nm处对于2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、3,4-二甲氧基苯甲醇/藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为锰过氧化物酶(MnP)、漆酶(Laccase)和木质素过氧化物酶(LiP)产生和活性大小的依据,从而获得了灰树花木质素降解酶系统的主要酶系及其与培养基的成分和酶作用底物的基本关系。结果表明,灰树花可产生MnP和漆酶,但不产生LiP;对比4种成分不同的培养液酶活力测定结果,未添加底物的培养液MnP最大酶活仅为2.96 U.L-1,漆酶最大酶活仅为4.49 U.L-1。添加底物木屑和2,6-DMP后MnP最大酶活为8.06 U.L-1,漆酶最大酶活为9.85 U.L-1,表明在培养液内添加酶的底物木屑后能轻微地提高两种酶的分泌量。
- 尹立伟池玉杰王雪童
- 关键词：灰树花ITS序列锰过氧化物酶漆酶
- 一色齿毛菌对活性染料的脱色研究被引量：10
- 2014年
- 为进一步鉴定试验菌株及明确一色齿毛菌CB1（Cerena unicolor CB1）对活性染料的脱色效果，在对该菌株ITS序列克隆的基础上，进行了其对活性黑和活性红2种活性染料脱色条件的研究。结果表明，C.unicolorCBl与17个同种其他菌株的ITS序列相似性为93％～99％，说明试验菌株为一色齿毛菌。染料脱色结果表明，250mg／L的活性黑对C．unicolorCBl的脱色产生明显的抑制，而500mg／L的活性红对该菌株的脱色抑制不明显。C．unicolorCBl对活性黑和活性红的脱色最适碳源分别是果糖和葡萄糖；最适氮源分别是尿素和硝酸铵；最适Cu^2＋和Mn^2＋添加浓度都为0．1mmol／L；最适pH为5；最适接种量为直径d=8mm的新鲜菌丝7片。
- 于存池玉杰
- 关键词：ITS序列活性染料脱色
- Lenzites gibbosa锰过氧化物酶1基因启动子序列的克隆被引量：3
- 2012年
- 根据已克隆到的Lenzites gibbosa锰过氧化物酶1cDNA全长基因Lg-mnp1,在5'端设计了3个巢式特异性引物,利用染色体步移技术克隆得到了其上游1 568 bp的启动子序列。采用Signal Scan进行了启动子序列分析。结果表明,在起始密码子上游-92～-43 bp区域为Lg-mnp1启动子的基础启动子区;在-52 bp处有一个转录起始位点,-83 bp处有1个TATAAA-box,-119、-196 bp有2个反向CCAAT-box(ATTGG)。启动子区也存在多个顺式作用元件,包括转录因子SP-1(GGGCGG)、转录因子AP-2(CCCMNSSS)、热激元件HSE(NTTCNNGAAN)及6个推定的金属响应元件MRE(TGCRCNC)等。
- 吴书景池玉杰闫洪波
- 关键词：锰过氧化物酶启动子染色体步移
- 猴头菌菌株CB1的系统发育分析与木质素降解酶的检测被引量：2
- 2013年
- 首先对猴头菌菌株CB1进行培养特性观察,表明菌株能产生较多的厚垣孢子;对其ITS序列进行扩增(GenBank登录号为GU584100),并与猴头菌属5个种的17个不同地域菌株进行基于ITS序列的系统发育分析,结果表明菌株CB1与猴头菌同种其他菌株遗传距离较近并聚类在一起。明确该菌株的分类地位后,对其进行木质素降解酶系统的检测,结果表明猴头菌可产生锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(laccase),但不产生木质素过氧化物酶(LiP)。MnP和漆酶的酶活性变化是有规律的,Mn2+是猴头菌产生MnP的必要因子,而漆酶的产生则不受该条件的制约。在含Mn2+的LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,猴头菌MnP最大酶活性为45.56U·L-1,漆酶最大酶活性为61.85U·L-1。
- 尹立伟池玉杰
- 关键词：猴头菌ITS序列锰过氧化物酶
- 白灵菇木质素降解酶系的检测及其染料脱色能力的研究被引量：3
- 2014年
- [目的]明确白灵菇(Pleurotus ferulae)分泌木质素过氧化物酶(LiP)、锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Laccase)的规律,以及白灵菇染料脱色的能力。[方法]利用紫外可见分光光度计,检测4种培养方式下白灵菇木质素降解酶活性,并在此基础上进行了白灵菇对5种染料的脱色研究。[结果]4种培养方式下,可以检测到MnP和Laccase的活性,但并未检测到LiP。添加Mn2+和2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)对MnP和Laccase的产生有抑制作用,而添加青杨木屑可以将MnP的活性提高1.28倍,将Laccase的活性提高3.75倍;白灵菇对中性红和活性黑2种染料的最大脱色率分别为87.12%和86.13%,对活性红和刚果红的最大脱色率分别为45.91%和32.28%,而对结晶紫几乎无脱色能力。[结论]白灵菇产Laccace活性要高于MnP;与脱色活性红、刚果红、结晶紫相比,白灵菇对中性红和活性黑2种染料的脱色更为彻底。
- 于存徐红云池玉杰
- 关键词：白灵菇锰过氧化物酶漆酶木质素过氧化物酶染料脱色
- 木材白腐菌分解木质素的酶系统-锰过氧化物酶、漆酶和木质素过氧化物酶催化分解木质素的机制被引量：72
- 2007年
- 近年来许多研究者进行了木材白腐菌分解木质素的酶系统对木质素的催化分解机制的研究.木材白腐菌在分解木质素的过程中会产生分解木质素的酶系统,氧化与分解木质素,这些酶系统主要包括细胞外过氧化物酶（锰过氧化物酶-MnP、木质素过氧化物酶-LiP）和细胞外酚氧化酶-漆酶（laccase）.
- 池玉杰伊洪伟
- 关键词：木质素过氧化物酶锰过氧化物酶酶系统漆酶酚氧化酶
- 偏肿革裥菌MnP基因在构巢曲霉中转化方法的建立被引量：2
- 2013年
- 对已经构建好的携带有白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶完整编码序列基因的载体质粒pMDTM18-T/Lg-mnp、以及整合型表达载体质粒pLB01分别双酶切,然后进行连接构建了重组质粒pLB01/Lg-mnp。对构巢曲霉(Aspergillus nidulans)尿嘧啶尿苷营养缺陷体菌株TN02A7进行了制备分生孢子原生质体酶解方法的摸索。结果表明:将溶壁酶、纤维素酶和蜗牛酶3种酶以1∶1∶1的比例混合,能有效地使构巢曲霉的分生孢子形成原生质体。采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化方法成功地将L.gibbosa的MnP基因转入到了构巢曲霉中,获得了携带有白腐菌MnP基因的构巢曲霉转化子菌株。
- 胡美美池玉杰
- 关键词：锰过氧化物酶构巢曲霉原生质体
- 构巢曲霉转化子菌株产MnP条件优化及对3种染料的脱色被引量：1
- 2016年
- 【目的】对转入猴头菌MnP1和MnP2基因的2个构巢曲霉转化子菌株TN02A7-He-mnp1和TN02A7-Hemnp2产MnP的初始培养条件进行优化,然后用优化后的酶液对3种染料进行脱色研究,以期提高锰过氧化物酶(MnP)活性。【方法】采用单因素试验进行最适产酶温度的筛选;正交试验检测血红素浓度、Mn^(2+)浓度、pH值和转速4个因素在3个水平下对酶活性的影响,并通过优化培养验证试验检测酶活性;吸光度法检测优化后的酶液对3种染料的脱色率。【结果】菌株TN02A7-He-mnp1产TN02A7-He-MnP1最适培养条件为:在MMPGRT培养基的基础上,加入2 g青杨木屑作为产酶底物,Mn^(2+)浓度为267μmol·L^(-1)、氯化血红素浓度为0.05 g·L^(-1)、培养液pH值为7.5,100 mL三角瓶中装液量为50 mL、接入2个φ=10 mm的菌块,于37℃、180 r·min^(-1)的摇床中培养120 h;菌株TN02A7-He-mnp2产TN02A7-He-MnP2最适培养条件与TN02A7-He-mnp1相似,只是氯化血红素溶液浓度为0.03 g·L^(-1),摇床转速为220 r·min^(-1),其他条件相同。在上述最适培养条件下,2个构巢曲霉转化子菌株产TN02A7-He-MnP1和TN02A7-He-MnP2的酶活性分别为133.62和147.09 U·L^(-1),是初始培养条件的2.89和3.46倍。染料脱色试验表明,2个菌株对杂环类染料中性红和偶氮类染料刚果红在4 h内达到58%以上的脱色率,16 h对中性红达到或接近100%,20 h对刚果红达到或接近100%。【结论】通过优化培养基成分与条件可以提高2个构巢曲霉转化子菌株MnP的产酶量,2个菌株对中性红和刚果红都有高效的脱色作用。
- 孙世娜池玉杰于存李月
- 关键词：锰过氧化物酶构巢曲霉转化子染料脱色
- 猴头菌MnP1基因全长cDNA克隆及生物信息学分析被引量：3
- 2015年
- 【目的】克隆猴头菌CB1锰过氧化物酶(Mn P)基因,用于分析He-mnp1基因及蛋白序列、基因的结构与功能,为研究猴头菌Mn Ps基因功能、转录调控和构建优良工程菌株提供参考。【方法】根据Gen Bank中已报道的白腐菌Mn Ps基因c DNA序列的保守区域设计引物,采用简并PCR、逆转录RT-PCR、c DNA末端的快速扩增(RACE)等方法扩增出全长c DNA基因序列,命名为He-mnp1(Gen Bank登录号为HM116841.3),并对其猴头菌He-mnp1基因进行生物信息学的分析。通过NCBI数据库进行BLAST同源搜索;ORF Finder查找该基因的完整开放阅读框(ORF);利用Expasy数据库和Bio Edit软件预测He-mnp1蛋白质的理化特性及氨基酸的组成;同时进行亲/疏水性及跨膜区的分析;采用Signal P 4.1软件进行蛋白信号肽的预测;并利用Clustal W和MEGA 5.1软件对He-mnp1蛋白序列同源性比对和构建白腐菌Mn Ps系统发育树;利用数据库Conserved Domain Database(CDD)蛋白保守结构域的预测,查看He-mnp1血红素、基质及锰、钙等结合位点;采用Predict Protein软件和SWISS-MODEL软件进行He-mnp1蛋白二级结构的预测和同源三维建模。【结果】该基因He-mnp1的c DNA全长1 279 bp,完整开放阅读框1 080 bp,起始密码子ATG,终止密码子TAA,5'端非翻译区有68个核苷酸,3'端非翻译区有131个核苷酸,编码蛋白359 aa;生物信息学分析表明,猴头菌He-mnp1氨基酸组成中丙氨酸含量最高,无酪氨酸,分子量为38.18 k Da,等电点为4.35,He-mnp1的蛋白有明显的亲水区,存在81-105、121-141间有2处疏水区域,此蛋白为亲水蛋白。He-mnp1蛋白质多肽前体包含1个18 aa的信号肽及1个5 aa的中间前导短肽。【结论】蛋白系统进化分析表明He-mnp1分布在第2组群,与平菇侧耳、冬生多孔菌、变色栓菌的Mn Ps亲缘关系最为接近。He-mnp1基因存在1个保守结构域,分析显示为ClassⅡ类的真菌血红素过氧化物酶蛋白家族。He-mnp1蛋白二级结构预测α-螺�
- 尹立伟池玉杰
- 关键词：猴头菌锰过氧化物酶基因克隆生物信息学
- 灰树花漆酶基因及启动子克隆和序列分析被引量：2
- 2014年
- 本文以优化后的漆酶培养基为基础,运用RT-PCR和RACE技术相结合,从该菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及Genomic DNA的全长序列,Genomic DNA大小为2105 bp。比较该漆酶基因的cDNA和Genomic DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子。cDNA序列全长为1873 bp,其中,包含一个完整的ORF,长度为1563 bp,编码520个氨基酸。序列在氨基酸水平上与偏肿革裥菌Lenzites gibbosa的相似性评价最高,相似性达70%。采用FA-PCR的方法,扩增得到漆酶基因起始密码子上游长800 bp的启动子序列。该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box以及AP2等基本的转录起始元件外,还存在有多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括3个MRE元件、2个STRE元件、1个HSEs元件、5个氮因子结合位点等。这些结果表明,不同的外源诱导物可以调节灰树花漆酶基因的表达。
- 郑苗苗池玉杰邵淑丽姜秋旭
- 关键词：灰树花漆酶基因启动子克隆转录调控
