国家自然科学基金(30672135)
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
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- 相关机构：中国人民解放军总医院哈尔滨医科大学北京大学第一医院更多>>
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- P57蛋白与HeLa细胞膜结合区的鉴定
- 2011年
- 目的研究肌动蛋白结合蛋白P57的性质、功能及其与细胞膜结合位点。方法用荧光显微镜观察野生P57蛋白及几种P57缺失突变体蛋白在细胞内的分布。利用细胞吹裂技术检测野生型P57及它的几种缺失突变体蛋白与细胞膜的结合。用差速离心技术分离亚细胞组分,用Western blot检测各组分中蛋白的含量。结果 P57蛋白的386-461片段具有与全长蛋白相类似的细胞分布及细胞膜结合能力,而1-299和1-432片段均不具有此能力。另外过量表达的386-461片段还可以竞争全长蛋白的膜结合位点。结论 P57是由其C末端区域(于386-461片段)负责蛋白与细胞膜的结合。
- 张祥金萌萌黄鹏张世谦张里程唐佩福
- 关键词：P57
- NaCl浓度和茎环内的碱基结构对shRNA退火影响的研究被引量：2
- 2010年
- 目的优化DNA寡核苷酸单链退火条件,提高单链DNA寡核苷酸退火效率,加速shRNA表达载体构建速度。方法将茎环内部碱基结构不同DNA寡核苷酸链在不同浓度(50、100、150、200mmol/L)NaCl退火缓冲液中进行退火,通过琼脂糖凝胶电泳观察DNA寡核苷酸链在退火前后电泳速度的变化,利用Gene Tools分析软件对电泳图像进行分析比较退火效率。结果当退火缓冲液中NaCl浓度为200mmol/L时,DNA寡核苷酸单链退火效率明显提高,茎环内部碱基互补的DNA寡核苷酸单链退火效率46.00%±3.33%,茎环内部碱基不互补DNA寡核苷酸单链退火效率97.00%±1.49%。结论NaCl浓度和茎环内的碱基设计是影响shRNA退火主要因素,优化shRNA的退火条件,提高退火效率,可以加速载体构建。目的优化DNA寡核苷酸单链退火条件,提高单链DNA寡核苷酸退火效率,加速shRNA表达载体构建速度。方法将茎环内部碱基结构不同DNA寡核苷酸链在不同浓度(50、100、150、200mmol/L)NaCl退火缓冲液中进行退火,通过琼脂糖凝胶电泳观察DNA寡核苷酸链在退火前后电泳速度的变化,利用GeneTools分析软件对电泳图像进行分析比较退火效率。结果当退火缓冲液中NaCl浓度为200mmol/L时,DNA寡核苷酸单链退火效率明显提高,茎环内部碱基互补的DNA寡核苷酸单链退火效率46.00%±3.33%,茎环内部碱基不互补DNA寡核苷酸单链退火效率97.00%±1.49%。结论NaCl浓度和茎环内的碱基设计是影响shRNA退火主要因素,优化shRNA的退火条件,提高退火效率,可以加速载体构建。
- 张祥张震宇唐佩福孔祥丽黄鹏金萌萌于爱平
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA
- 重组RANK蛋白抑制破骨细胞活性的实验研究
- 2010年
- 目的研究重组RANK蛋白在体外实验中对破骨细胞的抑制作用。方法成骨细胞与RAW264.7细胞以4∶1比例混合培养6d,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定后,加入3种浓度(10-4g/L、10-5g/L、10-6g/L)重组RANK蛋白,并设空白对照。3d后观察破骨细胞数目和形态,计数骨磨片吸收陷窝。结果混合培养6d后,体系中可见成熟破骨细胞出现。加重组RANK蛋白3d后,与对照组相比,各药物组TRAP阳性细胞个数、骨磨片吸收陷窝计数均明显减少。结论体外实验中重组RANK蛋白可以显著抑制破骨细胞活性及吸收功能。
- 张里程张立海黄鹏张巍唐佩福
- 关键词：破骨细胞
- p57与细胞膜上胆固醇的相关性分析
- 2010年
- 目的:检测生理状况下p57蛋白与细胞膜上的胆固醇之间的相关性。方法:使用不同工作浓度的mβCD抽提U937细胞膜上的胆固醇,再利用超速离心分离细胞膜组分,并利用Western blot技术检测细胞膜上p57蛋白含量的变化。利用非连续蔗糖密度梯度离心制备脂筏,并利用Western blot技术检测脂筏上的p57蛋白含量。结果:在mβCD降低细胞膜上胆固醇含量之后,p57在膜组分中的含量的变化不大。此外,在脂筏中未检测到p57的存在。结论:与病原性分枝杆菌等所导致病理状态不同,在生理状态下p57蛋白与细胞膜上的胆固醇之间尚未观察到相关性。
- 金萌萌张祥黄鹏张世谦张里程唐佩福
- 关键词：P57胆固醇脂筏
- 重组核因子κB活化因子受体蛋白对破骨细胞活性的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 背景:核因子κB活化因子受体直接参与破骨细胞的活性及功能调节,在骨吸收类疾病发病中具有重要意义。通过基因工程得到的可溶性核因子κB活化因子受体蛋白可能为防治骨质疏松等骨吸收类疾病提供了新的有效手段。目的:观察重组重组核因子κB活化因子受体蛋白对体外培养破骨细胞活化、吸收活性的影响。方法:取新生24h内SD大鼠胎鼠的四肢长骨,机械分离获得破骨细胞,采用不同浓度重组重组核因子κB活化因子受体蛋白干预后,行抗酒石酸酸性磷酸酶染色及骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色,观察其对破骨细胞的生长情况。结果与结论:重组核因子κB活化因子受体蛋白对破骨细胞作用3d后,破骨细胞数量明显减少,以10-4mol/L重组核因子κB活化因子受体蛋白最为显著。核因子κB活化因子受体蛋白作用9d时,骨片吸收陷窝数明显减少。由此认为,在体外重组核因子κB活化因子受体蛋白可以有效抑制破骨细胞活化及骨吸收活性。
- 张里程张立海黄鹏唐佩福
- 关键词：破骨细胞骨质疏松骨组织工程
