国家自然科学基金(81201356)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：第三军医大学新桥医院河南科技大学第一附属医院河南科技大学更多>>
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- 实时荧光定量RT-PCR鉴定溶血对血清microRNA测定的影响
- 2014年
- 目的监测miR-16基因受溶血的影响程度,确定miR-16作为可靠内参用于分析的溶血范围。方法建立红细胞体积比为0、0.040%、0.012%、0.037%和0.110%的溶血标本体系;运用全波长光谱分析确定关于溶血的特征性吸收波长;建立定量测定miR-16的标准曲线;运用实时荧光定量RT-PCR法测定溶血体系中miR-16的表达量。结果与溶血相关的特征性吸收峰位于414 nm;miR-16测定的标准曲线公式为:y=-1.21x+34.635,决定系数R2为0.9988。在溶解红细胞体积小于0.012%的血清标本中,miR-16作为血清micro RNA(miRNA)的内参是可靠的。此时,血清的A414测定值为0.19。结论建立了监测血清标本中miR-16可作为可靠内参基因的溶血范围,确保了标本的可靠性和实验结果的准确性。
- 王媛媛曲婷婷李毅
- 关键词：实时荧光定量PCR溶血MIRNA
- 两种分析miRNA相对表达量方法的比较研究被引量：2
- 2013年
- 目的基于实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)基因表达相对定量的分析方法:GenEx软件分析与2(-ΔΔCT)法,建立一种简便、准确的miRNA相对定量方法。方法以HK-2细胞系cDNA为模板,进行PCR扩增,确定最佳退火温度;再倍比稀释该模板,用荧光定量PCR测定的Ct值作miR-122和miR-16的标准曲线,计算出相应miRNA的扩增效率。用荧光定量PCR测定健康者和乙型肝炎患者血清中内参miR-16和靶基因miR-122的表达,分别采用GenEx软件分析与2(-ΔΔCT)法来评价相对表达量。结果系列稀释法制作的标准曲线呈现较好的线性相关性,两种miRNA的标准曲线r2值均为0.999,miR-16的扩增效率为97%,miR-122扩增效率为107%。2(-ΔΔCT)法分析乙型肝炎患者血清中miR-122的表达较健康者增高了44.3倍,而GenEx软件分析为54.1倍。结论GenEx软件分析考虑了更多的影响因素,其结果比2(-ΔΔCT)法更可靠,适用于临床分析。
- 郑传浩姚磊李毅
- 关键词：实时RT-PCR
