国家自然科学基金(30230270)
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 相关作者：张改平张红周继勇王丽郭军庆更多>>
- 相关机构：浙江大学河南省动物免疫学重点实验室河南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 传染性法氏囊病毒的抗原及分子特征(英文)被引量：4
- 2005年
- 用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2～14代后适应细胞并产生细胞病变.细胞适应的IBDV毒株的理化和形态特征与经典传染性法氏囊病毒株一致.除IBDV-HZ1、HZ2属经典IBDV血清型外,IBDV-JD1、JD2和NB毒株分属不同的血清亚型.人工感染实验结果显示,分离的IBDV毒株产生与野外病例相似的临床症状和病变,出现法氏囊滤泡髓质的淋巴细胞变性、坏死和消失.基因组序列分析显示,IBDV-NB毒株A片段由3 264个核苷酸组成,编码由145个氨基酸残基组成的VP5和由1 012个氨基酸残基组成的多聚蛋白.与来自GenBank的IBDV Ⅰ型毒株比较,NB毒株A片段编码的多聚蛋白与JD1毒株的同源性最高,达99.5%,VP2与JD1、CEF94、D78的同源性为99.8%,VP3与JD1的同源性为99.2%,VP4与JD1的同源性为100%,VP5与JD1,HZ2,P2,CEF94,CT,Cu-1和D78毒株的同源性为99.3%.NB毒株VP2蛋白的第253、280、284位氨基酸残基与IBDV变异毒株和经典毒株一致,但不同于IBDV超强毒株.这些结果暗示IBDV的抗原表位是构象依赖性表位,IBDV血清亚型的形成与IBDV弱毒疫苗病毒株密切相关.
- 周继勇叶菊秀叶伟成陈庆新郑肖娟郭军庆
- 关键词：传染性法氏囊病毒理化特性血清亚型
- 牛FcγRⅠ(CD64)GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2005年
- 采用PCR技术从牛巨噬细胞cDNA文库中扩增了牛的高亲和力IgGFc受体FcγRⅠ,测序结果显示与已报道的牛FcγRⅠ序列一致。在牛FcγRⅠ成熟蛋白胞外环区两端分别合成带有BamHⅠ、XhoⅠ限制酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX - 6P- 1,转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导,SDS -PAGE分析表达了N端带有GST的融合蛋白,Western -blotting试验表明融合蛋白在变性条件下能和牛IgG结合。GST -FcγRⅠ融合蛋白的成功表达为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础。
- 张改平乔松林李青梅王丽张红郭军庆王选年夏春
- 关键词：GST融合蛋白
- 鸡免疫球蛋白λ轻链绿色荧光蛋白重组分子在COS7细胞的分泌表达
- 2007年
- 将鸡Igλ轻链信号肽与pEGFP-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体pEGFP-C1-SP,通过对鸡Igλ轻链基因的定向克隆,构建了带有纯化标签的鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白真核表达载体.转染COS7细胞后,荧光显微镜观察及Western blotting检测均证明融合蛋白在COS7细胞的分泌表达.
- 张红刘钧珂张改平宋海涛王青段艳华赵光辉
- 关键词：绿色荧光蛋白COS7细胞分泌表达
- 鸡传染性法氏囊病研究进展被引量：5
- 2007年
- 鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）是由传染性法氏囊病毒（IBDV）引起的鸡的一种高度接触性传染病，该病主要感染3～6周龄的青年鸡，病毒在法氏囊的B淋巴细胞中迅速繁殖，损伤法氏囊的B淋巴细胞，引起严重的免疫抑制。临床上出现增重减少、死亡、机体严重脱水和骨骼肌出血。除直接引起鸡死亡与生产性能下降外，还可引起其免疫力下降，增加感染鸡对其他病原体的易感性和对疫苗的免疫应答能力下降。该病是Gosgrove（1957年）在美国首次发现的，现已遍及全世界主要养禽地区，给世界养禽业造成了巨大的损失，被国际公认为鸡的三大疫病之一。
- 宋海涛张红段艳华赵光辉张改平
- 关键词：鸡传染性法氏囊病传染性法氏囊病毒B淋巴细胞接触性传染病免疫力下降免疫抑制
- 鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:构建鸡B淋巴细胞cDNAT7噬菌体表达文库并对文库质量进行鉴定。方法:利用oligo(dT)-纤维素亲和层析从SPF雏鸡法氏囊细胞制备mRNA,合成的双链cDNA定向克隆到T7EcoR I/HindIII载体臂,包装并构建cDNA表达文库。对文库进行滴度测定和重组子测定。扩增文库并进行PCR鉴定插入序列的长度及分布。结果:文库初始滴度为5×107pfu/mL,扩增后滴度达到1.88×1010pfu/mL。插入片段平均长度1440bp,主要分布在750～2000bp之间。结论:构建的鸡B淋巴细胞cDNAT7噬菌体表达文库具有很高的质量,为进一步研究鸡B细胞发育以及传染性法氏囊病毒(IBDV)的分子致病机制奠定了实验基础。
- 张改平张红郭军庆王选年乔松林郝慧芳王丽
- 关键词：CDNA表达文库
- PCR克隆高GC含量牛Fcγ2R cDNA被引量：4
- 2005年
- 根据已发表的牛Fcγ2RcDNA序列设计1对引物,采用改进的RT -PCR技术从牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增出了GC含量为6 4%的牛Fcγ2RcDNA分子,克隆片段全长795个核苷酸,含有一个完整的开放阅读框,编码2 6 5个氨基酸,和已报道的序列相比存在3个碱基突变。
- 乔松林张改平王丽张红张华付彦峰郭军庆王选年夏春
- 关键词：克隆
- SARS-CoV核衣壳蛋白的体外表达及单克隆抗体功能鉴定被引量：1
- 2005年
- 为对SARSN蛋白的功能进行研究,并建立快速、方便的诊断方法,将已克隆、构建成功的重组质粒PGEX-4T/N转化至E.coliBL21中,IPTG诱导表达,表达产物与兔源GST多抗在66kD处有很强的反应性,融合蛋白GST-N分别通过GSTrapFF1mL纯化柱和割胶纯化两种方法获得了具有生物活性和变性的融合蛋白.其蛋白浓度分别为0.85mg/mL和0.433mg/mL.利用纯化的GST-N蛋白免疫SPFBALB/c小鼠,获得4株能稳定传代并分泌抗SARSN单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为3E5、6B9、4C2、4B7,经Westernblot分析表明,所获得的4株抗SARSN单克隆抗体与纯化的N蛋白均具有特异反应性,且不与禽冠状病毒的N蛋白发生反应.
- 陈洪勋严兴成应建跃吴建祥周继勇
- 关键词：冠状病毒N蛋白单克隆抗体
- 鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达
- 2006年
- 将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igλ轻链基因中,并将鸡Igλ轻链信号肽与Pegfp-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp-C1-SP。鸡Igλ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点,构建了带有信号肽的鸡Igλ轻链/GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后,荧光显微镜观察,重组鸡Igλ轻链/GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达,而载体pEGFP-C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明,牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。
- 张红宋海涛张改平邢广旭赵东杨继飞柴书军郝青梅
- 关键词：COS7细胞GFP融合蛋白
- 中国地方品种鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析(英文)被引量：3
- 2003年
- 鸡白细胞介素 2 (chIL 2 )是近年来新发现的一类细胞因子 .根据Sundick等发表的鸡IL 2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法分别扩增和克隆了我国仙居鸡、丝羽乌骨鸡两个地方品种和艾维茵商品肉鸡IL 2cDNA .仙居鸡、丝羽乌骨鸡和艾维茵商品肉鸡IL 2基因的编码区均由 42 9nt组成 ,编码一个由 143个氨基酸组成的前体蛋白 .基因 5′端含有 17个核苷酸 ,3′端含有 2 85个核苷酸组成的非编码区 ,3′ UTR中含有 5个重复的“ATTTA”序列 .编码蛋白氨基酸与来自GenBank的Kestrel、Obese和SC品系的来杭鸡比较 ,氨基酸的突变主要发生在 2 8～ 3 2位 .而这一区域仙居鸡和丝羽乌骨鸡的编码氨基酸序列与Kestrel来杭鸡相同 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡相同 .基因系统进化树分析表明 ,仙居鸡、丝羽乌骨鸡和Kestrel来杭鸡具有很近的亲缘关系 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡具有很近的亲缘关系 .中国的药用鸡品种———丝羽乌骨鸡在非常保守的 13
- 周继勇陈吉刚王金勇JIMMY K WANG
- 关键词：鸡白细胞介素2克隆遗传进化系统进化
- 鸭的类似鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析被引量：13
- 2003年
- 通过 RT- PCR和 DNA测序技术 ,克隆和测定了绍兴麻鸭的一种类似鸡白细胞介素 2 ( IL- 2 )基因的核苷酸序列 ,并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示 ,绍兴麻鸭的类似于鸡 IL - 2基因的核苷酸长度由 74 8个碱基组成 ,编码产物为由 14 0个氨基酸残基组成的多肽 ,编码产物中含有 2 1个氨基酸残基组成的信号肽。绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因的核苷酸及编码产物 ,与鸡和火鸡 IL- 2的一致性分别为 71.4 %～ 72 .1%和 5 5 .0 %～ 5 7.9% ,与哺乳类等动物 IL- 2的一致性分别为 2 2 .1%～ 2 8.8%和 14 .3%～ 17.1%。对绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因蛋白编码产物的系统进化树分析表明 ,其编码产物与鸡和火鸡 IL- 2具有较远的亲缘关系。绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因编码产物的三维结构 ,预测由 4个α-螺旋结构和 2个β折叠组成。这些研究结果预示 ,鸭的类似于鸡 IL - 2基因编码产物 ,在生物学功能上与哺乳动物和其他禽类具有很大的差异。
- 王金勇周继勇陈吉刚张中华腾巧泱
- 关键词：基因克隆遗传进化RT-PCR免疫调节因子
