北京市自然科学基金(7083108)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：杨水祥崔淯夏李龙苏迎周勇更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京世纪坛医院北京世纪坛医院中国人民解放军总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- miRNA-377调控钙通道蛋白在心房颤动中的作用被引量：2
- 2015年
- 目的探讨mi RNA-377(mi R-377)与房颤相关离子通道蛋白的靶向调控关系。方法实验分为过表达组、干扰组、阴性组和空白组。将L型钙离子通道α1C亚单位(CACNA1C)的重组荧光素酶报告质粒与mi R-377模拟体及阴性对照共转染于人胚胎肾HEK293细胞,检测各组荧光素酶的相对活性。将mi R-377模拟体、干扰体及阴性对照导入大鼠胚胎心肌H9C2细胞,观察其对靶基因的表达和功能调控。结果与阴性组比较,过表达mi R-377组CACNA1C荧光素酶相对活性降低31%(0.316±0.006 vs 0.455±0.008,P=0.009),过表达组及干扰组CACNA1C、CACNB2基因m RNA表达水平无明显变化。mi R-377模拟体转入H9C2细胞可抑制CACNA1C蛋白表达(P<0.05),降低L型Ca电流的密度,使其峰值密度从–3.23±0.64p A/p F降至–2.26±0.16p A/p F(P<0.05)。结论 CACNA1C基因可能是mi R-377的直接靶基因,mi R-377可能通过抑制CACNA1C的表达从而降低L型钙电流来参与房颤电重构,有可能成为房颤干预治疗的靶点。
- 李龙苏迎李泱杨水祥
- 关键词：心房颤动微RNAS离子通道钙通道膜片钳技术
- RNA干扰抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体的释放
- 2013年
- 背景:利用RNA干扰和沉默基因达到临床治疗效果,已经越来越受到重视。目的:探讨利用小干扰RNA方法抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体释放的效果和意义。方法:设计腺病毒介导的针对调节韦伯潘力氏小体释放的关键蛋白N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子N端功能区shRNA,筛选鉴定收获病毒,转染人主动脉内皮细胞,携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染设为实验组、单纯病毒表达载体转染设为阴性对照组,空白对照组未加任何东西。结果与结论:用携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染内皮细胞后,3组N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子mRNA表达比较,差异有显著性意义(P<0.05);实验组的表达随时间变化持续下降,24,48,72h组间比较差异有显著性意义(P=0.048)。N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子蛋白表达实验组低于两对照组,差异有显著性意义(P<0.05);而两对照组之间比较差异无显著性意义(P=0.249)。免疫荧光染色显示,N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA腺病毒感染,明显抑制凝血酶诱导的韦伯潘力氏小体的释放。说明携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染人主动脉内皮细胞,能明显抑制N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子mRNA及蛋白表达,抑制凝血酶诱导的韦伯潘力氏小体释放。
- 杨水祥魏晓菲崔淯夏周勇
- 关键词：RNA干扰内皮细胞腺病毒
- 心房颤动射频消融手术可逆转微小RNA的调控异常被引量：4
- 2015年
- 目的 探讨心房颤动（房颤）患者射频消融手术前后外周血微小RNA（miRNA）的改变及其可能的调控机制和手术干预价值.方法 选择2011年1月至2013年12月北京世纪坛医院30例行房颤射频消融术患者（阵发性、持续性和永久性房颤各10例）,健康体检者10例作为正常对照组,房颤组分别在导管射频消融术前和术后3个月取外周血,使用miRNA芯片进行全基因组miRNA表达谱微阵列分析,实时定量聚合酶链反应对调控的主要miRNA表达差异结果进行验证,通过欧洲生物信息学中心（Mirbase）、美国Miranda和Targetscan数据库进行靶基六分析.术前差异倍数为房颤组患者术前与正常对照组比较所得,术后差异倍数为房颤组术后与术前自身外周血比较所得.结果 房颤组与正常对照组及房颤组手术前后外刷血比较,共有 25种miRNA术前表达减少,术后表达增多;40种miRNA术前表达增多,术后表达减少,其中miR-199a-3 p/milR-199b-3p、miR-152等7种miRNA术前表达下调＞1.5倍,术后表达上调＞100倍;miR-BART8-3p、miR-4796等6种miRNA术前表达上调＞1.5倍,术后表达下凋＞10倍房颤相关的miR-30b-5p等6种miRNA术前表达下降＞5倍,术后表达增加＞50倍.参与调控L型钙离子通道蛋白CACNA1C的miR-377-5p等4种miRNA手术前后的表达存在差异.结论 miRNA参与调控房颤的发生发展;射频消融手术可改变miRNA的表达调控异常,对术后逆转房颤的电重构和结构重构及窦性心律维持有一定的调控价值miR-30b-5p、miR-377-5p、miR-199a-3p/miR-199b-3p等miRNA有可能成为未来房颤早期诊断与干预的靶点.
- 崔淯夏苏迎李龙赵晟南京岳语喃杨水祥
- 关键词：心房颤动基因组学导管消融术
- RNA干扰抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体的释放被引量：2
- 2012年
- 目的探讨利用RNA干扰方法抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体(WPB)释放的效果和意义,为防治心血管病和开发小分子RNA药物奠定基础。方法设计腺病毒介导的针对调节WPB释放的关键蛋白N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感因子(NSF)N端功能区的小发卡RNA(shRNA),筛选鉴定收获病毒,使用NSF shRNA转染人主动脉内皮细胞为实验组、阴性对照病毒感染为阴性组、不加任何干扰为空白组,RT-PCR和Western blot法观察对NSFmRNA及蛋白表达的抑制作用,免疫荧光染色观察对WPB释放的影响。结果用携带NSF shRNA的腺病毒感染内皮细胞后,实验组NSF mRNA表达与空白组(P=0.02)及阴性组(P=0.035)比较,差异有统计学意义;实验组NSFmRNA表达随时间延长持续下降,24、48及72 h明显下降,差异有统计学意义(P=0.048)。实验组NSF蛋白表达,与空白组(P=0.031)及阴性组(P=0.004)比较.差异有统计学意义;而空白组与阴性组差异无统计学意义(P=0.249)。免疫荧光染色显示,NSF-shRNA腺病毒感染,明显抑制凝血酶诱导的WPB释放。结论携带NSF-shRNA的腺病毒感染人主动脉内皮细胞,能明显抑制NSF mRNA及蛋白表达,抑制凝血酶诱导的WPB释放,对未来动脉粥样硬化及急性冠状动脉综合征的防治有一定的参考价值。
- 杨水祥魏晓菲崔淯夏周勇
- 关键词：RNA干扰内皮细胞逆转录聚合酶链反应
