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猪流行性腹泻病毒S1蛋白截短表达及多抗制备被引量：6: 2013年; 文章旨在表达猪流行性腹泻病毒PEDV截短S1基因(rS1636-789),并制备特异性多克隆抗体。扩增PEDV rS1636-789基因克隆到原核表达载体PGEX-6P-1上,构建重组表达质粒PGEX-6P-1-rS1636-789,经IPTG诱导,获得以包含体形式表达重组蛋白。将重组蛋白作为免疫原制备兔抗rS1636-789抗体并进行效价测定及生物活性检测。结果表明,多抗效价达1:65 536,间接ELISA和Western blot说明此多抗可与rS1636-789重组蛋白发生很好抗原抗体反应。研究进一步定位PEDV S蛋白免疫优势区,为PEDV基因工程疫苗研究奠定基础。; 任晓峰贾文龙; 关键词：猪流行性腹泻病毒表位原核表达抗体制备

细胞自噬与病毒感染被引量：4: 2013年; 自噬是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性降解途径,在维持细胞存活、更新、物质再利用和内环境稳定中起着重要作用。目前已经发现大量新的自噬相关基因,同时发现自噬在病毒感染过程中发挥着重要的抗病毒作用:自噬可以将胞质中的病毒转运到溶酶体中,降解病毒;也可以将病毒核酸转运至胞内感受器上激活天然免疫;还可以将病毒抗原递呈给MHCⅡ类分子激活适应性免疫。自噬参与胞内微生物感染具有双重作用。一方面,自噬能够降解入侵的微生物,即以异源吞噬(xenophagy)的方式清除胞内的病原体;另一方面,有些微生物能够通过某些机制逃避自噬而利于自身存活。本文就细胞自噬及其与不同病毒感染关系的最新研究进展进行综述。; 陶冶任晓峰; 关键词：细胞自噬病毒自噬相关基因

M13噬菌体肽库扩增及兔抗血清制备被引量：1: 2013年; 为制备M13噬菌体多克隆抗体,将噬菌体十二肽原始文库进行大量扩增,作为免疫原制备兔抗M13的多克隆抗体血清并进行间接ELISA鉴定。结果表明,该多抗效价达1 1 048 576,说明此多抗可与扩增噬菌体文库发生很好的抗原抗体反应。将制备的噬菌体M13多克隆抗体与商业化M13抗体水平比较,制备多抗与商业化M13抗体效果相当。本研究成功制备兔抗M13噬菌体多克隆抗体,为深入研究噬菌体展示技术提供了材料。; 任晓峰马晓微; 关键词：噬菌体肽库间接ELISA

猪轮状病毒VP7蛋白模拟表位的噬菌体展示技术筛选与鉴定: 2015年; 猪轮状病毒（Po RV）是引起仔猪腹泻的重要病原之一,其主要结构蛋白衣壳蛋白VP7可诱导机体产生中和抗体。文章以制备的抗Po RV VP7单克隆抗体（MAb）3B6作为靶分子,利用噬菌体十二肽库展示技术对其模拟表位进行筛选。四轮筛选后随机挑取阳性克隆扩增后进行ELISA鉴定,同时提取其基因组DNA测序,10个阳性噬菌体亲和肽拥有共同的外源肽序列＂VPLGTDNGDIWV＂,而且与靶分子有很高亲和力。阳性噬菌体亲和肽与VP7蛋白进行序列比对,结果表明,十二肽中有4个氨基酸（第167位P、第178位T、第179位D和第184位W）与VP7蛋白167-184位氨基酸有一定的相似性。竞争抑制ELISA证明亲和多肽降低Po RV与抗VP7单克隆抗体之间的作用,病毒竞争抑制试验表明亲和多肽可以竞争性地抑制Po RV感染细胞。因此由这4个氨基酸构成的基序很有可能作为猪轮状病毒VP7蛋白的一个模拟表位。; 任晓峰秦昭恒曹丽艳葛旭颖; 关键词：猪轮状病毒 VP7蛋白模拟表位

猪轮状病毒DN30209株VP4全长蛋白表达及多抗制备和鉴定被引量：2: 2014年; 为开展猪轮状病毒(PRV)及其VP4蛋白相关特性研究,参照Gen Bank所收录的猪轮状病毒JL94、OSU等株序列设计一对特异性引物,从实验室分离鉴定的猪轮状病毒DN30209株扩增约2 330 bp VP4全长基因,并成功构建重组质粒VP4-p MD18-T。重组质粒经测序、序列比对及分析。结果表明,DN30209株VP4全基因长2331 bp,与参考株JL94的核苷酸同源性为99.7%,氨基酸同源性为99.5%。将VP4基因连接到p GEX-6P-1原核表达载体中,构建并筛选出阳性原核表达载体重组质粒VP4-p GEX-6P-1。阳性重组质粒转化Rosetta宿主菌感受态细胞中,经IPTG诱导,获得以包涵体形式表达的重组蛋白,融合蛋白大小约为112 ku,与预期大小相符。回收、纯化并复性该蛋白,将其作为免疫原免疫大白兔,制备兔抗PRV VP4全长蛋白多克隆抗体,间接ELISA测定多抗效价到1:105,间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)检测表明该多抗均可与PRV具有很好的抗原抗体反应性,为猪轮状病毒研究提供有效实验材料。; 任晓峰窦秀静郝雅环孙刘妹魏小宁; 关键词：猪轮状病毒原核表达抗体制备

猪圆环病毒2b型Cap蛋白多克隆抗体制备及其生物学特性分析被引量：5: 2015年; 为了使猪圆环病毒2b型(PCV2b)Cap蛋白在猪圆环病毒病等疾病的诊断和防制方面取得更有效的应用,本试验将编码PCV2bCap蛋白的ORF2基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并构建pET-32a-ORF2重组质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21受体菌后,通过IPTG诱导表达重组蛋白,将重组蛋白用镍柱进行纯化并免疫大白兔,制备兔抗PCV2bCap蛋白的多克隆抗体。利用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光及病毒交叉反应等试验对制备的多克隆抗体进行生物学特性检测。ELISA检测结果显示,该抗体效价可达到1∶216;Western blotting检测结果显示,该多克隆抗体可与PCV2b产生特异性的反应条带,说明其具有较好的反应活性;间接免疫荧光试验结果显示,该多克隆抗体能识别感染PK-15细胞中的PCV2b,说明该多克隆抗体具有鉴别诊断PCV2b的能力;病毒交叉试验结果显示,该多克隆抗体能与PCV2b反应,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪轮状病毒(PRoV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)等猪源病毒发生交叉反应,表明该多克隆抗体具有高度特异性。本试验制备的抗PCV2bCap蛋白多克隆抗体为PCV2b病原特性研究及该病的临床检测奠定基础。; 袁庆董博高睿泽李鹏冲任玉东任晓峰李广兴; 关键词：CAP蛋白原核表达多克隆抗体生物学特性

猪繁殖与呼吸综合征病毒HH08株GP3蛋白的原核表达及其多抗血清的制备与检测: 2013年; GP3蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒次要结构蛋白之一,是由ORF3基因编码一种高度糖基化糖蛋白,在病毒致病性、复制、装配、变异和保护性反应等方面具有重要意义。目前对GP3蛋白研究仍不透彻,在病毒感染细胞过程中所起作用也不清楚。试验扩增PRRSV-HH08株ORF3,连接至PGEX-6P-1载体,导入大肠杆菌内诱导表达,获得以包涵体存在GP3蛋白,纯化后作为抗原制备兔抗GP3多抗血清,Western-blotting结果表明,该蛋白与多抗血清有免疫反应,鉴于ORF3与ORF5基因保守度极低,可用于与其他蓝耳病毒株GP3或GP5蛋白为抗原制作多抗血清比较敏感性及特异性。; 任晓峰刘和; 关键词：PRRSV 抗血清

猪传染性胃肠炎病毒M蛋白的表达与抗体制备被引量：3: 2014年; 文章表达猪传染性胃肠炎病毒TGEV M基因,制备抗M蛋白多克隆抗体。扩增的M基因经Bam H I和Eco R I双酶切后克隆到原核表达载体PGEX-6P-1上,构建重组表达质粒PGEX-6P-1-TGEV-M,经IPTG诱导,获得以包含体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白作为免疫原免疫大白兔制备兔抗TGEV-M抗体,进行效价测定及生物活性检测。结果表明,多抗效价达1:262 144;间接ELISA和间接免疫荧光试验说明,此多抗可与TGEV-M重组蛋白及TGEV发生抗原抗体反应。此多抗可作为鉴别诊断试剂将TGEV从众多猪源病毒中区分出来。; 任晓峰邹昊孙雪娇; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒原核表达抗体制备

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教育部科学技术研究重点项目(212038)

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