国家自然科学基金(30371445)
- 作品数：15 被引量：45H指数：4
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- HPV18-E6基因SiRNA对喉癌细胞的生长抑制作用
- 2008年
- 目的:探讨小分子干扰RNA(SiRNA)对喉癌细胞系Hep-2细胞中人乳头状瘤病毒HPV18型E6基因mRNA表达的干扰作用。方法:用Ambion公司pSilencer4.1CMV构建针对HPV18-E6基因的SiRNA真核表达载体,以携带HPV18-E6基因的人喉癌Hep-2细胞系为靶细胞,通过阳离子脂质体法转染SiRNA表达载体。RT-PCR分析转染后细胞HPV18-E6基因表达;Westernblot试验观察干涉后HPV18-E6蛋白的表达;流式细胞仪分析细胞增殖周期的改变。结果:成功构建了人HPV18-E6基因的RNA干涉真核表达载体psil-svvE6,并在Hep-2细胞中有效地发挥了对HPV18-E6基因表达的干涉作用。细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡。结论:HPV18-E6基因在喉癌细胞Hep-2生长中可能起到非常重要的作用,有望成为逆转喉癌细胞永生化的靶点。
- 吴雅岚张惠中成诗银
- 关键词：SIRNA喉癌基因治疗
- 胃癌组织P16和P53蛋白表达的研究
- 2010年
- 目的研究胃癌组织中P16和P53蛋白的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法,对57例胃癌组织和癌旁组织、38例正常胃组织中p16和p53基因表达产物进行检测,并结合临床进行讨论和分析。结果胃癌组织中P16蛋白的阳性率为21.1%(12/57),明显低于癌旁组织59.6%(34/57)和正常胃组织89.5%(34/38,P<0.05);P53蛋白的阳性率为80.7%(46/57),明显高于癌旁黏膜组织42.1%(24/57)和正常胃组织0%(0/38,P<0.05)。P16和P53蛋白表达与胃癌组织学类型、浸润深度、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论胃癌组织P16和P53蛋白的异常表达与胃癌发生发展、淋巴结转移和预后可能有关。
- 聂书伟李陕区张惠中
- survivin基因启动子调控的HSV-tk真核表达载体的构建及在人喉癌细胞中的特异性表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建survivin基因启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶(humansimplexvirus-thymidinekinase,HSV-tk)真核表达载体,检测其在人喉癌细胞中的表达。方法PCR克隆survivin基因启动子与tk基因,双酶切后分别插入pCI-neo真核表达载体中,酶切鉴定后用脂质体法转染喉癌细胞(Hep-2)和正常细胞(7702),RT-PCR法比较两种细胞tk基因的表达情况。结果成功构建了survivin启动子调控的tk基因真核表达载体pCI-neo/survivin-tk;并通过RT-PCR检测出survivin启动子调控的表达载体在喉癌细胞中有表达,而在正常细胞中无明显表达。结论survivin启动子具有肿瘤特异性,有可能解决喉癌基因治疗中的特异性杀伤问题。
- 卞卡张惠中高萍王燕成诗银
- 关键词：SURVIVIN基因启动子喉癌TK基因
- Survivin基因启动子调控的肿瘤特异性表达载体的构建被引量：1
- 2007年
- 目的:扩增survivin基因启动子,构建survivin启动子调控的真核表达载体,验证其在肿瘤细胞的特异性表达。方法:以Hep-2细胞基因组DNA为模板,PCR扩增survivin启动子;利用核酸内切酶双酶切sur-vivin启动子基因片段和pShuttle质粒,构建载体pSurp,酶切和测序鉴定;分别双酶切pSurp载体和pEGFP-C1载体,构建survivin启动子调控的真核表达载体pSurp-EGFP,脂质体转染Hep-2细胞及血管内皮细胞ECV304,荧光显微镜下观察EGFP的表达,Western blot方法验证该基因的蛋白表达。结果:成功扩增survivin基因启动子并构建survivin基因启动子调控的pSurp-EGFP真核表达载体。脂质体法转染Hep-2细胞和血管内皮细胞ECV304,在荧光显微镜下见Hep-2细胞发出较强的绿色荧光,而ECV304细胞没有绿色荧光;Western blot的结果也确证了EGFP蛋白仅在Hep-2细胞表达。结论:Survivin启动子的成功克隆与其真核表达载体的构建,为肿瘤的特异性基因治疗奠定了实验基础。
- 白万胜王军利卞卡成诗银张惠中刘丽
- 关键词：SURVIVIN启动子绿色荧光蛋白基因治疗
- 脑胶质细胞增生的磁共振成像研究被引量：2
- 2011年
- 目的研究脑胶质细胞增生的磁共振成像(MRI)表现,并分析其特征以提高对该病的诊断价值。方法回顾性分析2005年1月至2009年12月经开颅手术和病理检查证实、且有完整记录的脑胶质细胞增生患者18例的MRI表现,病程4个月至5年,平均2.5年。症状为头痛、头晕13例,面部肌肉抽搐3例,反复发作性意识丧失2例。扫描设备用GE Sigma 1.5 T MR扫描仪,均行常规MRI和增强扫描。结果 18例患者中,病变位于右侧颞顶叶和左侧颞叶各5例,右侧额叶4例,脑桥左侧3例和左侧小脑半球1例。组织学表现为神经节细胞变性、神经细胞嗜节现象及胶质细胞增生。MRI显示,病变直径1.6～4.8 cm,病灶表现为皮质或皮质下脑组织肿胀,呈片状略长T1、长T2信号;在液体衰减反转恢复序列T2加权成像上病灶呈略高信号。结论 MRI对脑胶质细胞增生的诊断正确率较高且能综合多序列影像,对脑胶质细胞增生的基础和临床研究具有一定的指导作用。
- 李陕区杨博赵振伟张惠中李扬
- 关键词：磁共振成像组织病理学神经外科
- stathmin基因的RNA干涉抑制人白血病K562细胞体外增殖的作用被引量：1
- 2008年
- 目的:研究RNA干涉(RNA interference,RNAi)抑制stathmin基因表达后对人白血病K562细胞体外增殖的作用。方法:将合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体。酶切及测序鉴定。脂质体法转染重组质粒入K562细胞,RT-PCR检测其对mR-NA的干涉效果;MTT比色法检测K562细胞体外增殖能力。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建重组质粒。RT-PCR显示所构建的干涉载体成功地抑制了目的基因的转录,同时细胞增殖活性降低。结论:RNA干涉成功抑制stathmin基因表达并使人白血病K562细胞体外增殖活性明显降低。
- 吴冰白海王存邦王燕张惠中
- 关键词：STATHMINRNA干涉真核表达载体K562细胞
- Stathmin基因在人成骨肉瘤细胞中的表达及意义被引量：7
- 2004年
- 背景与目的:Stathmin作为细胞信号转导分子在细胞分化及恶性肿瘤发生、发展上发挥重要作用。本研究旨在探讨Stathmin基因在人成骨肉瘤细胞中的表达,并探讨阻断其表达对该肿瘤细胞的生物学行为的影响。方法:RT-PCR及原位杂交法检测2个人成骨肉瘤细胞系及45例人成骨肉瘤组织中Stathmin基因表达情况;以高表达Stathmin基因的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为靶细胞、反义Stathmin(ASODN)为阻断剂,通过MTT实验观察ASODN对该细胞系的生长抑制作用,并用流式细胞仪分析其对细胞增殖周期的影响。结果:Stathmin基因在2个成骨肉瘤细胞系高表达,45例成骨肉瘤组织中24例呈阳性表达(阳性率为53.3%),10例正常组织中2例呈弱阳性表达,Stathmin在人成骨肉瘤组织的表达与正常组织中的表达有显著性差异(P<0.05)。ASODN明显抑制成骨肉瘤细胞的生长(P<0.05)。SOSP-9607在ASODN作用下,细胞分裂阻滞在分裂期的中期,并诱导细胞发生凋亡。结论:Stathmin基因在人成骨肉瘤中高表达,该基因有望成为成骨肉瘤生物治疗中的重要靶点。
- 张惠中高萍闫露林芳
- 关键词：STATHMIN基因成骨肉瘤细胞细胞表达生物学行为
- SiRNA真核表达载体阻断HeLa细胞stathmin基因表达研究被引量：1
- 2005年
- 目的构建人stathmin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对HeLa细胞中stathmin基因表达的干涉作用.方法将合成的siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体,酶切及测序鉴定.脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选后RT-PCR检测其对stathmin基因mRNA的干涉效果.结果经酶切及测序鉴定,成功构建siRNA真核表达载体.经脂质体转染HeLa细胞后,RT-PCR显示所构建的干涉stathmin基因的真核表达载体成功地抑制了目的基因的表达,HeLa细胞中stathmin基因的mRNA表达水平明显降低.结论成功构建了人stathmin基因的RNA干涉真核表达载体pSilencer-S1和pSilencer-S2,并在HeLa细胞中有效地发挥了对stathmin基因表达的干涉作用.
- 王燕吴冰苏海川刘丽林芳张惠中
- 关键词：STATHMIN真核表达载体HELA细胞
- survivin启动子的克隆及在HeLa细胞中控制GFP特异性表达被引量：7
- 2005年
- 目的:扩增survivin基因启动子并构建带有survivin启动子的pEGFPN1真核表达载体,检测survivin基因启动子在HeLa细胞中的特异表达活性.方法:①以HeLa细胞基因组DNA为模板,PCR扩增survivin启动子,回收扩增产物并插入pGEMTEasy载体(T/Surp),测序鉴定.②分别双酶切TSurp载体和不含CMV启动子的pEGFPN1载体,回收surviv启动子酶切片段及pEGFPN1酶切线性化片段,连接回收产物构建携带survivin启动子pEGFPN1真核表达载体(pEGFN1/Surp),酶切鉴定.③转染HeLa细胞及正常血管内皮细胞ECV304,在荧光显微镜下观察GFP的表达.结果:酶切及测序证实成功扩增survivin基因启动子,并构建了携带有suvivin基因启动子的pEGFPN1真核表达载体.转染HeLa细胞和正常血管内皮细胞ECV304,在荧光显微镜下见HeLa细胞发出较强的绿色荧光,而在ECV304细胞未见绿色荧光结论:成功克隆的肿瘤特异性survivin启动子在HeLa细胞具有较强的肿瘤特异性启动活性,为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定了实验基础.
- 吴冰林芳刘丽王燕张惠中
- 关键词：基因疗法GFP
- Stathmin基因表达与肿瘤化疗药物敏感性的关系被引量：11
- 2005年
- 目的:探讨8种肿瘤细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和泰索帝(docetaxel,DOC)两种化疗药物的敏感性以及该敏感性与肿瘤细胞内Stathmin基因表达之间的关系.方法:采用MTT法和形态学观察,根据两种药物对细胞的相对抑制率,分析8种肿瘤细胞对两种药物的敏感情况;应用实时荧光定量PCR技术分析比较上述细胞Stathmin基因表达情况.结果:8种肿瘤细胞对VCR的敏感程度(相对抑制率)依次为:骨肉瘤细胞9607,58%,9901,56%;宫颈癌细胞Hela,37%;肝癌细胞HHCC,34%;肺癌细胞A549,31%;喉癌细胞Hep2,17%;胃癌细胞MKN45,16%;肝癌细胞7721,15%.对DOC敏感程度依次为:9607,48%;Hela,46%;9901,44%;Hep2,34%;A549,31%;MKN45,15%;HHCC,12%;7721,3%;Stathmin基因在各肿瘤细胞中具有不同程度的表达,其表达强度与各肿瘤细胞对两种药物的敏感性有关.结论:肿瘤细胞中Statnmin基因表达水平与其化疗药物敏感程度有关,检测Statnmin基因表达水平对临床化疗药物的选择有一定的指导意义.
- 井晓荣刘丽赵辉张惠中
- 关键词：长春新碱泰索帝MTT试验实时定量PCR
