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中国人极低密度脂蛋白受体基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达被引量：8: 2000年; 为了研究极低密度脂蛋白受体结构与功能的关系 ,本文利用反转录聚合酶链反应技术从中国人心肌组织中克隆出极低密度脂蛋白受体的全长cDNA后 ,将其插入真核表达载体pcDNA3获得重组体pCD -VR。测序结果发现 ,这一源于中国人的极低密度脂蛋白受体基因cDNA的碱基序列与文献报道基本相符。反转录聚合酶链反应检测证实 ,转染pCD -VR的中国仓鼠卵巢细胞可有效表达极低密度脂蛋白受体mRNA。脂蛋白结合实验结果发现 ,转染的中国仓鼠卵巢细胞结合极低密度脂蛋白的能力明显增高。; 屈伸王剑波刘志国邓耀祖冯宗忱; 关键词：低密度脂蛋白卵巢细胞动脉粥样硬化

不同重复序列缺失的极低密度脂蛋白受体基因转染的中国仓鼠卵巢细胞与β-极低密度脂蛋白的结合效应: 2002年; 为了探索极低密度脂蛋白受体配体结合域中 8个重复序列在结合脂蛋白中的作用 ,利用基因缺失诱变的方法 ,构建了不同重复序列缺失的极低密度脂蛋白受体缺失突变真核表达载体 ,并将各重组体转移至体外培养的中国仓鼠卵巢细胞。通过逆转录—聚合酶链反应检测到外源基因的表达。转染细胞与DiI标记的 β 极低密度脂蛋白结合实验发现 :重复序列 1,2缺失的极低密度脂蛋白受体结合 β 极低密度脂蛋白的能力明显降低。为进一步研究极低密度脂蛋白受体结构与功能的关系奠定了基础。; 郭红亮刘志国田俊冯宁屈伸; 关键词：极低密度脂蛋白脂蛋白受体基因转染中国仓鼠卵巢细胞逆转录-聚合酶链反应

VLDL-R中配体结合重复序列的结合特性及结构分析被引量：3: 2004年; 目的　研究VLDL R中 8个配体结合重复序列 (ligand bindingrepeats ,LBR)在配体结合中的作用并探讨结合位点的结构。方法　采用基因缺失诱变方法 ,构建不同LBR缺失的VLDL R重组体。将其分别导入无LDL R功能性表达的ldl A7细胞。配体结合实验观察转染细胞与荧光标记的VLDL、β VLDL的结合能力 ,并采用同源建模的方法预测受体N 端 32 8个氨基酸的配体结合域的空间结构。结果　配体结合实验显示LBR1和LBR2对受体结合VLDL、β VLDL最为重要 ;LBR3对结合VLDL也有重要作用 ,但对结合 β VLDL无明显影响。模型显示受体N 端32 8个氨基酸的配体结合域呈现弧形口袋样结构 ,前 3个LBR结构紧凑 ,呈棒状 ,负电荷相对集中 ,与功能特性吻合 ,LBR5与LBR6之间的连接区赋予口袋结构一定的伸缩性 ,适应配体大小的变化。结论　受体N 端的前 3个LBR含有与配体结合的位点。该区域特定的空间结构与理化特性是结合功能的重要基础。; 刘志国屈伸宗义强邓耀祖冯宗忱; 关键词：VLDL LBR 受体结合变方同源建模重组体

极低密度脂蛋白受体研究进展被引量：4: 2003年; 极低密度脂蛋白受体 (VLDL R)属于低密度脂蛋白受体 (LDL R)超家族 ,结构上与LDL R极为相似 ,而在结合特性、组织分布及生理功能上存在较大的差异 .近年来的研究表明 ,VLDL R配体结合域中的重复序列参与配体的结合 ,并已初步确定受体N端的 4个重复序列中含有与配体结合的重要位点 ;在哺乳动物体内 ,VLDL R主要分布于脂代谢活跃的组织细胞 ,如 :心肌、骨骼肌和脂肪组织等 ,表明其与脂质尤其是甘油三酯的代谢密切相关 ;动脉粥样硬化 (AS)的病变斑块组织中该受体的表达量很高 ,推测VLDL R参与了AS的病变过程 ;在不同的细胞内 ,VLDL R及其亚型的表达并不一致 ,并发现与各种生理、病理变化相关 ,已经发现多种转录因子参与VLDL R表达的调控 ;基因敲除研究也不断揭示VLDL R新的功能意义 ,特别是发现了VLDL R在脑的发育过程中的重要信号作用 ,这些研究已使人们对VLDL; 刘志国屈伸; 关键词：极低密度脂蛋白受体

全长及缺失VLDL受体基因转染的CHO细胞与β-VLDL的结合效应被引量：6: 2000年; 为探讨 VLDL受体结合域中 8个重复序列在结合 VLDL中所起的作用 ,利用构建的全长VLDL受体 c DNA和缺失 5个重复序列的该受体 c DNA重组表达载体分别导入 CHO细胞中 .RT- PCR可检测到外源性 VLDL受体基因的表达 .受体与配体结合研究表明 ,转染全长 VLDLR重组体的 CHO细胞结合β- VLDL的能力明显高于转染 VLDLR缺失重组体的 CHO细胞 ,表明人VLDL受体在 CHO细胞中能有效表达 ,而缺失 5个重复序列的; 冯宁周华屈伸邓耀祖冯宗忱陆国平龚兰生; 关键词：基因表达 CHO细胞

DiI标记脂蛋白改良法的建立被引量：3: 2002年; 为了改进脂蛋白的荧光标记方法 ,本实验采用经超速离心后的离心管底层血清取代商品化的去脂血清作为脂蛋白标记时的介质 ,与荧光染料DiI混合孵育。经超速离心分离后获得DiI标记的极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及β 极低密度脂蛋白。本方法在标记过程中不用去脂血清 ,降低了标记成本并缩短了超速离心时间。配体与受体结合实验结果发现 ,用本方法标记的脂蛋白能以可饱和方式结合体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞和中国仓鼠卵母细胞。表明本方法标记的脂蛋白保持了正常脂蛋白的配体功能。; 王建波王淳本刘志国田俊屈伸; 关键词：荧光标记脂蛋白受体

VLDL-受体的配体结合结构域结构分析被引量：2: 2003年; 极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)的配体结合域具有8个富含半胱氨酸的配体结合重复序列(ligand-binding repeats,LBR),被认为是与配体结合的部位。该受体与含7个类似重复序列的低密度脂蛋白受体(LDL-R)的配体结合特性明显不同。为了明确VLDL-R中8个LBR在配体结合中的作用并探讨结合位点的结构,本研究采用计算机辅助蛋白质结构预测方法,在二级结构分析的基础上,通过同源建模方法预测受体N-端328个氨基酸的配体结合域空间结构,结果显示该区域呈现弧形口袋样结构,其中前3个LBR结构紧凑,呈棒状,负电荷相对集中,推测这一特征结构是配体结合的重要结构基础,结构分析同时表明在LBR5与LBR6之间连接区的弹性结构可以赋予结合位点一定的伸缩性,利于其与不同配体的结合。本研究预测结果首次提出了VLDL-R配体结构域结构及结合位点的结构特征,并与已有的实验结果一致。; 刘志国江会峰屈伸; 关键词：极低密度脂蛋白受体同源模建

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国家自然科学基金(39670162)