厦门市科技计划项目(3502Z20084002)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 相关作者：李博安刘荣福耿爱民占鹏程更多>>
- 相关机构：厦门大学福建医科大学更多>>
- 发文基金：厦门市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 缺氧诱导因子1α的RNAi表达载体构建及其在前列腺癌PC-3细胞研究中的作用
- 2011年
- 本研究根据pSUPER.retro.puro载体的特有结构,构建缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的RNA干扰(RNAi)表达载体,将其与GFP共转染前列腺癌PC-3细胞36 h后转染效率为(87.15±2.36)%;通过与对照组的比较,质粒转染PC-3细胞48 h后可显著降低胞内HIF-1αmRNA及蛋白的表达;利用重组质粒的嘌呤霉素的抗药性,加药筛选2周,可观察到单克隆生成;收集稳定转染得到的pSUPER-siHIF-1α/PC-3细胞株,再次通过West blot检测到PC-3细胞的HIF-1α蛋白表达亦显著降低。结果表明,利用RNAi技术可成功构建抑制前列腺癌HIF-1α表达的si RNA重组表达载体,为研究HIF-1α在前列腺癌发病机理及增殖、转移中的功能奠定了基础,同时可以用于其在其他肿瘤的功能研究。
- 刘荣福耿爱民李博安
- 关键词：缺氧诱导因子1前列腺癌PC-3细胞
- 针对前列腺癌HIF—1α的2种pSUPER RNAi焦统的构建及鉴定
- 2010年
- 目的构建2种抑制HIF—1α的siRNA表达载体。方法根据GenBank中HIF—1α序列信息并结合2种pSUPER载体的共同的酶切位点结构，化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向HIF-1α基因的寡核苷酸链，各60个碱基、退火、克隆到经BglⅠ、HindⅢ双酶切的2种pSUPER载体上，获得的2种重组RNAi质粒转化感受态大肠杆菌，挑选阳性克隆，抽取重组质粒，EcoRⅠ、HindⅢ双酶切电泳、测序鉴定，培养前列腺癌PC-3细胞通过Western blot检测2种重组RNAi载体干扰效果。结果将重组构建的2种pSUPER质粒经双酶切电泳分析及插入基因片段进行序列分析，目的基因片段成功插入到设计位点，并且序列完全一致。2种重组质粒可显著降低前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达。结论2种重组RNAi载体的成功构建，为进一步研究HIF—1α在前列腺癌发病机理及增殖、转移中的功能奠定了基础，同时可以用于其在其他肿瘤的功能研究。
- 刘荣福耿爱民李博安
- 关键词：前列腺肿瘤低氧
- pcDNA3.1-HIF-1 α重组质粒的构建及其初步鉴定
- 2011年
- 目的探讨HIF-1α与前列腺癌发病机制之间相关性提供研究工具。方法采用Trizol法裂解细胞,提取HIF-1α且以该RNA为模板逆转录为cDNA,然后行PCR处理扩增HIF-1α基因功能片段区域,克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,转化至大肠杆菌DH-5α,小提质粒,酶切凝胶电泳鉴定,序列测定,经鉴定为正确序列后中抽质粒,采用Fugene试剂转染至前列腺癌细胞PC-3,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1α的前列腺癌细胞系pcDNA3.1-HIF-1α-PC-3,采用Western印迹鉴定重组质粒的表达。结果 PCR扩增基因片段大小为2.89 kb,克隆至真核载体pcDNA3.1,酶切凝胶电泳可见两个条带,大小大约为5.3 kb和2.89 kb,与预期的大小相符合,序列测定与Genbank公布的一致,Western印迹验证其在细胞内能表达。结论重组质粒pcDNA3.1-HIF-1α能够在前列腺癌PC-3表达,构建成功,为研究HIF-1α与前列腺癌提供了一个工具。
- 刘荣福占鹏程李博安
- 关键词：HIF-1Α重组质粒
