国家自然科学基金(30371402)
- 作品数：13 被引量：19H指数：3
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- 乙肝病毒X基因真核表达载体pEGFP-X的构建及其表达被引量：1
- 2006年
- 目的:构建pEGFP-X真核表达载体,观察其在肝癌细胞株中的表达。方法:从质粒pcDNA3.1(+)-X酶切获HBV X基因片段,克隆至pEGFP-N1;用酶切、PCR和测序鉴定pEGFP-X载体;用脂质体法,将重组载体(pEGFP-X)和空载体(pEGFP-N1)瞬时转染肝癌细胞细胞株BEL-7402;分别用RT-PCR、荧光显微镜鉴定HBV X和EGFP基因表达。结果:鉴定证实pEGFP-X载体构建成功;该质粒瞬时转染的BEL-7402有HBV X基因表达,并发绿色荧光。结论:构建的pEGFP-X真核载体能在BEL-7402中表达,绿色荧光蛋白示踪利于表达HBV X基因稳定细胞株的筛选,并为探讨HBV X基因在HCC中的致瘤机理提供实验模型奠定基础。
- 王文龙贺兴鄂杨旭蒋永芳雷建华孙会卿
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因真核表达载体BEL-7402
- 靶向HBx基因shRNA载体稳定表达人肝癌细胞的建立
- 2009年
- 本研究采用整合有HBV DNA而HBsAg表达阴性的人肝癌细胞株MHCC97-H，应用免疫荧光法初步研究HBx表达，并从基因组中克隆HBx基因，采用RNA干扰（RNAi）技术，构建靶向该HBx基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体，通过转染和筛选，研究shRNA载体在MHCC97-H细胞中稳定表达对HBx基因表达的影响，最终构建稳定表达靶向整合HBx基因的shRNA载体的人肝痛细胞模型，为进一步研究构建平台。
- 贺兴鄂孙会卿杨旭雷建华童明王文龙
- 关键词：肝炎病毒乙型基因疗法RNA干扰
- 胸腺五肽联合乙肝疫苗对HBsAg低滴度慢性无症状携带者疗效分析被引量：1
- 2004年
- 目的观察胸腺五肽联合乙肝疫苗对HBsAg低滴度慢性无症状携带者的疗效。方法将低HBsAg滴度(<20ng/ml)的慢性乙肝病毒感染者治疗组分为A组HBsAg滴度<500ng/ml(n=29)、A1组500ng/ml10mIU/ml;对照B组只有2例(2/23,87%)感染者同时出现HBsAg<05ng/ml和HBsAb>10mIU/ml。治疗后A组与B组HBsAg和HBsAb滴度相比较,P值均<005,差异有显著性意义。治疗后A1和B1组HBsAg和HBsAb滴度相比较,P值均>005,差异无显著性意义。结论胸腺五肽联合乙肝疫苗对HBsAg滴度<500ng/ml的慢性无症状携带者,有明显降低HBsAg和升高HBsAb滴度的作用,有部分感染者可清除乙肝病毒。
- 贺兴鄂王文龙田沂雷建华
- 关键词：滴度HB胸腺五肽乙肝疫苗无症状携带者
- 两个不同筛选特性的表达HBV X基因肝癌细胞模型的建立
- 2005年
- 目的:构建两个不同筛选特性的表达HBV X基因肝癌细胞模型。方法:应用脂质体介导转染克隆有HBV X全基因真核表达载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X入肝癌细胞HepG2,hygromyc in和neomyc in筛选单细胞克隆,传代培养一定时期后应用PCR,RT-PCR和W estern b lot方法鉴定HBV X基因的表达。结果:转染后成功筛选出耐hygromyc in或neomyc in的单细胞克隆,并能传代培养一定时期。PCR,RT-PCR和W estern b lot结果显示HBVX基因获得表达。结论:成功构建不同筛选特性的两个HBV X基因表达肝癌细胞模型。
- 贺兴鄂雷建华杨旭王文龙罗红雨梁骏
- 关键词：HBVX基因真核表达载体肝癌细胞
- RNA干扰HBx基因对肝癌细胞化疗效果的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨RNA干扰技术和传统的化疗方法联合应用对肝癌细胞生长抑制作用的影响,并选择高效的治疗组合,研究其凋亡机制。方法:鉴定3组肝癌细胞——MHCC97-H(原肝癌细胞株),HK3细胞(转染空质粒的MHCC97-H细胞)和21543细胞(转染含HBx-shRNA质粒的MHCC97-H细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBx mRNA沉寂作用,CCK8和TUNEL分别检测RNA干扰HBx后化疗药物对MHCC97-H肿瘤细胞生长的抑制及诱导细胞凋亡情况。结果:RT-PCR结果显示,与MHCC97-H细胞组比较,21543细胞的HBx mRNA水平下降约91%,HK3细胞HBx mRNA水平下降不明显;RNA靶向干扰HBx基因后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC97-H细胞)和HK3细胞增殖明显减慢,而后两种细胞差别无统计学意义;3种不同细胞加用3种不同浓度的氟尿嘧啶(0～120mg/L)、顺铂(0～32mg/L)后细胞生长明显减慢并呈浓度依赖性,以RNA靶向干扰HBx基因后的21543细胞生长抑制最明显;相同浓度的氟尿嘧啶对3组不同肝癌细胞均可引起细胞凋亡,以21543细胞凋亡最明显。结论:RNA干扰HBx可明显抑制肝癌细胞的增殖,并增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性;RNA干扰HBx基因和化疗药物联合应用使肝癌细胞凋亡更明显,细胞增殖速度明显减慢。
- 何艳贺兴鄂孙会卿王文龙雷建华
- 关键词：肝癌细胞RNA干扰HBX基因细胞周期化疗
- 应用短发夹状RNA研究HBV X基因表达对三氧化二砷诱导HepG2细胞凋亡特性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:应用shRNA(短发夹状RNA)介导的RNA干扰研究HBV X基因表达对三氧化二砷(As2O3)诱导HepG2细胞凋亡特性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)还原法分析经2.0μmol/L As2O3处理的HepG2细胞和表达HBVX基因的HepG2-X细胞的生长抑制率。以未处理细胞为对照,流式细胞术分析细胞凋亡比和细胞周期,采用Caspase3/cpp32活性比色试剂盒测定As2O3处理后细胞裂解物中Caspase3的活性。应用脂质体介导HBX序列特异性shRNA表达载体pXi-1、pXi-2和序列无关对照pXi-3转染HepG2-X,再次分析细胞凋亡比、细胞周期和Caspase3活性的变化。结果:MTT法表明2.0μmol/L As2O3处理36小时具有理想的细胞生长抑制率。As2O3作用后细胞凋亡比明显增高(P<0.05),G2/M期细胞增多(P<0.05)。不同HBV X基因表达水平的细胞As2O3诱导的细胞凋亡比有统计学差异(P<0.05),HepG2-X与HepG2比较,其As2O3诱导的细胞凋亡比下降,且细胞裂解物的Caspase3活性下降(P<0.05),但应用序列特异性shRNA抑制HBV X基因表达后凋亡比和Caspase3活性可再次增高,而作为对照的序列无关的shRNA则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。结论:As2O3可诱导HepG2细胞凋亡。表达HBVX基因后As2O3诱导的HepG2细胞凋亡比和Caspas3活性下降,特异性shRNA抑制HBV X基因表达后则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。
- 贺兴鄂雷建华杨旭孙会卿童明
- 关键词：乙型三氧化二砷HEPG2细胞细胞凋亡
- 不同e抗原水平检测方法对抗HBV治疗疗效评价结果的影响
- 2005年
- 目的 :分析血清e抗原水平不同监测方法可能对抗HBV治疗中疗效评价和追踪期复发率评价的影响。方法 :对 69例α干扰素 (IFN)或拉米夫定 (LAM )抗HBV治疗评价为“完全应答”的慢性乙型肝炎患者追踪观察 ,比较 3 1例以ELISA法监测血清e抗原水平变化的患者和 3 8例应用时间分辨免疫荧光法的患者完全停药后的复发率 ,同时进行性别比、平均年龄、开始治疗时的ALT和HBVDNA水平及治疗方案的可比性分析。结果 :两组患者上述因素具有可比性 ,以ELISA法检测血清e抗原者追踪期复发率为 3 2 3 % ,应用时间分辨免疫荧光法者为 10 .5 % ,两者有统计学差异 (χ2 =4 .985 ,P =0 .0 2 6)。结论 :抗HBV治疗的疗效评价 ,其结果的客观性可能受e抗原水平监测方法的影响。推测时间分辨免疫荧光法有助于提高疗效评价的客观性 ,避免误判 ,从而指导合理用药 ,减少复发。
- 贺兴鄂雷建华杨旭王文龙田沂黄力
- 关键词：E抗原抗HBV治疗疗效免疫荧光法客观性
- Effects of HBV X gene and arsenic trioxide on the expression of p53 in cultured HepG2 cells被引量：4
- 2007年
- 背景肝炎 B 病毒( HBV ) X 蛋白质( HBx )和 p53 能互相，在 transcriptional 水平和 HBx 的下面调整能在它的 transactivation 域以内与 p53 绑蛋白质并且禁止 p53 protein.In 的函数最近的年， p53 蛋白质的表达式上的砷三氧化物( As2O3 )的效果广泛地被学习了，当很少对 p53 protein.This 学习的活动被知道时被承担描出在 HepG2 的 p53 蛋白质表示(水平和活动)上的 HBV X 基因和 As2O3
- LEI Jian-hua HE Xing-e YANG Xu ZHANG Min LIAN Jun LUO Hong-yu WANG Wen-long
- 关键词：乙肝病毒X基因三氧化砷肿瘤抑制蛋白
- 构建不同筛选特性的HBV X基因真核表达载体被引量：2
- 2005年
- 目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体。方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEMR○-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X。结果:从质粒pEcob6成功PCR扩增出HBV X全基因并克隆至质粒pEasy-X,酶切、PCR及测序均证实真核表达载体质粒pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X构建成功。结论:具有不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体业已成功构建。
- 贺兴鄂雷建华杨旭王文龙罗红雨梁骏
- 关键词：真核表达载体基因真核表达载体HBVXPCDNA3.1(+)多克隆
- RNA干扰肝癌细胞HBX基因表达及细胞增殖的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨RNA干扰技术对肝癌细胞乙型肝炎病毒X基因(HBX)表达和细胞增殖的影响。方法鉴定转染无关的对照序列(HK3细胞)和针对HBX基因shRNA的稳定肝癌细胞株(21543细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBX基因mRNA沉寂作用,利用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果复苏后细胞形态差别不大;RT-PCR显示相对于MHCC-97H细胞,21543细胞的HBXmRNA水平的下降约91%,HK3细胞的HBXmRNA水平下降不明显;靶向HBX的RNA干扰后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC-97H细胞)和对照细胞(HK3细胞)增殖明显减慢,而后两种细胞差别不显著;21543细胞周期显示RNA干扰后细胞延缓进入S期,增殖活性明显减低。结论RNA干扰可降低肝癌细胞HBX表达水平,并可明显抑制肝癌细胞的增殖,改变细胞生长周期。
- 孙会卿贺兴鄂王文龙何艳雷建华
- 关键词：肝癌细胞RNA干扰乙型肝炎病毒X基因细胞周期
