河北省科技计划项目(11220103D-9)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：齐靖董祯李桂琴张玉星闫洪波更多>>
- 相关机构：河北经贸大学河北女子职业技术学院河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北省科技计划项目河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸭梨多酚氧化酶基因cDNA全长的克隆和生物信息学分析被引量：4
- 2012年
- 为了从分子水平深入了解鸭梨多酚氧化酶结构特点,基于已知的鸭梨多酚氧化酶基因cDNA片段序列设计引物,以鸭梨果实总mRNA为模板,对该基因cDNA5’端和3’端未知序列进行了RACE扩增,最终获得鸭梨多酚氧化酶基因cDNA全长序列。该序列长度为2126bp,开放性读码框位于136～1917bp之间,可编码593个氨基酸残基。对该基因所翻译的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果表明基因编码的多酚氧化酶属酪氨酸酶超级家族成员,三级空间结构为可溶性球状蛋白,不具备跨膜结构,在细胞中的定位应该位于类囊体腔中。这些生物信息的获得将为今后应用生物技术开展鸭梨多酚氧化酶的调控,从而抑制鸭梨果实褐变提供十分重要的参考资料。
- 李桂琴齐靖闫洪波高志华
- 关键词：鸭梨多酚氧化酶RACE基因克隆生物信息学分析
- 鸭梨ACC氧化酶基因cDNA片段的克隆及农杆菌介导的反义遗传转化被引量：5
- 2014年
- 研究根据ACC氧化酶基因的保守序列设计一对特异性引物,以鸭梨果实为试材,借助RT-PCR方法扩增得到一条长度为831 bp的鸭梨ACC氧化酶基因cDNA片段,该片段编码276个氨基酸残基,与其它梨品种ACC氧化酶基因序列同源性均在94%以上。将此片段反向插入真核表达载体pBI121的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建了鸭梨ACC氧化酶基因的反义表达载体,并在农杆菌LBA4404的介导下实现对鸭梨组培苗的遗传转化。经PCR鉴定证实共有4株鸭梨组培苗中外源基因得到成功转化,Southern杂交显示在这4株转基因鸭梨中除有1株外源基因呈双拷贝外,其余3株中外源基因均以单拷贝形式存在。
- 齐靖董祯张玉星
- 关键词：ACC氧化酶反义表达载体
- 鸭梨PPO与GFP融合基因的烟草转化及亚细胞定位观察
- 2014年
- 将鸭梨PPO基因与绿色萤光蛋白GFP基因相融合共同进行遗传转化的方式,对鸭梨多酚氧化酶开展细胞定位研究。通过克隆该酶基因除终止密码子TAA外长度为1 779bp的CDS序列,与绿色荧光蛋白基因重组构建了荧光表达载体pBI121-PPO-GFP,借助农杆菌转化烟草,转基因烟草叶片细胞经激光扫描共聚焦显微镜观察,绿色荧光蛋白荧光与叶绿体自发荧光相重合。结果表明鸭梨多酚氧化酶为叶绿体蛋白质。
- 齐靖李桂琴董祯周薇
- 关键词：鸭梨多酚氧化酶基因融合
